田斌斌 郭小鳳 申永霞 李捷

（1.開封市兒童醫(yī)院急診科，河南 開封 475000；2.開封市兒童醫(yī)院新生兒科，河南 開封 475000；3.開封市兒童醫(yī)院內(nèi)科門診，河南 開封 475000）

支氣管哮喘（BA）是指以反復(fù)發(fā)作的喘息、咳嗽、氣促、胸悶為主要癥狀表現(xiàn)的小兒疾病，常在夜間或凌晨發(fā)作或加劇，主要病因包括個體過敏體質(zhì)、肥胖、遺傳因素等[1]。臨床多表現(xiàn)為煩躁不安、呼吸困難，以呼氣困難為主，往往不能平臥，有時喘鳴音可傳至窒外；危重狀態(tài)時患兒面色蒼白、鼻翼扇動、口唇、指甲紫紺，甚至冷汗淋漓，面容怕恐不安，應(yīng)予積極治療[2]。該病常見并發(fā)癥包括下呼吸道感染，肺部感染，水、電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào)，氣胸，縱膈氣腫，呼吸衰竭和猝死等。

臨床多采用霧化吸入糖皮質(zhì)激素和支氣管擴張劑（β2受體激動劑）的治療方式，可有效改善不良癥狀，但仍有部分重度BA患兒療效不佳[3]。研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、γ干擾素（IFN-γ）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）參與支氣管哮喘免疫反應(yīng)與炎癥反應(yīng)的全過程，但目前臨床對TGF-β1、IFN-γ和Treg水平評估病情程度的研究較少[4]。因此，本研究旨在分析小兒BA中TGFβ1、Treg及IFN-γ水平變化與疾病的相關(guān)性，為疾病的治療和預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年4月至2022年4月收治的小兒BA患者127例為研究對象，設(shè)為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床相關(guān)資料完整，耐受性較好者；患兒年齡＜6歲；全部患兒均符合《支氣管哮喘控制的中國專家共識》中BA診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；無個人及家族過敏性疾病史；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理會批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重造血系統(tǒng)疾病和傳染??；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥；存在認(rèn)知功能障礙和心理問題；有惡性腫瘤和嚴(yán)重全身感染。其中女61例（48.03%），男66例（51.97%），年齡4-6歲，平均年齡5.25±0.33歲。根據(jù)BA疾病嚴(yán)重將觀察組患兒進一步分為：輕度組43例、中度組52例及重度組32例。病情嚴(yán)重程度的判定標(biāo)準(zhǔn)為，輕度：癥狀每周發(fā)作1次以上，但每日發(fā)作次數(shù)小于1次，睡眠及活動受影響，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計值≥80%；中度：臨床癥狀明顯，睡眠及活動受影響，夜間哮喘每周發(fā)作1次以上，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計值在60%-79%；重度：哮喘頻繁發(fā)作，夜間癥狀明顯，體力活動受限，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計值＜60%以下[6]。輕、中、重組一般資料比較無差異，不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 輕、中、重組一般資料比較（n(%)或±SD）

表1 輕、中、重組一般資料比較（n(%)或±SD）

組別 總例數(shù) 性別 年齡(歲) 病程(月) 男 女 輕度組 43 24(55.81) 19(44.19) 4.06±0.89 1.22±1.58 中度組 52 27(51.92) 25(48.08) 3.98±1.23 1.34±1.42 重度組 32 17(53.13) 15(46.88) 4.24±0.57 1.31±1.09

另選取同期在本院行體檢各項指標(biāo)正常的健康兒童113例為對照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床相關(guān)資料完整，耐受性較好；年齡＜6歲；無個人及家族過敏性疾病史；無個人及家族過敏性疾病史；患者及家屬知情同意并簽署知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重造血系統(tǒng)疾病和傳染??；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥；存在認(rèn)知功能障礙和心理問題；有惡性腫瘤和嚴(yán)重全身感染。其中女52例（46.02%），男61例（53.98%），年齡4-5歲，平均年齡4.12±1.27歲。對照組和觀察組的一般資料比較無差異，不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 TGF-β1、IFN-γ水平檢測

采集清晨空腹肘靜脈血5 mL，以3000 r·min-1離心10 min，獲得上層血清，置于-20℃冰箱內(nèi)冷凍待測。采用酶聯(lián)免疫法對血清TGF-β1、IFNγ水平進行檢測（使用來自意大利Instrumentation Laboratory SPA的市售試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作）。

1.2.2 Treg細(xì)胞含量分析

分離PBMC，RPMI1640培養(yǎng)基進行細(xì)胞重懸為2×109L-1，每孔依次加入佛波酯至終濃度50 μg·L-1、離子霉素至750 μg·L-1、莫能星至2 μmol·L-1后，于CO2培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）中培養(yǎng)5 h。以2000 r·min-1的速度離心8 min，棄上清洗滌細(xì)胞。取l×l06PBMC于流式專用試管中，標(biāo)記Treg測量管，在Treg測量管中加入抗人CD4-FITC和CD25-PE單克隆抗體。于室溫環(huán)境下，避光孵育30 min。離心重新懸浮細(xì)胞到200 μL。再加入10 μL PE標(biāo)記的抗人Foxp3抗體，避光、4℃條件下孵育30 min，洗滌重懸，流式細(xì)胞儀（美國貝克曼庫爾特CytoFLEX生產(chǎn)）進行分析。

對比各組血清TGF-β1、IFN-γ水平和血中Treg細(xì)胞含量；分析TGF-β1、IFN-γ及Treg水平與疾病程度的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 27.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）的形式表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用n（%）表示，組間比較采用卡方χ2檢驗；均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組和觀察組的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量

觀察組TGF-β1水平明顯高于對照組，Treg細(xì)胞含量、IFN-γ水平低于對照組（P＜0.05）。詳見表2。

表2 兩組TGF-β1、Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平比較（±SD）

表2 兩組TGF-β1、Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平比較（±SD）

注：與對照組相比，aP＜0.05。

組別 例數(shù) TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg細(xì)胞含量(%) 對照組 113 125.38±32.18 112.34±18.68 8.55±1.92 觀察組 127 287.25±33.02a 62.37±15.23a 5.86±1.77a

2.2 不同嚴(yán)重程度BA患者的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量

TGF-β1水平隨著BA嚴(yán)重程度上升而上升，Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平隨著BA嚴(yán)重程度下降而下降（P＜0.05）。見表3。

表3 不同BA嚴(yán)重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比較（±SD）

表3 不同BA嚴(yán)重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比較（±SD）

注：與輕度組相比，aP＜0.05；與中度組相經(jīng)，bP＜0.05。

組別 n TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg細(xì)胞含量(%) 輕度組 43 168.32±30.21 105.49±18.17 7.88±1.84 中度組 52 256.24±31.48a 70.26±16.33a 6.09±1.32a 重度組 32 302.45±32.15ab 56.39±15.21ab 4.23±1.08ab

2.3 TGF-β1、IFN-γ和 Treg與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

血清TGF-β1水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（r=0.845，P＜0.05）；Treg細(xì)胞含量與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.564，P＜0.05）；血清IFNγ水平與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.564，P＜0.05）。

3 討論

BA是一種表現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性咳嗽、喘鳴和呼吸困難，并伴有氣道高反應(yīng)性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，積極防治小兒支氣管哮喘對防治成人支氣管哮喘意義重大。本次研究結(jié)果顯示，觀察組TGF-β1水平明顯高于對照組，IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量均低于對照組，且血清TGF-β1水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，血清IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)。Treg是近年發(fā)現(xiàn)的一種具有免疫抑制活性的CD4+T細(xì)胞亞群，與自身免疫性疾病的發(fā)生關(guān)系密切，其異常表達可導(dǎo)致自身免疫性疾病[7]。舒姣潔等多位學(xué)者研究中指出，Treg對于自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展都具有重要意義，對其進行深入研究將有助于了解自身免疫性疾病的發(fā)病機制，對疾病預(yù)后判斷、進一步的治療有著深遠(yuǎn)的意義[8]。IFN-γ是II型干擾素的唯一成員，可通過抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)功能在宿主防御中扮演關(guān)鍵角色[9]。能有效活化巨噬細(xì)胞、指導(dǎo)B細(xì)胞免疫球蛋白的合成、類型轉(zhuǎn)化和分泌，在自身免疫和動脈粥樣硬化癥等一些炎癥性疾病過程中起著重要作用[9]。綜上所述，血清TGF-β1、IFN-γ及Treg水平與BA及疾病的嚴(yán)重程度息息相關(guān)，是誘發(fā)疾病進展的重要因素，臨床可聯(lián)合血清TGFβ1、IFN-γ及Treg水平對BA病情進行評估，為臨床制定治療方案提供依據(jù)。