于海琴

(吉林省柳河縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，吉林 柳河 135300）

近幾年，本地肉牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展，在地方政策的扶持下吸引越來越多的農(nóng)民加入到肉牛養(yǎng)殖中，在實(shí)現(xiàn)農(nóng)民增收致富和帶動(dòng)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展方面發(fā)揮了重要作用。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，許多養(yǎng)殖戶對(duì)肉牛常見疾病的癥狀表現(xiàn)、防治措施缺乏了解，特別是病毒性腹瀉等具有較強(qiáng)傳染性的疾病，一旦發(fā)生將會(huì)在牛群內(nèi)傳播、蔓延，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。因此，養(yǎng)殖戶在認(rèn)識(shí)肉牛病毒性腹瀉臨床癥狀、流行特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，樹立科學(xué)的養(yǎng)殖管理理念，做好肉牛免疫接種，掌握肉牛病毒性腹瀉的治療方法，才能保障自身的養(yǎng)殖效益。

1 流行病學(xué)

1.1 病原特性該病的致病病原為牛病毒性腹瀉病毒，屬于黃病科、瘟病毒屬。病毒呈圓形，直徑在30～50nm，具有囊膜，在自然環(huán)境環(huán)境下具有較強(qiáng)的生存能力。但是對(duì)氯仿、乙醚等脂溶劑敏感，在強(qiáng)酸（pH＜3）或高溫（超過55℃）環(huán)境下容易被滅活。在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，根據(jù)致病性的不同，可將該病毒分為2種生物型，一種是致細(xì)胞病變型病毒性腹瀉病毒，另一種是非致細(xì)胞病變型病毒性腹瀉病毒；根據(jù)病毒基因的不同，又可分為I型和II型，每一種型號(hào)的病毒基因中都含有若干種毒株，每種毒株的致病能力和病癥表現(xiàn)也有差異。

1.2 流行特點(diǎn)該病的感染能力較強(qiáng)，自然條件下肉牛、奶牛、水牛等都屬于易感群體，除了在牛群中感染外，如果綿羊、山羊等其他反芻動(dòng)物接觸了帶有病毒的糞便、槽具等，也有較大概率被感染。肉牛一旦患病，其血液、脾臟、骨髓、呼吸道等組織器官中均攜帶有病毒，含有病毒的口鼻分泌物、糞便等是主要傳播途徑。另外，患病母牛的胎盤中也會(huì)攜帶病毒，因此犢牛也會(huì)因?yàn)榇怪备腥径鴰Ф?。該病一年四季均可發(fā)生，其中冬春季節(jié)發(fā)病率相對(duì)較高。新疫區(qū)發(fā)病后，肉牛死亡率較高；老疫區(qū)多為隱性感染，死亡率相對(duì)較低。肉牛在感染病毒后的潛伏期內(nèi)，雖然沒有明顯的癥狀表現(xiàn)，但是生長(zhǎng)發(fā)育相比正常牛要遲緩，如果是母?；疾。瑒t容易造成胚胎死亡或畸形胎。肉牛感染病毒性腹瀉病毒會(huì)產(chǎn)生免疫抑制作用，免疫力嚴(yán)重下降，其他疾病的發(fā)生率也會(huì)相應(yīng)增加。例如患有病毒性腹瀉的肉牛，還會(huì)出現(xiàn)腸胃黏膜病癥，如果兩種病情同時(shí)發(fā)生，病牛的死亡率將達(dá)到90%以上。

2 臨床癥狀

根據(jù)癥狀表現(xiàn)不同，可以將該病分成兩種類型。（1）急性型，病牛體溫突然升高，有時(shí)達(dá)到42℃。體溫居高不下，可持續(xù)3～4d。同時(shí)伴隨有咳嗽、流鼻液、流淚等情況。退熱之后出現(xiàn)腹瀉癥狀，排出水樣狀有腥臭味的稀糞。如果控制不及時(shí)，隨著病情加劇，可在糞便中發(fā)現(xiàn)血絲。另外，患病期間病牛表現(xiàn)出呼吸急促，精神萎靡，呼出氣體有難聞氣味。觀察病牛上顎部分以及鼻孔周圍，可見淺表性潰瘍。病牛退熱后可再次發(fā)熱，整個(gè)發(fā)病期間進(jìn)食量明顯減少甚至是停止進(jìn)食。部分病牛還會(huì)出現(xiàn)皮膚潰瘍、角膜水腫等情況，癥狀嚴(yán)重的病牛通常在5～7d內(nèi)因?yàn)槊撍ソ叨劳?。?）慢性型，病牛基本上無明顯癥狀，偶爾有腹瀉情況，體重會(huì)隨著病程延長(zhǎng)而逐漸降低。眼角經(jīng)常流淚，或者出現(xiàn)糊狀分泌物。

3 剖檢變化

該病的主要病變部位在消化道和淋巴組織，另外胃、腸等器官也會(huì)有不同程度的病變。將病死牛剖檢，可以發(fā)現(xiàn)皮下組織有不同程度的充血情況，尤其是鼻腔處黏膜異常潮紅。齒齦、唇內(nèi)面、舌面等位置有糜爛，個(gè)別病程較長(zhǎng)的病死牛在口腔、鼻鏡等位置的糜爛病灶還會(huì)相互粘連。呼吸道、消化道的黏膜均有嚴(yán)重的潰爛，面積大小不等，小面積的糜爛多為直線排列。胃壁上可見彌散性出血，另外在脾臟、肝臟等臟器中也會(huì)有點(diǎn)狀出血情況。小腸內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)紅色粘稠物，并伴有氣泡。腸系膜淋巴結(jié)腫大、壞死情況。盲腸、直腸等位置也有不同程度的出血。一些因感染病毒死亡的新生犢牛，還有小腦發(fā)育不全、兩側(cè)腦室積水的情況。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 電子顯微鏡檢查從病死牛的口腔潰爛處或者消化道黏膜處提取組織，充分研磨后放置于離心機(jī)中，設(shè)定離心速度4500r/min進(jìn)行處理。將組織物置于生理鹽水中充分搖晃后靜置10min，再使用吸管吸取上層清野，用孔徑為0.2mm的濾器過濾后，得到病毒液。另取一膠頭滴管，將適量的病毒液滴加到含有單層易感細(xì)胞的培養(yǎng)液中，等待1h，讓病毒感染細(xì)胞并孵化。期間每隔10min搖晃一次，保證病毒和易感細(xì)胞能夠充分接觸。1h后，向混合液中添加含有3.5%馬血清的維持液，對(duì)混合液進(jìn)行反復(fù)凍融。72h后，用吸管吸取少量混合液，滴加到鏡片上，用磷鎢酸進(jìn)行鏡片染色，電子顯微鏡下觀察?？梢姾谏珔^(qū)域?yàn)榱祖u酸，顏色較淺的區(qū)域?yàn)椴《绢w粒。觀察到的病毒為球形，直徑為40～45mm，符合牛病毒性腹瀉病毒的特征。

4.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)此試驗(yàn)原理是利用抗體和抗原之間的特異性結(jié)合來檢測(cè)樣品中是否含有牛病毒性腹瀉病毒。如果抗原和抗體成功結(jié)合，則酶聯(lián)抗體會(huì)發(fā)生變色反應(yīng)，因此可以根據(jù)酶聯(lián)抗體是否變色得到樣品中是否攜帶病毒的結(jié)論。試驗(yàn)方法為：首先從牛的上顎或鼻鏡潰爛處取少量組織，離心處理后得到待測(cè)液。然后向待測(cè)液中加入待檢血清，充分搖晃后將混合液置于37℃恒溫環(huán)境下靜置2h。之后再加入酶標(biāo)抗體，同樣環(huán)境下靜置2h。最后加入底物液，在同樣環(huán)境下靜置30min，將最終的混合液放到ELISA檢測(cè)儀中測(cè)定OD值，并計(jì)算P/N值。如果陽性血清與陰性血清的比值（P/N）≥2.0，并且同時(shí)有待檢測(cè)血清的OD值≥0.4，則為陽性，否則為陰性。

4.3 免疫熒光染色技術(shù)免疫熒光染色的原理是將不影響抗原、抗體活動(dòng)的熒光色素，標(biāo)記到抗原（抗體）上，將其與對(duì)應(yīng)的抗體（抗原）結(jié)合后，即可在熒光顯微鏡下觀察到一種特異性的熒光反應(yīng)。該技術(shù)具有特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測(cè)速度快等一系列特點(diǎn)。根據(jù)操作方式的不同，又可分成直接法和間接法兩種形式。以間接法為例，首先選擇已知未標(biāo)記的特異抗體（第一抗體）對(duì)抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，然后采用水洗法將未反應(yīng)的抗體去掉，再用熒光色素標(biāo)記的抗體（第二抗體）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，從而得到了“抗體-抗原-抗體”復(fù)合物。重復(fù)上述操作，洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗體后，封片鏡檢。如果檢查中發(fā)現(xiàn)了特異性熒光反應(yīng)，則說明待檢血清中確實(shí)存在與抗體對(duì)應(yīng)的抗原。

5 防控措施

肉牛病毒性腹瀉可以在各個(gè)年齡段的牛群中發(fā)病，特別是新疫區(qū)具有急性病例多、死亡率高的特點(diǎn)，必須要樹立預(yù)防為主的管理理念，從源頭上杜絕該病的發(fā)生。同時(shí)，對(duì)已經(jīng)出現(xiàn)的病牛，也要根據(jù)其病情嚴(yán)重程度采取針對(duì)性的治療措施，降低死亡率，避免發(fā)生大規(guī)模傳染，切實(shí)維護(hù)養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)利益。

5.1 預(yù)防措施

5.1.1 加強(qiáng)肉牛飼養(yǎng)管理病牛在發(fā)病期，尿液、糞便以及口鼻眼分泌物中均攜帶有病毒，因此要想切斷牛病毒性腹瀉病的傳播，必須要加強(qiáng)養(yǎng)殖場(chǎng)日常的環(huán)境衛(wèi)生管理。冬季在做好牛棚保溫工作的同時(shí)，也要定期做好牛棚內(nèi)的通風(fēng)換氣工作。通常是選擇晴朗天氣的10～14時(shí)，讓牛棚接受光照、保持空氣新鮮。對(duì)牛棚地面的干草以及食槽內(nèi)的飼料也要定期進(jìn)行更換，切斷病毒的傳播途徑。夏季應(yīng)堅(jiān)持做到牛棚內(nèi)糞污的一日一清，每2d需要使用水槍沖刷一次牛舍，每周至少進(jìn)行2次消毒。噴灑消毒藥劑時(shí)，尤其注意墻角處，保證消毒徹底。肉牛的飼料也要加強(qiáng)管理，飼料應(yīng)單獨(dú)放置，避免被污染；飼料有發(fā)霉變質(zhì)的，應(yīng)當(dāng)及時(shí)處理，不得使用。另外，羊、豬等牲畜也是該病的易感群體，因此養(yǎng)殖場(chǎng)如果同時(shí)飼養(yǎng)了牛、羊，必須要做到隔離飼養(yǎng)，禁止混養(yǎng)導(dǎo)致病毒交叉?zhèn)鞑?。該病在冬季和春季發(fā)生率較高，因此入冬以后必須要加強(qiáng)牛舍內(nèi)的巡查，如果發(fā)現(xiàn)肉牛有異常，表現(xiàn)出牛病毒性腹瀉的有關(guān)癥狀，需要立即將其隔離并做進(jìn)一步的診斷和治療，避免出現(xiàn)大范圍的蔓延。由于老疫區(qū)該病多為隱性感染，潛伏期較長(zhǎng)，因此養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行分區(qū)分欄飼養(yǎng)的模式，這樣能有效降低隱性感染的病牛將病毒傳入給其他健康的牛，對(duì)降低發(fā)病率和減少經(jīng)濟(jì)損失也有一定幫助。

5.1.2 定期做好檢疫養(yǎng)殖場(chǎng)要嚴(yán)格做好檢疫工作，尤其是需要從外地引進(jìn)種牛時(shí)，必須要按照相關(guān)要求提前做血清學(xué)檢查，從源頭上杜絕種牛帶毒。如果采用人工授精方式，也需要提供精液的種牛必須經(jīng)過檢測(cè)為陰性。在肉牛買賣時(shí)，也要加強(qiáng)檢疫，只有檢驗(yàn)結(jié)果顯示為陰性才能引入場(chǎng)內(nèi)。被隱性感染的病牛禁止出售，防止該病的蔓延傳播。條件允許的情況下，養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)堅(jiān)持做到自繁自養(yǎng)，并且做好肉牛的免疫接種，提高對(duì)病毒性腹瀉病的抵抗力。通常是在8～10月齡，犢牛失去初乳免疫力時(shí)進(jìn)行疫苗注射，肌肉注射滅活疫苗或弱毒活疫苗，自接種起可以獲得1年左右的免疫力。成年后再進(jìn)行1次免疫接種，注意在母牛妊娠期間不得進(jìn)行疫苗接種。在一些老疫區(qū)，考慮到肉?；加须[性感染的情況較為普遍，因此養(yǎng)殖場(chǎng)還要定期對(duì)那些沒有表現(xiàn)出癥狀的肉牛進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)?？梢约皶r(shí)發(fā)現(xiàn)病毒牛，然后將其隔離飼養(yǎng)，避免造成傳播，對(duì)病牛可以使用藥物治療，若治療效果不佳則需要將其淘汰。通過定期檢疫逐步實(shí)現(xiàn)牛群凈化，保證養(yǎng)牛場(chǎng)內(nèi)沒有隱性感染的肉牛。

5.2 治療措施對(duì)癥狀明顯、已經(jīng)確診的病牛，首先要立即將其隔離，然后盡快進(jìn)行藥物治療，提高治愈成功率。同時(shí)，病牛所在的牛舍也要騰空，并使用2%漂白粉或其他敏感消毒藥物進(jìn)行徹底消毒，第1天消毒后放空3d，然后進(jìn)行第2次消毒，再放空5～7d后方可繼續(xù)使用。根據(jù)病牛的癥狀表現(xiàn)和病情嚴(yán)重程度，采取不同的治療方案。如果病牛的精神較好，癥狀輕微，則使用0.3%高錳酸鉀溶液清洗口腔、鼻等部位的潰瘍處，清洗結(jié)束后在潰瘍面上涂抹碘甘油，可以避免潰瘍面積擴(kuò)大，并利用自身免疫力使?jié)儾课恢鸩交謴?fù)。對(duì)病情稍重的、有體溫升高和腹瀉情況的病牛，則需要及時(shí)進(jìn)行止瀉并補(bǔ)充電解質(zhì)。對(duì)體溫在40℃以上的可肌肉注射10～15mL的安乃近，1次/d；對(duì)出現(xiàn)持續(xù)腹瀉的病牛，則選擇5%糖鹽水1200mL、5%碳酸氫鈉400mL、利巴韋林10mL、海達(dá)注射液10mL、VC4g配置成混合液，充分搖勻后靜脈注射給藥，1次/d。通過西藥治療可以有效緩解病牛的癥狀，對(duì)脫水導(dǎo)致的身體虛弱、抵抗力下降有顯著效果。在西藥治療的同時(shí)，還可輔助中藥治療。補(bǔ)中益氣湯的組方為黃芪30g、黨參30g、柴胡20g、當(dāng)歸20g、白芍15g、陳皮15g、甘草10g，水煎取汁，一次性灌服。1次/d，連用3d，可以改善病牛腹瀉癥狀，同時(shí)還能增加病牛的食欲。對(duì)有間歇性腹瀉的病牛，可以在每次腹瀉后取40g的纖維素酶，用溫開水稀釋后灌服，1次/d，連用2d，對(duì)緩解間歇性腹瀉也有積極幫助?？紤]到該病毒還會(huì)引起免疫抑制，因此對(duì)病癥較重、病程較長(zhǎng)的病牛，在使用藥物對(duì)癥的同時(shí)，也要配合使用磺胺類藥物或者抗生素藥物，避免出現(xiàn)繼發(fā)性感染。總之，對(duì)患有病毒性腹瀉病的肉牛，要堅(jiān)持早治療、對(duì)癥治療的原則，才能將損失降到最低，使病牛盡快恢復(fù)健康。

6 結(jié)語

隨著肉牛養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，牛病毒性腹瀉的發(fā)生率也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。尤其是在新疫區(qū)，呈現(xiàn)出發(fā)病急、死亡率高等特點(diǎn)，給養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重的損失。為做好肉牛病毒性腹瀉的防治，一方面是要求地方畜牧獸醫(yī)站做好科普宣傳，讓養(yǎng)殖戶能夠熟悉肉牛常見疫病的臨床癥狀、流行特點(diǎn)、防治措施，豐富養(yǎng)殖戶的專業(yè)知識(shí)儲(chǔ)備，樹立科學(xué)管理的意識(shí)；另一方面，養(yǎng)殖戶要定期做好肉牛的免疫接種，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，以及加強(qiáng)日常的環(huán)境衛(wèi)生管理。在發(fā)現(xiàn)肉牛有異常情況時(shí)，應(yīng)立即將其隔離，然后做進(jìn)一步的診斷，并根據(jù)診斷結(jié)果及時(shí)用藥治療，切實(shí)維護(hù)肉牛養(yǎng)殖效益。