蘭慧慧 陳濤 蔣忠勝 李敏基 覃錦玉 莫?jiǎng)倭?蒙達(dá)禮 唐貴
(1.廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院呼吸內(nèi)科,柳州 545005;2.廣西柳州市人民醫(yī)院感染病科,柳州 545004)
肺孢子菌肺炎(Pneumocystispneumonia,PCP)是艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者晚期常見的指征性疾病之一,其病情進(jìn)展快,死亡率高達(dá)20%~40%,其中一部分患者死亡是由于未得到及時(shí)診斷而治療所致[1-2]。臨床上診斷PCP的主要方法包括有病原學(xué)檢測(cè)、分子學(xué)診斷和免疫學(xué)診斷[3]。其中,病原學(xué)檢測(cè)常是通過支氣管鏡行肺泡灌洗或肺活檢找病原體,但常因患者的耐受性差及檢測(cè)方法的創(chuàng)傷性所限制而導(dǎo)致診斷不及時(shí)。免疫學(xué)診斷具有簡(jiǎn)單、易行、快速、無創(chuàng)傷性等優(yōu)點(diǎn),常應(yīng)用于臨床[4]。PCP病原體為耶氏肺孢子菌(Pneumocystisjiroveci,PJ),其細(xì)胞壁上富含(1,3)-β-D葡聚糖,當(dāng)PJ侵入人體肺部組織后,經(jīng)吞噬細(xì)胞吞噬處理后,(1,3)-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放出來,在血液中含量增高。有報(bào)道表明,血漿(1,3)-β-D 葡聚糖水平測(cè)定(G試驗(yàn))對(duì)PCP的診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后有一定的意義[5-7]。故本文旨在探討血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平在AIDS合并PCP患者中的診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后中的價(jià)值。
采用回顧性研究方法,選取廣西柳州市人民醫(yī)院2012年1月—2021年1月收治的有(1,3)-β-D葡聚糖結(jié)果同時(shí)符合以下條件的AIDS合并PCP患者作為觀察組。該組患者入選條件:AIDS診斷符合《中國(guó)艾滋病診療指南(2018版)》標(biāo)準(zhǔn)[8]。PCP診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]為:①起病隱匿或亞急性,干咳,氣短和活動(dòng)后加重,可有發(fā)熱、發(fā)紺,嚴(yán)重者發(fā)生呼吸窘迫。②肺部陽性體征少,或可聞及少量散在的干濕啰音。體征與疾病癥狀的嚴(yán)重程度往往不成比例。③胸部X線或CT檢查可見雙肺從肺門開始的彌漫性網(wǎng)狀結(jié)節(jié)樣間質(zhì)浸潤(rùn),有時(shí)呈磨玻璃狀陰影。④血?dú)夥治鍪镜脱跹Y。⑤ 血乳酸脫氫酶常升高。⑥確診依靠病原學(xué)檢查,如痰液或支氣管肺泡灌洗/肺組織活檢等,發(fā)現(xiàn)肺孢子菌的包囊或滋養(yǎng)體。排除條件:①合并腫瘤性疾病;②合并嚴(yán)重心、肝、腎、腦、肺部疾患;③哺乳或者妊娠期婦女;④合并馬爾尼菲籃狀菌感染、隱球菌感染、曲霉感染、念珠菌感染等機(jī)會(huì)性感染;⑤資料不全者。
觀察組患者根據(jù)臨床預(yù)后情況,進(jìn)一步分為好轉(zhuǎn)組與死亡組。臨床預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn):①好轉(zhuǎn):臨床癥狀及生化指標(biāo)改善,肺CT病灶較前吸收好轉(zhuǎn);②死亡:臨床癥狀及生化指標(biāo)加重,肺CT病灶較前進(jìn)展;經(jīng)治療無效臨床死亡。
根據(jù)觀察組與對(duì)照組人數(shù)配比1∶1原則,選取同期有 (1,3)-β-D葡聚糖結(jié)果的無機(jī)會(huì)性感染的HIV感染者作為對(duì)照組。該組患者入選條件:參照《中國(guó)艾滋病診療指南(2018版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[8],所有病例均確診為 HIV 感染。排除條件:①合并腫瘤性疾??;②合并嚴(yán)重心、肝、腎、腦、肺部疾患;③哺乳或者妊娠期婦女;④合并各種機(jī)會(huì)性感染;⑤資料不全者。
本研究由柳州市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理批號(hào):KY-E-22-01)。
收集觀察組及對(duì)照組患者治療基線時(shí)(入組但未開始治療時(shí))的 (1,3)-β-D葡聚糖結(jié)果。另收集好轉(zhuǎn)組患者治療后第4周及死亡組患者死亡時(shí)的(1,3)-β-D葡聚糖結(jié)果。 (1,3)-β-D葡聚糖檢測(cè):采集患者靜脈血液4 mL, 3 000 r/min離心10~15 min,取上清0.1 mL,加入0.9 mL的樣品處理液中,混勻后70℃孵育10 min,取出后立刻放入冷卻槽中冷卻5 min,即為待測(cè)血漿樣品。待測(cè)血漿樣品0.2 mL直接加入酶反應(yīng)主劑中,溶解后移液至標(biāo)準(zhǔn)無熱原平底試管中,插入MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)結(jié)束后檢測(cè)系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算待測(cè)血漿中(1,3)-β-D葡聚糖含量。根據(jù)北京金山川科技發(fā)展有限公司提供的(1,3)-β-D葡聚糖試劑說明書,(1,3)-β-D葡聚糖濃度>60 pg/mL時(shí),判定為陽性。
應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組(1,3)-β-D葡聚糖水平均為非正態(tài)分布計(jì)量資料,以[M(P25,P75)]表示,觀察組與對(duì)照組、好轉(zhuǎn)組(基線)與死亡組(基線)、好轉(zhuǎn)組(基線)與治療后(4周)、及死亡組(基線)與治療后(死亡時(shí))間(1,3)-β-D葡聚糖水平的比較,采用Mann-Whitney U檢驗(yàn),(1,3)-β-D葡聚糖陽性率的比較,采用χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用ROC曲線下面積(AUC)評(píng)估(1,3)-β-D葡聚糖水平對(duì)PCP的診斷及預(yù)后的價(jià)值,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
廣西柳州市人民醫(yī)院2012年1月—2021年1月共收治了55例符合入選條件及排除條件標(biāo)準(zhǔn)的AIDS合并PCP患者作為觀察組,其中男34例,女21例,年齡1~83歲,平均年齡(57.09±18.05)歲。55例對(duì)照組患者,男42例,女13例,年齡31~79歲,平均年齡(57.29±13.32)歲;兩組性別及年齡比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.066,χ2=2.086,P>0.05)。觀察組患者根據(jù)臨床預(yù)后情況分為好轉(zhuǎn)組和死亡組。好轉(zhuǎn)組31例,其中男22例,女9例,年齡25~83歲,平均年齡(59.10±15.61)歲;死亡組24例,其中男12例,女12例,年齡1~75歲,平均年齡(54.50±20.86)歲;兩組性別及年齡比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.935,χ2=2.520,P>0.05)。
觀察組(1,3)-β-D葡聚糖水平及陽性率高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。死亡組(基線)與好轉(zhuǎn)組(基線)比較:死亡組(1,3)-β-D葡聚糖水平高于好轉(zhuǎn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),(1,3)-β-D葡聚糖陽性率兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。好轉(zhuǎn)組治療后4周(1,3)-β-D葡聚糖水平及陽性率低于基線時(shí),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);死亡組死亡時(shí)(1,3)-β-D葡聚糖水平高于基線時(shí),(1,3)-β-D葡聚糖陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。
表1 (1,3)-β-D葡聚糖關(guān)于PCP診斷及預(yù)后方面的分析Tab.1 Analysis of (1,3) -β-D-glucan in the diagnosis and prognosis of PCP
表2 (1,3)-β-D葡聚糖關(guān)于PCP病情變化方面的分析Tab.2 Analysis of (1,3)-β -D glucan on disease outcomes of PCP
ROC曲線分析結(jié)果顯示:血漿(1,3)-β-D葡聚糖診斷PCP的ROC曲線下面積(AUC)為 0.926(P=0.000),95%CI0.877~0.975,最佳診斷閾值為77.65 pg/mL,其敏感度、特異性及Youden指數(shù)分別為89.1%、87.3%和0.764,見圖1。血漿(1,3)-β-D葡聚糖預(yù)測(cè)PCP預(yù)后的ROC曲線下面積(AUC)為 0.891(P=0.000),95%CI0.796~0.987,最佳診斷值為247.95 pg/mL,其敏感度、特異性及Youden指數(shù)分別為 79.2%、93.5%和0.727,見圖2。
圖1 (1,3)-β-D葡聚糖診斷PCP的ROC曲線 圖2 (1,3)-β-D葡聚糖預(yù)測(cè)PCP預(yù)后的ROC曲線Fig.1 ROC curves of (1,3)-β-D-glucan in diagnosis of PCP Fig.2 ROC curves of (1,3) -β-D-glucan for predicting the prognosis of PCP
診斷的評(píng)價(jià):當(dāng)(1,3)-β-D葡聚糖≥77.65 pg/mL時(shí)診斷為PCP,將根據(jù)最佳診斷條件所評(píng)判的結(jié)果與患者實(shí)際診斷情況進(jìn)行比較,其診斷PCP的敏感度為89.09%,特異度為87.27%,陽性預(yù)測(cè)值(PPV)= 87.50%,陰性預(yù)測(cè)值(NPV)=88.89%,見表3。預(yù)后的評(píng)價(jià):當(dāng)(1,3)-β-D葡聚糖≥247.95 pg/mL時(shí)預(yù)測(cè)為死亡,(1,3)-β-D葡聚糖<247.95 pg/mL時(shí)預(yù)測(cè)為好轉(zhuǎn),將根據(jù)最佳預(yù)測(cè)條件所評(píng)判的結(jié)果與患者實(shí)際預(yù)后情況進(jìn)行比較,其預(yù)測(cè)PCP預(yù)后的敏感度為79.17%,特異度為93.55%,PPV= 90.48%,NPV=85.29%,見表3。
表3 (1,3)-β-D葡聚糖判斷PCP診斷及預(yù)后的評(píng)判結(jié)果與實(shí)際情況Tab.3 (1,3)-β-D-glucan to evaluate the results and actual situation about the diagnosis and prognosis of PCP
PJ為條件致病菌,其在正常人呼吸道中多以定植形式存在。因AIDS患者存在不同程度免疫功能缺陷,PJ可通過菌體表面糖蛋白黏附于宿主細(xì)胞并逃避免疫清除,進(jìn)而引起宿主炎癥反應(yīng)及肺部感染的發(fā)生[9],與此同時(shí),菌體細(xì)胞壁主要成分之一的(1,3)-β-D葡聚糖釋放入血[7,10]。
Desmet等[11]通過分析28例PCP患者和28例對(duì)照組者的G試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)G試驗(yàn)≥100 pg/mL時(shí),診斷PCP的敏感性和特異性分別為100%和96.4%。Salerno等[12]通過回顧性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)G試驗(yàn)截?cái)嘀禐?00 pg/mL時(shí),診斷PCP的敏感性、特異性、PPV和NPV分別為91%、92%、89%和93%。Sax等[13]通過對(duì)173例PCP患者和79例對(duì)照者分析發(fā)現(xiàn):以G試驗(yàn)≥80 pg/mL的結(jié)果對(duì)診斷PCP的敏感性、特異性、PPV和NPV分別為92%、65%、85%和80%。另有若干研究表明,不同水平的血漿(1,3)-β-D葡聚糖截?cái)嘀涤糜谠\斷PCP的特異度波動(dòng)于83%~100%,敏感度波動(dòng)于70%~100%[5,14-15]。本文結(jié)果表明,當(dāng)G試驗(yàn)截?cái)嘀禐?7.65 pg/mL時(shí),診斷PCP的敏感度、特異度、PPV及NPV分別為89.09%、87.27%、87.50%和88.89%,與上述有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道類似;且本文ROC曲線下面積為0.926,提示在AIDS患者中,(1,3)-β-D葡聚糖水平在診斷PCP方面具有較好的應(yīng)用價(jià)值。需注意的是,G試驗(yàn)存在一定假陰性及假陽性情況[13],使用血清白蛋白、磺胺類藥物、標(biāo)本污染等因素可導(dǎo)致G試驗(yàn)假陽性[16],本文對(duì)照組G試驗(yàn)假陽性率21.82%,考慮原因?yàn)椴糠只颊咭駽D4細(xì)胞計(jì)數(shù)低下住院期間預(yù)防性使用磺胺類藥物及因營(yíng)養(yǎng)不良使用血清白蛋白所致。本文觀察組G試驗(yàn)假陰性率7.27%,考慮可能原因可能為此部分患者感染程度輕,導(dǎo)致(1,3)-β-D葡聚糖釋放入血少以及檢驗(yàn)標(biāo)本未及時(shí)送檢所致[17]。以上分析可以看出G試驗(yàn)在診斷PCP方面具有較好的臨床價(jià)值,但因假陰性等因素的存在,故建議多次測(cè)量以及綜合患者影像學(xué)等臨床資料,以便能更加準(zhǔn)確診斷PCP。
在 G 試驗(yàn)對(duì) PCP 診斷的研究基礎(chǔ)上,學(xué)者們亦進(jìn)一步探索了其對(duì) PCP 患者臨床預(yù)后的判斷價(jià)值。研究表明,PCP 患者 G 試驗(yàn)水平與肺泡灌洗PJ菌體載量呈正相關(guān)[18],并且與血清中PJ DNA濃度呈正相關(guān),與 PCR CT值呈負(fù)相關(guān)[19],提示血液中(1,3)-β-D葡聚糖水平在一定程度可以反映患者的感染及病情嚴(yán)重程度。一項(xiàng)回顧性研究發(fā)現(xiàn),存活患者血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平較死亡患者低[20]。Matsumura等[21]研究表明G試驗(yàn)水平與PCP患者30 d死亡率有著密切關(guān)系。并且在治療過程中,G試驗(yàn)水平的下降,往往預(yù)示著良好的臨床預(yù)后[7,21-22]。本研究結(jié)果表明,當(dāng)G試驗(yàn)截?cái)嘀禐?47.95 pg/mL時(shí),其預(yù)測(cè)PCP預(yù)后的敏感度、特異度、PPV及NPV分別為79.17%、93.55%、90.48%和85.29%,且ROC曲線下面積為0.891;此外觀察到,隨著好轉(zhuǎn)組患者病情的好轉(zhuǎn)及死亡組患者病情的惡化,(1,3)-β-D葡聚糖水平分別呈現(xiàn)下降及升高的表現(xiàn),提示(1,3)-β-D葡聚糖水平及變化情況在預(yù)測(cè)PCP臨床預(yù)后及評(píng)估病情變化方面具有較好的價(jià)值,與上述有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道類似。
綜上分析,血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平檢測(cè)作為一種非創(chuàng)傷性檢驗(yàn)方法,可在早期有效地輔助診斷PCP,并且其在預(yù)測(cè)患者預(yù)后及評(píng)估病情變化方面具有較好的臨床價(jià)值。但在臨床應(yīng)用當(dāng)中,需注意排除假陰性及假陽性等因素干擾,結(jié)合患者的相關(guān)臨床資料進(jìn)行綜合判斷。