陳 娟，錢宇佳，黃 蓉，凌 玉，陳亞軍，胡文靜（通信作者）

（南京市婦幼保健院檢驗(yàn)科 江蘇 南京 210004）

全自動(dòng)血型儀微柱凝膠免疫分析技術(shù)（microcolumn gel immunoassay technique, MGIA），是近些年來(lái)發(fā)展迅速的全新血型血清學(xué)技術(shù)，在鑒定ABO 以及RhD 血型中的運(yùn)用范疇較廣[1]。MGIA 不僅能鑒定ABO 血型、RhD 血型，同時(shí)還可用于血型抗體和效價(jià)的檢測(cè)，通過(guò)抗體效價(jià)的檢測(cè)，盡早地預(yù)防胎兒和新生兒溶血?。╤emolytic disease of the fetus and newborn, HDFN）的發(fā)生。HDFN 是因?yàn)槟笅胙筒缓?，母體針對(duì)與其不同的胎兒紅細(xì)胞血型抗原產(chǎn)生了免疫性IgG 抗體，經(jīng)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，導(dǎo)致胎兒或新生兒同種免疫性溶血引起的一系列臨床癥狀，患兒病死率較高[2-3]。國(guó)內(nèi)以ABO 和Rh 血型不合引起的HDFN 多見(jiàn)，因此，在母體妊娠期間，監(jiān)測(cè)針對(duì)胎兒父系抗原的抗體效價(jià)升高情況對(duì)HDFN 的預(yù)判有一定作用，臨床上通常對(duì)O 型孕婦（其丈夫非O 型）定期檢測(cè)血型抗體效價(jià)。本研究對(duì)IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)的孕婦樣本采用MGIA 法和傳統(tǒng)試管法（conventional tube technique, CTT）平行檢測(cè)，對(duì)比結(jié)果差異，旨在為全自動(dòng)血型儀檢測(cè)IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)尋找合適的判讀方法。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2021 年10 月—2022年1 月南京市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)生IgG 型抗A 或者抗B 的O 型血孕婦血清241 例。其中，抗A 效價(jià)121 例、抗B 效價(jià)120 例。所有孕婦均知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)生IgG 型抗A 或者抗B 的O 型孕婦；②檢查依從性較好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①未產(chǎn)生IgG 型血型抗體的孕婦；②精神障礙者。

1.2 儀器與試劑

全自動(dòng)血型分析儀（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國(guó)有限公司，型號(hào)：VISION）；抗人球蛋白微柱凝膠檢測(cè)卡（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國(guó)有限公司，批號(hào)：

21125.01.1）；ABO 血型反定型用4%紅細(xì)胞試劑盒（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國(guó)有限公司，批號(hào)：A481Z）；4%不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞試劑盒（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國(guó)有限公司，批號(hào)：3SS007Z）。0.2 M 巰基乙醇（2-ME）（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20217702）。凝聚胺試劑盒（珠海貝索生物工程有限公司，批號(hào)：

A210202）；血型血清離心機(jī)（珠海貝索生物工程有限公司，型號(hào)：BASO 2020-2）。電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DK-8D）。

1.3 試驗(yàn)方法

取200 μL 孕婦血漿標(biāo)本和200 μL 的0.2 mol/L 2-ME應(yīng)用液充分混勻，試管加蓋置37 ℃水浴60 min，充分裂解血清中的IgM 類抗體。將經(jīng)2-ME 處理的血漿以0.9%氯化鈉溶液做倍比稀釋，選擇需檢測(cè)抗體的對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞，以MGIA 法和CTT 法分別進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 結(jié)果判讀與記錄

CTT 法以“1+”記錄結(jié)果；MGIA 法以“1+、2+、3+、4+”記錄結(jié)果。以MGIA 法“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果同CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，同時(shí)以CTT 法“1+”的IgG型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別與MGIA 法“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，找出CTT法的“1+”與MGIA 法“1+、2+、3+、4+”中最有一致性的血型抗體效價(jià)的結(jié)果，作為MGIA 法報(bào)告IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)的結(jié)果。

1.5 MGIA 法反應(yīng)強(qiáng)度、現(xiàn)象及判讀說(shuō)明

“1+”為紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠底部；“2+”為大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部；“3+”為大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面，少部分位于凝膠中上部；“4+”為紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。五組間等級(jí)資料比較采用Z檢驗(yàn)，組間比較采用Wilcoxon 符號(hào)秩和檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較

MGIA 法“1+”、MGIA 法“2+”、MGIA 法“3+”和MGIA法“4+”的IgG型ABO血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明，MGIA 法的“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，MGIA 法的抗體效價(jià)結(jié)果高于CTT 法的抗體效價(jià)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較

2.2 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果的分別比較

MGIA 法“1+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MGIA法“2+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MGIA 法“3+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此表明，MGIA 法的“1+、2+、3+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果均高于CTT 法“1+”的IgG型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果。而MGIA 法“4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明MGIA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果具有一致性，見(jiàn)表2。

表2 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別比較

3.討論

血型抗體效價(jià)是判斷是否發(fā)生溶血反應(yīng)的一種檢測(cè)方法。血型抗體的效價(jià)偏高，會(huì)增加胎兒或新生兒溶血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，胎兒血型抗體的效價(jià)越高，發(fā)生溶血反應(yīng)的可能性越大，嚴(yán)重的會(huì)造成死胎或者新生兒死亡。血型抗體效價(jià)臨床上通常用于檢查由母嬰血型不合引起的HDNF，因此需要特別重視對(duì)HDNF 的產(chǎn)前檢測(cè)。在檢測(cè)方法上，對(duì)敏感度高和準(zhǔn)確性好的要求，也顯得尤為重要。

現(xiàn)有檢測(cè)方法包括化學(xué)發(fā)光法、單核細(xì)胞單層測(cè)定等，其中，CTT 法和MGIA 法是檢測(cè)血型抗體效價(jià)的常用方法。CTT 法測(cè)定血型抗體效價(jià)受到影響因素較多，技術(shù)人員的操作手法、肉眼判讀結(jié)果的尺度標(biāo)準(zhǔn)不同，都會(huì)對(duì)結(jié)果造成一定的差異，難以自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，且檢測(cè)結(jié)果無(wú)法保存，更無(wú)法與孕婦前一次抗體效價(jià)作對(duì)比[4]。血清中真實(shí)的抗體滴度與不同操作人員判讀的滴度存在偏倚，因此檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性會(huì)受到很大影響。

近年來(lái)，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室更傾向于用MGIA 法檢測(cè)血型抗體效價(jià)，MGIA 法反應(yīng)的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊，在一定離心力作用下，該凝集團(tuán)塊位于膠表面或膠中，如紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，則完全沉降到微柱管底部。該法因具有操作簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)點(diǎn)，適合臨床大批量的操作。

與CTT 法比較，MGIA 法檢測(cè)紅細(xì)胞抗體效價(jià)的敏感性更高，以“1+”判讀結(jié)果，MGIA 法顯著高于CTT 法的效價(jià)[5]。有學(xué)者認(rèn)為MGIA 法臨界值效價(jià)應(yīng)比CTT 方法高1 ～2 個(gè)稀釋度[6]。也有研究結(jié)果顯示，MGIA 法的滴度比CTT 法高3 倍左右，且其特異性也較高，重復(fù)性更好，主觀性較低[7-11]。本研究運(yùn)用全自動(dòng)血型儀MGIA 法檢測(cè)IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)，可對(duì)結(jié)果自動(dòng)拍照保存，并機(jī)器判斷結(jié)果，減少了人為因素引起的判讀誤差，準(zhǔn)確性更高。同時(shí)MGIA 法對(duì)于亞型，弱抗體、抗原的檢出率也明顯高于CTT 法，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)抗體效價(jià)的升高，有效地降低溶血性疾病的發(fā)生率。在實(shí)驗(yàn)室使用微柱凝膠檢測(cè)卡時(shí)，為了保證MGIA 法的準(zhǔn)確性，需要注意：①血液標(biāo)本不能有溶血、凝塊。②定期更換反定型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。③堅(jiān)持雙人核對(duì)制度，以免造成不必要的判讀失誤。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于新生兒溶血病產(chǎn)前檢測(cè)方面的專家共識(shí)普遍都基于CTT 法的血型抗體效價(jià)結(jié)果[12]，而并非MGIA 法。若以MGIA 法的“1+”報(bào)告抗體效價(jià)結(jié)果，可能會(huì)對(duì)臨床醫(yī)生產(chǎn)生誤導(dǎo)，因此對(duì)于MGIA 法檢測(cè)血型抗體效價(jià)，需要重新建立參考值。有學(xué)者認(rèn)為，血型抗體效價(jià)試驗(yàn)不僅要考慮稀釋倍數(shù)，也要考慮凝集強(qiáng)度，凝集強(qiáng)度反映了抗體的親和力[13]，如果只考慮稀釋倍數(shù)，不考慮抗體親和力，會(huì)使人誤解。還有學(xué)者認(rèn)為，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上確立微柱凝膠技術(shù)相應(yīng)的參考值[14]。

本研究將MGIA 法的“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MGIA 法的“1+、2+、3+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果均存在顯著差異性，而MGIA 法的“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果卻有很好的一致性。

綜上所述，在以MIGA 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果制訂MIGA 參考值時(shí)還需結(jié)合凝集強(qiáng)度制訂參考值標(biāo)準(zhǔn)。而MIGA 法的“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果最為接近，因此可以選用MIGA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果作為結(jié)果報(bào)告。此外，MIGA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果還可以通過(guò)結(jié)合有的新生兒溶血病產(chǎn)前評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)節(jié)約成本，更加方便實(shí)用。