曹 勇

陜西省榆林市清澗縣石咀驛區(qū)域畜牧獸醫(yī)站，陜西榆林 718302

1 病原學(xué)

牛病毒性腹瀉病毒是單股RNA 病毒，是黃病毒科、瘟病毒屬的成員之一[1]，與羊邊界病毒和豬瘟病毒的聯(lián)系較為密切。病毒粒子為圓形，大小35～55 nm。該病毒能夠在牛鼻甲骨等細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，按照不同的表現(xiàn)將其分為2 種生物型，即致細(xì)胞病變型和非致細(xì)胞病變型，按照基因型又可將病毒分為基因Ⅰ型和基因Ⅱ型，每種基因型都含有多種毒株，各毒株間致病性差異性很大。在電鏡下對(duì)該病毒進(jìn)行觀察可以看到圓形的病毒粒子。該病毒對(duì)胰酶、氯仿和乙醚極度敏感，對(duì)低溫環(huán)境有一定的抵抗能力，但在高于56 ℃的環(huán)境下很快就會(huì)死亡。

2 流行病學(xué)

牛病毒性腹瀉病毒能夠感染牛、羊、豬、鹿等動(dòng)物，牛最為易感。其中，犢牛和老齡牛最易發(fā)病[2]?；疾∨５募S便、尿液、血液、乳汁、眼睛和鼻腔分泌物中均有病毒，可以污染外界環(huán)境，健康牛接觸到被污染的環(huán)境后，病毒經(jīng)由呼吸道和消化道侵入機(jī)體。此外，該病還能夠通過(guò)胎盤垂直傳播給胎兒。肉牛飼養(yǎng)過(guò)程中飼料營(yíng)養(yǎng)水平較差、飼養(yǎng)密度過(guò)大、衛(wèi)生條件差等，都會(huì)造成牛群發(fā)病。發(fā)病牛通常集中在4～24月齡，其中以6～8月齡的牛發(fā)病最為嚴(yán)重，但這個(gè)年齡的牛發(fā)病后死亡率較低，隱性感染的病例占總病例的50%以上。

3 臨床癥狀

3.1 急性型

成年牛感染后往往表現(xiàn)為急性感染，突然發(fā)病，發(fā)熱常持續(xù)幾天，體溫往往可以超過(guò)40 ℃，食欲廢絕，精神萎靡，有較嚴(yán)重的干咳和呼吸困難。感染2～7 d 后發(fā)生腹瀉，排出的糞便常呈水樣，且混有黏液和血液，有惡臭氣味。同時(shí)患病牛的口腔黏膜內(nèi)有不同程度的糜爛、壞死，導(dǎo)致牛只流涎。妊娠期母牛感染后，常在懷孕初期發(fā)生流產(chǎn)，或在妊娠中期產(chǎn)出腦發(fā)育不健全的犢牛，母?；疾『?，泌乳量會(huì)受到較大的影響[3]。急性感染的患病牛體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量減少，淋巴組織受到嚴(yán)重?fù)p害，血小板數(shù)量減少，常出現(xiàn)流鼻血的癥狀，排出的糞便中也有血液，嚴(yán)重時(shí)打針或被蚊蟲叮咬后也會(huì)出血。當(dāng)病毒在鼻竇、口腔、腸黏膜等處大量繁殖時(shí)，很容易進(jìn)入血液中形成病毒血癥，多數(shù)這一類型的患病牛會(huì)在感染后15～30 d 內(nèi)發(fā)生死亡。也有部分患病牛的恢復(fù)速度較快，黏膜的損害在10～14 d 內(nèi)痊愈。

3.2 慢性型

患病牛表現(xiàn)為間歇性腹瀉、食欲減退、流淚、口腔黏膜潰瘍、糜爛，糞便中有血液和黏液。體重持續(xù)降低，通常在數(shù)周或數(shù)月后發(fā)生死亡。此類型的病例數(shù)較少，但病死率可達(dá)90%。當(dāng)感染發(fā)生在妊娠40～125 d 的未出生胎牛中時(shí)，往往會(huì)造成死胎、流產(chǎn)，而此時(shí)基本無(wú)法判斷是由何種原因?qū)е碌摹?/p>

3.3 剖檢變化

觀察可見患病牛營(yíng)養(yǎng)不良，關(guān)節(jié)腫脹，眼結(jié)膜發(fā)黃，舌下有潰瘍斑。剖檢可見皮下脂肪蒼白；胃大網(wǎng)膜有枝狀充血；腎臟為紅褐色，有明顯腫大，包膜易剝離，質(zhì)地變脆，有灰白色病死灶；肝臟腫脹，邊緣鈍圓，切面外翻；膽囊有出血斑，膽囊內(nèi)有油狀膽汁；肺臟充血、淤血，有壞死結(jié)節(jié)；心臟腫大，有淡黃色的心包液，冠狀溝膠凍樣水腫；小腸內(nèi)有灰色內(nèi)容物，有惡臭氣味[4]。

4 診斷方法

通過(guò)臨床癥狀和剖檢變化可以進(jìn)行初步診斷，如需確診應(yīng)借助實(shí)驗(yàn)室診斷手段。主要用于診斷的方法有病毒分離鑒定、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血清中和試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)、RT-PCR、核酸雜交技術(shù)等[5]。

4.1 病毒分離鑒定

無(wú)菌條件下采集患病牛的血液，反復(fù)凍融后在血液內(nèi)加入抗生素，而后接種在牛腎系帶細(xì)胞或犢牛的睪丸細(xì)胞中，盲傳幾代后進(jìn)行細(xì)胞病變觀察，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)邊界不清晰、細(xì)胞中有空泡或細(xì)胞層中間出現(xiàn)空斑時(shí)，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)毒株產(chǎn)生的細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比，完全相同則證明該患病牛為病毒性腹瀉病毒感染牛。但該方法僅能鑒定致病毒株，對(duì)于非致細(xì)胞病變毒株就不能很好地鑒別，且病毒分離鑒定的最低檢測(cè)數(shù)量要達(dá)到10 個(gè)/mL，操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。

4.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

采集糜爛、潰瘍部位周圍的黏膜，不進(jìn)行任何處理，直接與牛病毒性腹瀉黏膜病毒陽(yáng)性血清進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，根據(jù)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果來(lái)判定待檢牛的感染情況。但瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)僅能粗略地檢測(cè)血清中的抗體，與血清中和試驗(yàn)相比敏感度不高，但操作便捷，成本低廉，能夠進(jìn)行疾病的初篩。

4.3 血清中和試驗(yàn)

將病毒接種于牛睪丸細(xì)胞或犢牛腎細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)出的病毒與待檢血清作用后再次接種于牛睪丸細(xì)胞或犢牛腎細(xì)胞中，并對(duì)細(xì)胞病變進(jìn)行觀察。間隔4 周的2 次待檢血清倍比稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，滴度升高4 倍以上就可以判定為陽(yáng)性。血清中和試驗(yàn)不僅能夠進(jìn)行定性分析，也能做到定量分析，檢出率高，重復(fù)性好，是目前最常用于診斷牛病毒性腹瀉的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法之一。但由于部分患病牛呈隱性感染狀態(tài)，免疫耐受，所以體內(nèi)可能不產(chǎn)生抗體，無(wú)法通過(guò)血液中的抗體含量進(jìn)行診斷。

4.4 免疫熒光技術(shù)

這一方法是通過(guò)顯微鏡標(biāo)本的免疫熒光染色來(lái)進(jìn)行結(jié)果的判斷，是結(jié)合了免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的綜合診斷技術(shù)，能夠直接檢測(cè)感染的細(xì)胞培養(yǎng)物或病變組織冰凍切片內(nèi)的病毒粒子，感染病毒的細(xì)胞胞漿中會(huì)出現(xiàn)熒光顆粒，這一方法的檢出率高達(dá)98%以上，很適合非致細(xì)胞病變毒株的檢測(cè)。

4.5 RT-PCR 法

根據(jù)牛病毒性腹瀉病毒的基因序列合成1 對(duì)引物，通過(guò)RT-PCR 的方法可以特異性地檢測(cè)出待檢器官、組織、血液和排泄物中的病毒，還能夠區(qū)別不同的病毒毒株，即便病毒性腹瀉病毒被滅活，該方法仍能檢測(cè)出來(lái)。還有專家學(xué)者設(shè)計(jì)合成了2 對(duì)分別能擴(kuò)增水泡型口炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒的基因片段引物，對(duì)PCR 的擴(kuò)增條件也進(jìn)行了優(yōu)化，從而建立了雙重RT-PCR 的檢測(cè)方法，能夠同時(shí)對(duì)水泡型口炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)濟(jì)性大大提升，檢測(cè)速度加快，特異性也很高。但由于基因擴(kuò)增需要的試驗(yàn)儀器和試劑價(jià)格較貴，合成引物也比較困難，所以在生產(chǎn)實(shí)踐的過(guò)程中很少使用RT-PCR 法作為診斷依據(jù)。

4.6 核酸雜交技術(shù)

這一技術(shù)的原理是堿基互補(bǔ)的2 條單鏈核酸退火后會(huì)形成雙鏈，這一方法的特異性很高，敏感度較強(qiáng)，能夠直接對(duì)待檢測(cè)器官、組織、細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，而且還可以對(duì)病毒進(jìn)行分型。核酸雜交技術(shù)能夠在同一張檢測(cè)膜上進(jìn)行上百個(gè)樣品的檢測(cè)，安全、方便、檢測(cè)快速，可在技術(shù)成熟后進(jìn)行推廣。

5 防治方法

5.1 治 療

該病的流行范圍較廣，且致病機(jī)理復(fù)雜，暫時(shí)沒(méi)有非常有效的治療方法[6]。但如果發(fā)現(xiàn)患病牛的血小板減少時(shí)，應(yīng)輸血治療。對(duì)于發(fā)熱、腹瀉的患病牛應(yīng)避免應(yīng)激，改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，并使用抗生素預(yù)防繼發(fā)感染，但不得使用皮質(zhì)類和固醇類藥物，以免加重消化系統(tǒng)的潰瘍和糜爛癥狀。具體的治療措施可參照以下用藥方法：40 g 磺胺脒片配合30 g 次碳酸鉍片口服，2 次/d，首次用藥劑量加倍，3 L 5%的葡萄糖生理鹽水內(nèi)加入300 萬(wàn)單位的丁胺卡那霉素進(jìn)行靜脈注射，當(dāng)病情較為嚴(yán)重時(shí)可使用加入維生素C 的安鈉咖注射液進(jìn)行肌肉注射，或配合復(fù)方磺胺甲噁唑粉、恩諾沙星進(jìn)行肌肉或靜脈注射。

5.2 預(yù) 防

肉牛場(chǎng)對(duì)該病的預(yù)防首要方法是免疫接種，通常使用滅活三聯(lián)苗（BVDV，IBR，IP3）。單價(jià)苗主要分為亞單位疫苗、病毒載體疫苗和DNA 疫苗，也有報(bào)道稱使用豬瘟兔化弱毒苗進(jìn)行免疫接種后能夠起到一定的免疫效果，但其作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步的研究。另外，應(yīng)逐步淘汰凈化牛群，定期對(duì)牛群的血清抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，對(duì)于陽(yáng)性牛應(yīng)進(jìn)行淘汰和撲殺，撲殺的患病牛要進(jìn)行無(wú)害化處理，其接觸過(guò)的環(huán)境、生產(chǎn)用具等也要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的消毒。對(duì)于場(chǎng)外購(gòu)入的肉牛應(yīng)仔細(xì)核查其檢疫證明，不從疫區(qū)和受威脅區(qū)引進(jìn)肉牛，新進(jìn)場(chǎng)的肉牛應(yīng)進(jìn)行隔離，隔離期間要進(jìn)行檢疫，結(jié)果為陰性并確定肉牛健康后才能夠混群飼養(yǎng)[7]。在日常飼養(yǎng)管理過(guò)程中，要科學(xué)配制飼料，根據(jù)肉牛所處的不同生理階段及時(shí)調(diào)整日糧配方，保證牛只能夠通過(guò)日糧攝入足夠的營(yíng)養(yǎng)，除了關(guān)注能量飼料和蛋白飼料的補(bǔ)充外，還應(yīng)適量添加維生素和礦物質(zhì)元素，提升肉牛體質(zhì)，改善飼養(yǎng)環(huán)境，控制合理的飼養(yǎng)密度，在保持舍內(nèi)溫度的情況下做好通風(fēng)換氣工作，減少舍內(nèi)有毒有害氣體的蓄積，定期對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒，消毒藥品應(yīng)選擇高效、低毒性的試劑，要選擇2 種或2 種以上的藥物輪替使用，以防細(xì)菌和病毒產(chǎn)生耐藥性。另外，還應(yīng)保證牛舍環(huán)境相對(duì)安靜，飼養(yǎng)管理人員應(yīng)每天定時(shí)、定量飼喂肉牛，在需要調(diào)整日糧配方時(shí)應(yīng)循序漸進(jìn)更換飼料，不得突然變換飼料的主要成分，減少肉牛應(yīng)激，從而減少各項(xiàng)疾病的發(fā)生。

6 結(jié) 語(yǔ)

牛病毒性腹瀉病目前沒(méi)有十分有效的治療措施，而且疫苗的預(yù)防效果也不太理想，因此應(yīng)在預(yù)防該病上多下功夫。該病毒的傳染性強(qiáng)，傳播途徑復(fù)雜多樣，在防控過(guò)程中應(yīng)從多方面著手，綜合性地預(yù)防該病的發(fā)生。在日常飼養(yǎng)管理的過(guò)程中，注重日糧營(yíng)養(yǎng)均衡，做好消毒工作，減少肉牛應(yīng)激，多渠道凈化養(yǎng)殖環(huán)境，保證牛群健康，保障養(yǎng)殖效益[8]。