簡(jiǎn)宇，范婷，代凌云，趙春虎

肺炎是一種常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，多發(fā)病于兒童及年老體弱人群，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，具有發(fā)病迅速、發(fā)展速度快、不易治療等特點(diǎn)，嚴(yán)重者可誘發(fā)心血管系統(tǒng)疾病，甚至危及生命［1］。近年來(lái)，肺炎發(fā)生率逐漸升高，給人們的生活和生命健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅［2］。肺部持續(xù)炎性反應(yīng)和感染是肺炎的主要病理形式之一［3］，而NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域3（NLRP3）∕胱天蛋白酶-1（caspase-1）通路可促進(jìn)炎性因子釋放，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，并參與肺組織損傷過(guò)程［4-5］，因此NLRP3∕caspase-1通路分子在組織炎癥損傷過(guò)程的調(diào)控作用，也受到廣大學(xué)者的關(guān)注。中醫(yī)藥在治療肺炎方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，魚(yú)腥草注射液（HHI）具有清熱、解毒、利濕作用，臨床上常用于治療肺膿瘍、痰熱咳嗽、尿路感染等癥，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，其在治療急性肺炎方面，具有較好的療效［6］，但HHI治療肺炎的具體分子生物學(xué)機(jī)制還不甚明確。本研究于2019年7月至2020年6月，用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)建立小鼠肺炎模型，探究HHI對(duì)肺炎小鼠NLRP3∕caspase-1通路的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物同遺傳背景BALB∕c雄性小鼠，清潔級(jí)，4～6周齡，體質(zhì)量20～25 g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［許可證號(hào)SCXK（粵）2018-0002］。本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。。

1.1.2 主要試劑、儀器魚(yú)腥草注射液（河南利欣制藥股份有限公司，批號(hào)B201658，規(guī)格2毫升∕支）；蘇木精-伊紅染色（HE）染色試劑盒（上海聯(lián)邁生物工程有限公司，貨號(hào)LMO105）；白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA試劑盒（上海康朗生物科技有限公司，貨號(hào)LS-F37731）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA試劑盒（上海篤瑪生物科技有限公司，貨號(hào)DMM57136）；NLRP3激動(dòng)劑二乙基二硫代氨基甲酸酯（DDC）試劑（美國(guó)Sigma公司，貨號(hào)S-0319）；NLRP3抗 體（貨 號(hào)ab264468）、caspase-1抗 體（貨 號(hào)ab138483）、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）抗體（貨號(hào)ab155970）、TNF-α抗體（貨號(hào)ab109322）、IL-6抗體（貨號(hào)ab229381），均購(gòu)自美國(guó)abcam公司；總RNA軸提?。═rizol）試劑盒（貨號(hào)T6126）、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號(hào)T1597），均購(gòu)自日本TAKARA；BCA蛋白定量試劑盒（美國(guó)Pierce公司，貨號(hào)P0768）。光學(xué)顯微鏡（貨號(hào)SMZ745，日本尼康公司）；凝膠成像儀（Miulab公司，型號(hào)GIS-500）；流式細(xì)胞分選儀（碧迪醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)ACS AriaⅡ）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（德國(guó)Eppendorf艾本德，型號(hào)Mastercycler nexus X2）等。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組、肺炎模型構(gòu)建及給藥90只小鼠分為正常對(duì)照組、模型組、HHI低（10 mL∕kg）及高（30 mL∕kg）劑量組、NLRP3激動(dòng)劑（二乙基二硫代氨基甲酸酯，DDC）組（300 mg∕kg）、HHI+DDC組（30 mL∕kg+300 mg∕kg），每組15只。除正常對(duì)照組外的各組小鼠均依據(jù)文獻(xiàn)［7］用霧化吸入LPS法構(gòu)建肺炎模型：將小鼠裝入密閉盒中，用空氣壓縮機(jī)將壓縮后的空氣送到裝有LPS濃度為2.5 g∕L的塑料管中，啟動(dòng)霧化器，將LPS霧化成為霧狀液體，并將霧化液體送入密閉盒中，持續(xù)霧化30 min即可。正常對(duì)照組小鼠僅霧化吸入0.9%的生理鹽水。造模后5 h，HHI低、高劑量組靜脈注射10 mL∕kg、30 mL∕kg的HHI［8］；DDC組灌胃給予10 mL∕kg DDC（用生理鹽水稀釋成30 g∕L的溶液）［9］；HHI+DDC組靜脈注射和灌胃給予30 mL∕kg的HHI和300 mg∕kg的DDC；模型組、正常對(duì)照組分別灌胃和靜脈注射等量生理鹽水。各組每天給藥1次，連續(xù)4 d。給藥期間觀察小鼠飲食、飲水、活動(dòng)量等一般行為狀況。

1.2.2 標(biāo)本采集末次給藥24 h后，每組按隨機(jī)數(shù)字表法選取5只小鼠，3%戊巴比妥鈉麻醉后開(kāi)胸，對(duì)左主支氣管進(jìn)行結(jié)扎，取左肺，于頸部分離氣管進(jìn)行插管后，用磷酸鹽緩沖液（PBS）灌洗右肺3次，每次1 mL，獲得支氣管肺泡灌洗液（BALF），將BALF離心分離后得上清液及細(xì)胞，備用，處死小鼠。剩余小鼠，麻醉后處死，取完整左右兩肺，右肺稱重后，置于80℃烘箱內(nèi)烘烤72 h后，稱量干質(zhì)量，計(jì)算濕∕干質(zhì)量比值。剪取左肺0.5 g組織凍存?zhèn)溆?，剩余組織立即于4%多聚甲醛中固定24 h。

1.2.3 BALF中IL-6、TNF-α含量及中性粒細(xì)胞數(shù)目檢測(cè)取“1.2.2”中的BALF上清液，按IL-6、TNF-α試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)IL-6、TNF-α含量。取“1.2.2”中BALF離心后的細(xì)胞，參照文獻(xiàn)［9］進(jìn)行混合流式抗體（CD45∕CD11b∕F4∕80∕Gr-1∕CD48）避 光 染 色15 min。用2 mL PBS溶液重懸絕對(duì)計(jì)數(shù)管（內(nèi)含有已知數(shù)目的熒光微球）后，向每個(gè)樣本管內(nèi)加入200 μL重懸液體，用流式細(xì)胞分選儀檢測(cè)BALF中中性粒細(xì)胞（CD45+CD11bhighGr-1high）及熒光微球百分比進(jìn)行檢測(cè)。按公式：中性粒細(xì)胞數(shù)目=熒光微球數(shù)目∕熒光微球百分比×中性粒細(xì)胞百分比∕10，計(jì)算中性粒細(xì)胞數(shù)目。

1.2.4 肺組織HE染色對(duì)“1.2.2”中固定的肺組織進(jìn)行常規(guī)透明、浸蠟、包埋后，切成5 μm厚的切片，依據(jù)HE染色試劑盒說(shuō)明書(shū)處理組織，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理變化。

1.2.5 qRT-PCR檢測(cè)肺組織NLRP3 mRNA、ASC mRNA表達(dá)于4℃冰箱中解凍“1.2.2”中凍存的肺組織后，用Trizol試劑盒抽提取總RNA，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄互補(bǔ)DNA（cDNA）。然后使用RT-qPCR試劑盒（SYBR Green）和PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)終止反應(yīng)。NLRP3 mRNA、ASC mRNA以β-actin為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計(jì)算PNLRP3 mRNA、ASC mRNA相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 q-RT-PCR引物序列

1.2.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)肺組織NLRP3、ASCIL-6、caspase-1、IL-6、TNF-α蛋白相對(duì)表達(dá)水平用蛋白提取試劑盒提取“1.2.5”中剩余肺組織總蛋白，定量后，取50 μg蛋白上樣，進(jìn)行電泳和轉(zhuǎn)膜，室溫下用5%脫脂牛奶封閉1 h，加入NLRP3（1∶1 000）、ASCIL-6（1∶1 000）、caspase-1（1∶1 000）、TNF-α（1∶1 000）、IL-6（1∶1 000）、β-actin（1∶2 000）一抗，4℃孵育過(guò)夜，加入HRP羊抗兔二抗（1∶2 000），37℃孵育1 h，采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色，以凝膠成像儀觀察條帶并拍照，并以Image J軟件分析蛋白表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法以SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以±s表示，多組間比較行單因素方差分析，多組間兩兩比較行SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05，表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠一般行為變化正常組小鼠毛色、飲食活動(dòng)均正常。模型組小鼠毛色失去光澤，飲食活動(dòng)量均減少，活動(dòng)后小鼠有喘息聲，且小鼠有2只死亡。HHI低、高劑量組小鼠飲食活動(dòng)量均較模型組有所增加，活動(dòng)后喘息聲有所減少，且試驗(yàn)過(guò)程中均無(wú)死亡。DDC組小鼠死亡4只，毛色枯槁，飲食活動(dòng)減少及活動(dòng)后喘息聲最嚴(yán)重。

2.2 各組小鼠肺組織病理?yè)p傷檢測(cè)結(jié)果正常對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整；模型組小鼠肺泡壁及間隔水腫、破壞、充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，肺泡腔有紅細(xì)胞滲出；HHI低、高劑量組小鼠肺泡破壞、充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷減輕，且HH高劑量組緩解效果優(yōu)于低劑量組；DDC組肺泡破壞、充血、炎性浸潤(rùn)等病理現(xiàn)象最嚴(yán)重；HHI+DDC組肺泡病理?yè)p傷與模型組相近，見(jiàn)圖1。

2.3 各組小鼠W/D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA相對(duì)表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果模型組與正常對(duì)照組相比，右肺組織W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA升高（P＜0.05）；HHI低、高劑量組與模型組相比，W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA降低（P＜0.05），且有劑量依賴性；DDC組W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA升高（P＜0.05）；模型組與HHI+DDC組相比，W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA相對(duì)表達(dá)水平比較∕

表2 各組小鼠W∕D、NLRP3 mRNA、ASCmRNA相對(duì)表達(dá)水平比較∕

注：HHI為魚(yú)腥草注射液，DDC為二硫代氨基甲酸酯，W∕D為右肺濕重∕干重，NLRP3為NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域3，ASC為凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白，β-actin為β肌動(dòng)蛋白。①與正常對(duì)照組比較，P＜0.05。②與模型組比較，P＜0.05。③與HHI+DDC組比較，P＜0.05。④與HHI低劑量組比較，P＜0.05。⑤與HHI高劑量組比較，P＜0.05。

組別正常對(duì)照組模型組HHI+DDC組HHI低劑量組HHI高劑量組DDC組F值P值鼠數(shù)10 8 10 10 10 6 W∕D 4.01±0.22 6.06±0.26①6.05±0.25①5.58±0.24①②③5.03±0.23①②③④6.69±0.26①②③④⑤149.75＜0.001 NLRP3 mRNA∕β-actin 1.01±0.12 2.06±0.15①2.03±0.15①1.81±0.14①②③1.42±0.13①②③2.61±0.16①②③④⑤152.29＜0.001 ASC mRNA∕β-actin 1.02±0.14 2.04±0.16①2.02±0.16①1.79±0.15①②③1.41±0.14①②③2.69±0.17①②③④⑤139.96＜0.001

2.4 各組小鼠BALF中IL-6、TNF-α水平及中性粒細(xì)胞數(shù)目檢測(cè)結(jié)果模型組與正常對(duì)照組相比，IL-6、TNF-α水平及中性粒細(xì)胞數(shù)目增高（P＜0.05）；HHI低、高劑量組與模型組相比，IL-6、TNF-α水平及中性粒細(xì)胞數(shù)目下降（P＜0.05），且有劑量依賴性；DDC組IL-6、TNF-α水平及中性粒細(xì)胞數(shù)目升高（P＜0.05）；HHI+DDC組與模型組相比，IL-6、TNF-α水平及中性粒細(xì)胞數(shù)目差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠BALF中IL-6、TNF-α含量及中性粒細(xì)胞數(shù)目比較

表3 各組小鼠BALF中IL-6、TNF-α含量及中性粒細(xì)胞數(shù)目比較

注：HHI為魚(yú)腥草注射液，DDC為二硫代氨基甲酸酯，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α。①與正常對(duì)照組比較，P＜0.05。②與模型組比較，P＜0.05。③與HHI+DDC組比較，P＜0.05。④與HHI低劑量組比較，P＜0.05。⑤與HHI高劑量組比較，P＜0.05。

組別正常對(duì)照組模型組HHI+DDC組HHI低劑量組HHI高劑量組DDC組F值P值鼠數(shù)5 5 5 5 5 5 IL-6∕（μg∕L）569.91±50.89 1 692.06±95.26①1 690.58±95.04①1 069.13±75.12①②③889.02±65.13①②③1 896.69±99.26①②③④⑤420.69＜0.001 TNF-α∕（μg∕L）506.99±55.48 1 846.24±99.26①1 840.18±98.98①1 225.33±84.02①②③806.63±69.12①②③2 296.69±99.26①②③④⑤641.52＜0.001中性粒細(xì)胞數(shù)目∕（×106個(gè)∕毫升）5.09±1.98 66.24±2.56①65.18±2.48①45.33±2.22①②③22.63±2.02①②③80.69±2.56①②③④⑤1 561.08＜0.001

2.5 各組小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)結(jié)果與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與模型組相比，HHI低、高劑量組NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），且有劑量依賴性；DDC組小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)增高（P＜0.05）；HHI+DDC組與模型組相比，NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4，圖2。

表4 各組小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)比較

表4 各組小鼠肺組織NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)比較

注：HHI為魚(yú)腥草注射液，DDC為二硫代氨基甲酸酯，NLRP3為NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域3，ASC為凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白，caspase-1為胱天蛋白酶-1，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α，β-actin為β肌動(dòng)蛋白。①與正常對(duì)照組比較，P＜0.05。②與模型組比較，P＜0.05。③與HHI+DDC組比較，P＜0.05。④與HHI低劑量組比較，P＜0.05。⑤與HHI高劑量組比較，P＜0.05。

組別正常對(duì)照組模型組HHI+DDC組HHI低劑量組HHI高劑量組DDC組F值P值鼠數(shù)10 8 10 10 10 6 NLRP3∕β-actin 0.22±0.12 1.01±0.13①1.02±0.13①0.83±0.11①②③0.52±0.12①②③④1.31±0.13①②③④100.39＜0.001 ASC∕β-actin 0.29±0.11 1.03±0.13①1.04±0.12①0.82±0.12①②③0.54±0.11①②③④1.39±0.13①②③④106.55＜0.001 caspase-1∕β-actin 0.25±0.12 1.06±0.14①1.05±0.14①0.80±0.15①②③0.59±0.12①②③④1.37±0.12①②③④89.75＜0.001 TNF-α∕β-actin 0.31±0.13 1.13±0.17①1.14±0.16①0.86±0.15①②③0.61±0.15①②③④1.43±0.13①②③④74.19＜0.001 IL-6∕β-actin 0.32±0.13 1.16±0.17①1.15±0.16①0.85±0.15①②③0.62±0.14①②③④1.46±0.12①②③④80.38＜0.001

圖2 各組小鼠肺組織中NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)免疫印跡圖

3 討論

肺炎發(fā)病率和死亡率較高，其病原體繁多且以細(xì)菌感染最為常見(jiàn)，而LPS是革蘭陰性菌主要致病物質(zhì)，可引起肺部細(xì)菌感染，使肺內(nèi)中性粒細(xì)胞聚集和激活并產(chǎn)生炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致肺損傷［10］。霧化吸入LPS所致的動(dòng)物肺部損傷及病理變化表現(xiàn)穩(wěn)定，接近于臨床急性肺炎發(fā)展情況［11］。本研究采用霧化吸入LPS方法建立小鼠急性肺炎模型，發(fā)現(xiàn)模型組小鼠毛色失去光澤，活動(dòng)后喘息聲明顯且有死亡，肺組織W∕D、BALF中炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α含量及中性粒細(xì)胞數(shù)目均明顯高于正常對(duì)照組，HE染色可見(jiàn)肺泡破壞、充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理現(xiàn)象嚴(yán)重，與文獻(xiàn)［7］研究模型小鼠吸入LPS 5 h后肺組織病理癥狀結(jié)果一致，提示小鼠急性肺炎模型造模成功。

近年來(lái)，由于抗生素、糖皮質(zhì)激素以及免疫抑制劑的濫用、菌種變異和耐藥性的出現(xiàn)，使西醫(yī)抗生素治療肺炎療效變差，肺炎病人病死率逐漸升高［12］。中醫(yī)認(rèn)為細(xì)菌為“風(fēng)熱之邪”、侵襲人體并首先犯肺，使機(jī)體虛邪相合、痰瘀互阻、肺臟宣降功能異常而發(fā)病，且認(rèn)為肺炎病性屬熱、病位在肺，屬“風(fēng)溫””肺熱”“咳嗽”等范疇，且用清熱入肺藥物來(lái)清熱肅肺、豁痰止咳，達(dá)到良好的治療效果［13-14］。魚(yú)腥草味辛、性寒涼，歸經(jīng)為肺，能清熱解毒、消腫療瘡，用治實(shí)熱、熱毒、濕邪、疾熱為患的肺癰且為治肺臃要藥，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有較好的抗炎效果，有“中藥抗生素”之稱［15］。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)腥草可治療肺熱咳嗽、尿路感染等癥，如楊宏志［16］發(fā)現(xiàn)魚(yú)腥草為治熱痰妙方-復(fù)方鮮竹瀝的主要成分，能清熱解毒，可助鮮竹瀝清熱，生半夏、枇杷葉化痰，證實(shí)魚(yú)腥草清熱化痰之功，然而其具體分子機(jī)制還不明確；岑凱瑩、王海穎［17］發(fā)現(xiàn)魚(yú)腥草中藥提取物可降低肺炎支原體感染小鼠血清干擾素及炎性因子IL-6表達(dá)水平，證實(shí)魚(yú)腥草具有較好的抗炎、抗菌效果；陳彤等［18］發(fā)現(xiàn)魚(yú)腥草液對(duì)大腸埃希菌引起的尿路感染有較好的治療作用，且對(duì)膀胱無(wú)過(guò)敏性損害，證實(shí)魚(yú)腥草具較好的抑菌效果，但其抑菌作用的具體機(jī)制仍不明確。基于魚(yú)腥草抗炎、抗菌、清肺熱作用，本研究推測(cè)其注射液HHI對(duì)急性肺炎有較好的保護(hù)作用，并給予LPS誘導(dǎo)的急性肺炎小鼠HHI進(jìn)行干預(yù)治療，發(fā)現(xiàn)HHI低、高劑量組小鼠無(wú)死亡，活動(dòng)后喘息聲減少，肺泡壁破壞、充血、炎性浸潤(rùn)等病理?yè)p傷緩解，W∕D、IL-6、TNF-α含量、中性粒細(xì)胞數(shù)目均明顯低于模型組，且HHI高劑量組上述肺組織炎性損傷指標(biāo)改善效果優(yōu)于低劑量組，提示HHI可改善LPS導(dǎo)致的急性肺炎小鼠肺組織炎性損傷，表明HHI對(duì)急性肺炎有一定治療作用。但HHI治療急性肺炎的具體分子生物學(xué)機(jī)制還不明確，本研究建立NLRP3炎癥通路激動(dòng)劑進(jìn)行探究，具有一定的臨床意義。

炎癥反應(yīng)是急性肺炎的病理基礎(chǔ)，NLRP3、ASC、caspase-1共同組成炎癥復(fù)合體，ASC可連接NLRP3與caspase-1，并能與NLRP3相互激活，NLRP3活化后可激活效應(yīng)蛋白caspase-1，影響IL-6、IL-8等炎性因子表達(dá)，從而誘發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，加速疾病的發(fā)展［19］。Madouri等［20］發(fā)現(xiàn)體內(nèi)外激活caspase-1，NLRP3和ASC的表達(dá)，可有助于過(guò)敏性肺部炎性因子的上調(diào)，證實(shí)NLRP3∕caspase-1通路參與肺組織炎癥反應(yīng)過(guò)程。本研究發(fā)現(xiàn)模型組小鼠肺組織NLRP3 mRNA及蛋白、ASC mRNA及蛋白、caspase-1、IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)均高于正常對(duì)照組，給予小鼠NLRP3通路激活劑DDC后，小鼠肺組織隨著NLRP3、ASC基因及相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)一步增高后，小鼠喘息聲加重，死亡只數(shù)進(jìn)一步增加，肺泡破壞、充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)最嚴(yán)重，肺組織炎癥損傷相關(guān)指標(biāo)也進(jìn)一步加重，提示激活NLRP3∕caspase-1通路，可加重肺炎小鼠炎癥反應(yīng)和肺組織損傷。而隨著HHI劑量升高，小鼠肺組織NLRP3∕caspase-1炎癥通路及相關(guān)蛋白表達(dá)降低越明顯，且HHI與DDC聯(lián)用后，小鼠肺組織NLRP3∕caspase-1炎癥通路及相關(guān)蛋白表達(dá)與HHI高劑量組相反，肺組炎癥損傷增加，提示DDC可激活NLRP3∕caspase-1通路逆轉(zhuǎn)HHI緩解肺炎小鼠肺組織炎性損傷，表明HHI可能通過(guò)抑制NLRP3∕caspase-1通路激活改善肺炎小鼠炎癥反應(yīng)，緩解肺損傷。

綜上所述，HHI可通過(guò)抑制NLRP3∕caspase-1通路激活，改善肺炎小鼠炎癥反應(yīng)，緩解肺損傷，為急性肺炎的臨床治療提供理論依據(jù)。然而，NLRP3調(diào)控機(jī)制復(fù)雜，且中醫(yī)藥對(duì)肺炎的治療具有多靶點(diǎn)的作用，HHI治療急性肺炎的其他分子生物學(xué)機(jī)制待后續(xù)深入研究。

（本文圖1見(jiàn)插圖1-4）

圖1 各組小鼠肺組織染色圖（HE染色×200）