馮騰壘， 宋 瑞， 高景報， 劉 洋， 許 寧， 趙永坡， 謝 亮

（1. 石家莊市畜產品和獸藥飼料質量檢測中心 050041； 2. 河北省農業(yè)農村廳 050000；3. 河北省農業(yè)技術推廣總站 050000； 4. 石家莊市農林科學研究院 050000； 5. 新樂市農業(yè)農村局 050000）

氟喹諾酮類藥物是人工合成的第三代抗菌藥物，此類藥物價格低廉、抗菌作用強，因而被廣泛用于治療畜禽動物的細菌感染疾病[1-3]。常見的氟喹諾酮類藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星等[4]。但當人體食用含有該類藥物的畜禽產品后，會引發(fā)人體內分泌系統(tǒng)紊亂、神經系統(tǒng)損傷及誘發(fā)體內細菌產生耐藥性[5]，因此國家已規(guī)定了畜禽產品中氟喹諾酮類化合物的最高殘留限量。但是由于部分從業(yè)人員對獸藥殘留限量的認識不足，甚至一味兒追求經濟利益，存在不規(guī)范使用該類藥物，甚至在動物飼養(yǎng)、飼料中大量使用，使得畜禽產品中氟喹諾酮類化合物殘留限量超標[6]，對人類身體健康造成嚴重危害。因此，建立高效、靈敏的方法來檢測畜禽產品中氟喹諾酮類藥物變得十分重要。近年來，針對畜禽產品中氟喹諾酮類藥物的殘留檢測方法主要有高效液相-質譜聯(lián)用法[7]、酶聯(lián)免疫吸附法[8]、分子印跡技術法[9]、高效液相色譜法[10]等。本文闡述了近年來氟喹諾酮類藥物的殘留檢測進展，并為今后該類化合物的檢測發(fā)展做了展望。

1 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）以液體作為流動相，利用高壓輸液泵，將具有不同極性的單一溶劑或混合溶劑等流動相泵入裝有固定相的色譜柱中，依據極性不同將各組分在色譜柱內分離后，隨后進入檢測器進行檢測分析，從而實現(xiàn)對樣品的檢測。近年來又有廠家開發(fā)提供更大壓力的液相色譜系統(tǒng)，使用更高的壓力，更小的流速，使得檢測時間大大縮短，而更小的色譜柱粒徑，提高了柱效，改善了峰的分離度。該方法檢測速度快、靈敏性好、應用范圍廣，因此被廣泛應用于藥品分析、獸藥殘留檢測中。

陳薔[11]等利用反相高效液相色譜法，建立了對雞蛋中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法。該方法采用正己烷脫脂，利用C18固相萃取柱凈化，反相高效液相色譜分離后，進入熒光檢測器測定。該方法中達氟沙星的檢測限達到 1μg/kg。平均回收率達到82.2%～101.3%。劉媛[12]等利用高效液相色譜法，同時檢測雞蛋中 4 種氟喹諾酮類藥物。該方法以乙腈-0.05mol/L磷酸/三乙胺緩沖液（pH 2.4）（19∶81）作為流動相，并采用熒光檢測器，來檢測雞蛋中的4種氟喹諾酮類化合物。該方法中達諾沙星的最低檢出限為2ug/kg，環(huán)丙沙星、沙拉沙星/恩諾沙星的最低檢出限為10ug/kg，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星在2.5～500ug/l， 達諾沙星在 0.5～100ug/l線性范圍良好，且雞蛋中 4 種氟喹諾酮類化合物的加標回收率為 78.1% ～95.7%。陳小紅[13]等建立了采用高效液相色譜法測定雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留檢測的方法，該方法采用熒光檢測器檢測，外標法定量，該方法表明雞蛋中4 種氟喹諾酮類殘留藥物能在 15 min內得到有效分離，且達氟沙星檢測限達到2ug/kg，回收率高。

2 液相色譜-質譜聯(lián)用法（LC-MS）

液相色譜-質譜聯(lián)用法（LC-MS）檢測化合物殘留是將樣品在液相色譜柱中分離后，隨后進入質譜系統(tǒng)中，將目標化合物分子離子化后，通過測量各種離子峰的強度，從而實現(xiàn)檢測化合物分析方法。

肖英平[14]等建立了高效液相色譜-質譜檢測原料乳中的氟喹諾酮類化合物殘留的檢測方法，該方法采集了120份原料乳，結果表明，19種氟喹諾酮類化合物殘留的的檢出限達到0.05～0.25ug/L，回收率在88.2%～109.2%。該方法分離效果好、準確性高。楊朝琳[15]等建立了利用液相色譜-質譜聯(lián)用法來分析測定雞蛋樣品中氟喹諾酮類化合物殘留的方法。該方法利用磷酸-乙腈提取、離心后，經流動相分離，采用電噴霧離子源，多反應監(jiān)測模式，進行定量分析檢測。該方法對8種氟喹諾酮類化合物在濃度為2～50ug/kg之間，線性范圍良好，線性系數(shù)均大于0.9956，8種氟喹諾酮類4化合物殘留的檢出限達到0.0005 ～0.22ug/kg，回收率為65.4%～119.6%。該方法優(yōu)化了前處理程序，不使用固相萃取柱，并通過基質加標消除基質效應，具有經濟可靠、靈敏性高等優(yōu)點。宋偉[16]等建立了利用超高效液相色譜-質譜法測定雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的檢測分析方法，該方法用乙腈提取，并輔助以高速冷凍離心，用流動相溶解后，再用乙腈飽和正己烷除脂，最后將樣品用超高效液相-質譜聯(lián)用議進行定量分析檢測。該方法結果表明，喹諾酮類化合物檢出限為0.1ug/kg，定量限達到0.5ug/kg，方法回收率為81.5%～97.6%，該方法簡便、準確度高，可作為雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法。曹惠[17]等建立了同位素稀釋-固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法來檢測畜禽肉產品中四類獸藥殘留的方法，該方法以乙腈和0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫，在電噴霧正離子多反應監(jiān)測模式下，進行定量分析測量。利用該方法測定的氟喹諾酮類化合物在在5～200ug/L濃度范圍內，氟喹諾酮類化合物的線性相關系數(shù)均大于0.99，方法檢出限在0.5～2.0ug/kg，定量限在2.0～6.5ug/kg，該方法經濟、高效、準確度高，適用于檢測畜禽產品中氟喹諾酮類化合物的快速檢測和確證。

3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是一種免疫測定方法，其是依靠抗原和抗體的特異性反應，具有針對性強、高效、快捷、耗費低等優(yōu)點，在獸藥殘留檢測方面應用廣泛。李燕君[18]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測定牛奶中6種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法，該方法在 20℃～25℃下進行，結果表明，本方法建立的酶聯(lián)免疫吸附法的最低檢測限達到1.48ug/L，50% 抑制濃度的范圍在 0.254～0.361ug/L； 方法回收率達到84.58%～115.92%，此方法高速靈敏、精密度高、準確性好，適用于牛奶中氟喹諾酮類化合物的殘留檢測分析。李建鯤[19]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測定了雞蛋中的氟喹諾酮類化合物的殘留檢測分析，結果表明，氟喹諾酮類化合物在 0～8.ng/g范圍內 ，線性關系良好，線性相關系數(shù) r 為 0.997 6，50%抑制濃度在0.306～0.351 ng/g，回收率達到90.0%～102.0%，最低檢測限達到 3.2 ng/g，用該方法檢測雞蛋中氟喹諾酮類藥物靈敏性強、精密度高，檢測結果可靠，適用于在雞蛋中檢測該類化合物。

4 分子印跡技術方法（MIT）

分子印跡技術（MIT） 指的是通過制備某種對目標化合物具備高度選擇性的物質，從而達到目標化合物分離的目的，該方法能從復雜的基質樣品中選擇性分離目標化合物。由于氟喹諾酮類化合物大多具有氫鍵，易于形成分子印跡聚合物，因此分子印跡技術被廣泛用于測定畜禽產品中氟喹諾酮類化合物的測定方法。

呂運開[20]等利用水相系統(tǒng)，制備出諾氟沙星印跡溶膠—凝膠材料，并采用高效液相色譜法檢測分析魚樣品中的氟喹諾酮化合物殘留，該方法分離效果好、準確度高。結果表明，魚樣品中的氟喹諾酮類化合物回收率在88.46%～98.24%，回收率高。杜麗麗等利用加替沙星為模板，并結合分子印跡技術，制備出新型的印跡聚合物，該聚合物具有高度識別性，以此作為填充材料，利用液相色譜法，檢測牛奶樣品中氟喹諾酮類化合物。利用該方法檢測牛奶中的加替沙星，其回收率達到79.87%，具有潛在應用價值。

本文論述了近幾年畜禽產品中氟喹諾酮類化合物殘留檢測技術的研究進展，大多具有高選擇性、靈敏度強、準確度高等優(yōu)點，但所需操作復雜、樣品前處理繁瑣等缺點，因此還需進一步開發(fā)新型檢測氟喹諾酮類化合物的檢測方法，以檢測畜禽產品中殘留的氟喹諾酮類藥物。