胡錦 ，王小云，張艷軍 ，劉紅梅，王慧，張宏斌 ，鄭霞林*

（1.廣西農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530004；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所 天津市 300191；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部產(chǎn)地環(huán)境污染防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津市 300191；4.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護(hù)總站 北京市 100125）

木瓜秀粉蚧Paracoccus marginatus（Williams&Granara de Willink），隸屬于半翅目（Hemiptera）粉蚧科（Pseudococcidae）秀粉蚧屬（Paracoccus），又稱木瓜粉蚧，原產(chǎn)于墨西哥和中美洲[1]，現(xiàn)已擴(kuò)散至全球53 個(gè)國(guó)家[2]。其寄主范圍廣、繁殖速率快、適應(yīng)性強(qiáng)、適生地廣[3]，正逐步成為世界危險(xiǎn)性入侵性農(nóng)林害蟲(chóng)。該蟲(chóng)雜食性，寄主達(dá)51 科158 屬260 余種，包括果樹(shù)、糧食（經(jīng)濟(jì)）作物、園林綠化（觀賞）植物等[2]。受該蟲(chóng)為害后，作物嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收，常給農(nóng)民造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4-6]。例如，該蟲(chóng)于2008年入侵危害斯里蘭卡的科倫坡和加姆珀哈，危害損失高達(dá)60%～100%，平均危害損失達(dá)85.9%[7]；此危害也造成孟加拉國(guó)番木瓜約700美元/ha·a的經(jīng)濟(jì)損失[6]。

我國(guó)于2010 年首次在臺(tái)灣省發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了木瓜秀粉蚧的危害及寄主植物[8]，隨后相繼在云南[9-10]、廣東[11]、海南[12]、福建[13]和江西[14]發(fā)現(xiàn)該蟲(chóng)在不同寄主上為害。為避免該蟲(chóng)在我國(guó)進(jìn)一步擴(kuò)散和危害，我國(guó)學(xué)者提出了預(yù)警[15-16]，并針對(duì)其生物學(xué)特性[17-19]、適生性及風(fēng)險(xiǎn)分析[20-22]、與寄主間的相互作用關(guān)系[22-25]、生物防治[26]、化學(xué)防治[27-29]等方面展開(kāi)了大量研究，為遏制該蟲(chóng)的進(jìn)一步擴(kuò)散及制定綜合防控策略提供了基礎(chǔ)資料。

2021 年5 月，筆者在廣西東興的番木瓜Carica papayaL.和茄瓜Solanum melongenaL.上采集到一種粉蚧，經(jīng)形態(tài)和分子鑒定，確定該蟲(chóng)為木瓜秀粉蚧。這是廣西首次發(fā)現(xiàn)該世界危險(xiǎn)性入侵害蟲(chóng)，其形態(tài)和分子鑒定結(jié)果如下文所述。

1 材料與方法

1.1 材料

2021年5月28日至30日，廣西東興市在開(kāi)展外來(lái)入侵物種踏查中，于馬路鎮(zhèn)竹圍村村路旁的番木瓜（108.041174 °E，21.642753 °N）和馬路村菜地中的茄（107.955600 °E，21.654637 °N）上均發(fā)現(xiàn)一種粉蚧，且發(fā)生嚴(yán)重。記錄其為害狀后，采集帶蟲(chóng)的植物枝葉置于圓形塑料盒中（高=13.5 cm，底部直徑=12.5 cm，頂部直徑=17.2 cm），采集部分蟲(chóng)體置于裝有90%酒精的50 mL離心管中，帶回廣西大學(xué)實(shí)驗(yàn)室待用。

1.2 形態(tài)鑒定

參考前人資料[10-11，30]，根據(jù)樣本形態(tài)特征進(jìn)行種類鑒定。

1.3 分子鑒定

1.3.1 基因組DNA提取

將單頭木瓜秀粉蚧置于1.5 mL離心管中，用全自動(dòng)研磨儀（JXFSTPRP-24，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司，中國(guó)）磨碎蟲(chóng)體，參照DNeasy Blood&Tissue Ki（t69506，QIAGENE，德國(guó)）DNA 提取試劑盒（離心柱型）的方法提取木瓜秀粉蚧DNA備用。

1.3.2 28S rDNA基因序列的擴(kuò)增、電泳檢測(cè)及膠回收

以所得木瓜秀粉蚧DNA 為模板，使用文獻(xiàn)報(bào)道的28S rDNA基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[13]。其中上游引物為28S-parF:5′-CGGAATTCAGAATTTGTGGCGTTTAC-3′，下游引物為 28S-marR: 5′-CGGCCATATTACAAGAAT-3′。該引物委托南寧擎科生物公司合成。

PCR 反應(yīng)體系（25 μL 體系）為：Premix Taq ?（Ex Taq ? Version 2.0 plus dye）（RR902A，TaKaRa，中國(guó)）12.5 μL，上游引物、下游引物各1 μL，模板DNA 0.5 μL，ddH2O 10 μL；PCR 反應(yīng)參數(shù)為：98℃變性 10s，55℃退火 30s，72℃延伸1 min，運(yùn)行 30 個(gè)循環(huán)。取PCR 產(chǎn)物于1%（w）的瓊脂糖凝膠上，在120 V電壓下電泳40 min后在紫外凝膠成像系統(tǒng)中分析電泳結(jié)果。將電泳所得條帶用Easy-Pure?Quick Gel Extraction Kit（EG101，TransGene，中國(guó)）進(jìn)行膠回收。

1.3.3 序列測(cè)定與分析

膠回收產(chǎn)物委托南寧擎科生物公司進(jìn)行序列測(cè)通測(cè)序。將所得的28S rDNA 序列在NCBI 的BLAST 進(jìn)行檢索；下載相似度達(dá)到90%以上的序列，通過(guò)DNAMAN軟件進(jìn)行多重序列比對(duì)，確定序列檢測(cè)結(jié)果。利用MEGA（v7.0）軟件及鄰接法（Neighbor-joining Method，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并對(duì)各分支進(jìn)行1 000次Bootstrap檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)鑒定

自然條件下，該粉蚧以若蟲(chóng)和雌成蟲(chóng)形態(tài)聚集于番木瓜（圖1A）和茄（圖1B）的嫩梢、嫩葉、枝干和葉背刺吸為害，造成葉片畸形（圖1C）。室內(nèi)鏡檢發(fā)現(xiàn)，雌成蟲(chóng)體橢圓形，無(wú)翅，體背被有較薄白色蠟粉，隱約可見(jiàn)淡黃色體壁（圖1D）；體長(zhǎng)1.67～2.65 mm，體緣具16 對(duì)較短蠟絲；背腹均具蕈狀腺，分布于體緣近刺孔群處，后足基節(jié)具透明孔，脛節(jié)無(wú)腺孔；刺孔群16～17 對(duì)；卵囊發(fā)達(dá)，由蠟絲組成（圖1E），卵300～500 余粒；卵長(zhǎng)橢圓形，淡黃色（圖1F），鑒定該蟲(chóng)為木瓜秀粉蚧。

圖1 木瓜秀粉蚧的為害狀及形態(tài)特征

2.2 分子鑒定

2.2.1 木瓜秀粉蚧28S rDNA基因的PCR擴(kuò)增

通過(guò)使用木瓜秀粉蚧28S rDNA 的引物28S parF/marR 對(duì)采自廣西東興的番木瓜和茄2 種寄主植物上的粉蚧進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分別得到約428 bp和425 bp的條帶（見(jiàn)圖2）。

圖2 28S rDNA引物28S-parF/marR對(duì)2種寄主植物上木瓜秀粉蚧的擴(kuò)增結(jié)果電泳檢測(cè)

將測(cè)通后的序列放入NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，2種寄主植物上的粉蚧與數(shù)據(jù)庫(kù)中Paracoccus marginatusisolate S3-668，KP692333 的相似度為100%，確定這2種寄主植物上的粉蚧均為木瓜秀粉蚧。分別將其提交至NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)，分配得到登錄號(hào)為MZ407948和MZ407949。

2.2.2 系統(tǒng)發(fā)育分析

選擇NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析相似度在90%以上物種與試驗(yàn)測(cè)序所得2種不同寄主植物上木瓜秀粉蚧的28S rDNA 基因片段序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。運(yùn)用MEGA（v7.0）軟件，使用鄰接法且選擇Kimura-2-Parameter 遺傳距離模型構(gòu)建木瓜秀粉蚧的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并對(duì)每個(gè)分支進(jìn)行1 000次Bootstrap檢驗(yàn)。結(jié)果表明，采自廣西東興番木瓜和茄瓜上的木瓜秀粉蚧與Paracoccus marginatus聚為一支，分支支持率為100%。表明目標(biāo)樣本與Paracoccus marginatus為同一物種（見(jiàn)圖3）。

圖3 基于木瓜秀粉蚧28S rDNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)

3 討論

木瓜秀粉蚧是全球重要的入侵性物種，超過(guò)20多個(gè)國(guó)家將其列為檢疫對(duì)象。我國(guó)海關(guān)也曾從進(jìn)境的多種植物上發(fā)現(xiàn)該蟲(chóng)[15，31]。為此，中華人民共和國(guó)海關(guān)總署多次發(fā)文要求針對(duì)包括木瓜秀粉蚧在內(nèi)的進(jìn)境植物和水果等加強(qiáng)植物檢疫。目前，該蟲(chóng)在我國(guó)5 個(gè)省已有分布和危害的報(bào)道，本文首次報(bào)道了該蟲(chóng)在廣西的分布和寄主，使得其在國(guó)內(nèi)的分布省份增加至6個(gè)。由于此次在廣西調(diào)查時(shí)間和地點(diǎn)的局限性，目前該蟲(chóng)在廣西的分布及寄主與前人報(bào)道的結(jié)果[2，10，14]相比略少。然而，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分析結(jié)果表明，廣西是木瓜秀粉蚧的高適生區(qū)[3，16]。因此，筆者推測(cè)該蟲(chóng)在廣西實(shí)際的地理分布和寄主范圍更加廣泛，需要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情，及時(shí)上報(bào)和處理，避免其進(jìn)一步擴(kuò)散和危害。

雖然，本文明確了木瓜秀粉蚧在廣西的地理分布。然而，關(guān)于該蟲(chóng)的來(lái)源還不明確。前人報(bào)道了該蟲(chóng)在越南廣泛分布[32]，在河內(nèi)周年均可發(fā)生，一年中有兩個(gè)明顯的發(fā)生高峰期（6月上旬至7月上旬，9月下旬至10 月中下旬），且第二個(gè)高峰期的種群密度往往高于第一個(gè)高峰期[33]。廣西東興與越南河內(nèi)接壤，筆者推測(cè)該蟲(chóng)可能由越南經(jīng)自然擴(kuò)散進(jìn)入東興。此外，也不排除廣西境內(nèi)的木瓜秀粉蚧是由國(guó)內(nèi)已有該蟲(chóng)發(fā)生的地區(qū)苗木或果品等調(diào)運(yùn)傳入廣西，但均需進(jìn)一步研究證實(shí)。