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        基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜和多成分定量的不同產(chǎn)地辣木葉藥材及其黃酮部位質(zhì)量研究

        2022-12-28 00:28:16袁永兵王保錦常子豪劉宇琦陳尹心周立鵬雒曉衛(wèi)王樹楷劉鄉(xiāng)鄉(xiāng)張?zhí)m珍
        中草藥 2022年24期
        關(guān)鍵詞:牡荊槲皮苷木葉

        袁 靜,袁永兵,周 銘,劉 越,黃 雅,王保錦,常子豪,劉宇琦,胡 倩,陳尹心,周立鵬,雒曉衛(wèi),王樹楷,劉鄉(xiāng)鄉(xiāng),張?zhí)m珍*

        基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜和多成分定量的不同產(chǎn)地辣木葉藥材及其黃酮部位質(zhì)量研究

        袁 靜1,袁永兵2,周 銘1,劉 越1,黃 雅1,王保錦1,常子豪1,劉宇琦1,胡 倩1,陳尹心1,周立鵬1,雒曉衛(wèi)1,王樹楷1,劉鄉(xiāng)鄉(xiāng)3,張?zhí)m珍1*

        1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京 102488 2. 天津藥物研究院,天津 300462 3. 廣州澤力醫(yī)藥科技有限公司,廣東 廣州 510663

        建立不同產(chǎn)地辣木葉藥材和黃酮部位UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜和多成分定量方法,并進行化學(xué)計量學(xué)分析,為辣木葉藥材和黃酮部位的質(zhì)量控制提供參考。采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS檢測并結(jié)合“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012A版)”建立15個不同批次辣木葉藥材和黃酮部位(S1~S15)指紋圖譜,并進行相似度評價和共有峰指認,測定3個黃酮類成分異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷含量。采用聚類分析(hierarchical clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判別分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)等化學(xué)計量學(xué)分析方法對15批不同產(chǎn)地辣木葉藥材質(zhì)量和黃酮部位進行評價。15批不同產(chǎn)地辣木葉藥材標定了17個共有峰,指認出其中14個共有峰;辣木葉黃酮部位標定和指認出10個共有峰。15批不同產(chǎn)地辣木葉和黃酮部位的相似度和HCA分析聚為4類,且HCA結(jié)果與相似度評價結(jié)果基本相一致;PCA、OPLS-DA分析聚為3類。15批藥材中異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的含量分別為0.06%~0.19%、0.27%~0.79%、0.08%~0.23%;黃酮部位中含量分別為0.53%~3.53%、6.49%~14.36%、2.05%~4.66%。建立了專屬性強、靈敏度高的不同產(chǎn)地辣木葉藥材和辣木葉黃酮部位的定性定量方法,為辣木葉藥材和辣木葉黃酮部位綜合評價提供依據(jù)。

        辣木葉;辣木葉黃酮部位;UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS;指紋圖譜;化學(xué)計量學(xué);異牡荊素;異槲皮苷;紫云英苷

        辣木Lam.為辣木科辣木屬多年生喬木,原產(chǎn)于印度和非洲的干旱或半干旱地區(qū)[1-2],于20世紀早期引進我國云南[3-4],目前在云南、海南、福建、廣東、廣西等地均有種植,已成為一種極具營養(yǎng)價值、藥用價值和經(jīng)濟價值的植物,且在2012年被列為我國新資源食品原料[5]。根據(jù)《印度阿育吠托藥典》()中的記載,辣木葉味甘性涼,具有除風(fēng)、消除脂肪、止痛、殺腹蟲、潤膚、明目、清腦等功效。具有良好的抗炎、抗氧化、抗腫瘤、降糖、降壓、調(diào)血脂等生物活性[6]。辣木葉質(zhì)量研究目前有辣木葉藥材HPLC指紋圖譜和含量測定[7-8],但對不同產(chǎn)地多批次藥材及黃酮部位的UPLC-MS指紋圖譜及黃酮多成分含量測定綜合評價尚無報道。本研究建立了不同產(chǎn)地辣木葉藥材和黃酮部位的UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜,并進行化學(xué)計量學(xué)分析和主要黃酮成分含量測定,為辣木葉藥材和黃酮部位的質(zhì)量控制提供參考。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器

        Acquity UPLC H-Class液相色譜儀(包括PDA檢測器,美國Waters公司);DIONEX Ultimate 3000超高效液相色譜系統(tǒng),Q Exactive FOCUS質(zhì)譜儀(美國Thermo Scientific公司,配有電噴霧離子源ESI以及Xcalibur 3.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、Compound Discover 3.0軟件);SECURA124-1CN型電子天平(十萬分之一,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);KQ5200E型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

        1.2 試藥

        對照品異牡荊素、異槲皮素、紫云英苷均為實驗室自制,質(zhì)量分數(shù)均>98%;甲醇、乙腈(美國Fisher公司,色譜純);磷酸(天津光復(fù)精細化工研究所,色譜純);甲酸(天津市大茂化學(xué)試劑廠,色譜純);超純水。

        15批辣木葉產(chǎn)地來源見表1。由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系劉春生教授鑒定均為辣木.Lam.葉,樣品保存于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥化學(xué)實驗室。

        表1 辣木葉產(chǎn)地來源

        2 方法與結(jié)果

        2.1 指紋圖譜的建立

        2.1.1 色譜條件 色譜柱:Acquity UPLC HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm);流動相:0.1%甲酸溶液-乙腈,藥材梯度洗脫:0~10 min,3.0%~6.0%乙腈;10~11 min,6.0%~10.5%乙腈;11~20 min,10.5%~16.5%乙腈;20~28 min,16.5%~27.0%乙腈;黃酮部位梯度洗脫:0~2 min,3.0%~5.0%乙腈;2~8 min,5.0%~8.0%乙腈;8.0~8.1 min,8.0%~10.5%乙腈;8.1~16.0 min,10.5%~28.0%乙腈;體積流量0.4 mL/min;柱溫30 ℃;進樣量5 μL。

        2.1.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子化電離源(ESI);負極性毛細管電壓3.0 kV;毛細管溫度320 ℃;檢測模式:負離子模式;掃描范圍:120~1800;鞘氣體積流量35 arb;輔助氣體積流量10 arb;離子源溫度400 ℃;質(zhì)譜分辨率(70 000/17 500);碰撞能量(階梯模式):30、35、40 eV。

        2.1.3 對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品牡荊素、異槲皮苷和紫云英苷適量,加甲醇溶解稀釋,即得異牡荊素(0.228 mg/mL)、異槲皮苷(0.416 mg/mL)、紫云英苷(0.169 mg/mL)的對照品溶液。

        2.1.4 供試品溶液的制備

        (1)藥材供試品溶液制備:稱取15批辣木葉粉末0.5 g,精密稱定,分別置于100 mL錐形瓶中,加入50%甲醇50 mL,稱定質(zhì)量,室溫浸泡30 min后,超聲60 min,放至室溫,補足減失的質(zhì)量,濾過,取續(xù)濾液即得辣木葉供試品溶液,進樣前過0.22 μm微孔濾膜。

        (2)黃酮部位供試品溶液的制備:稱取15個不同批次的辣木葉粉,70%乙醇70 ℃加熱浸泡2 h,溶劑用量為20倍,提取2次,合并濾液后濃縮成質(zhì)量濃度為0.1 g生藥/mL的藥液,離心,上清液上樣于20 mL NKA-9型大孔樹脂,上樣5個柱體積,進行動態(tài)吸附,吸附體積流量1 mL/min,待吸附完成后,用蒸餾水除雜4個柱體積,除雜體積流量1 mL/min,洗脫劑為60%乙醇,洗脫體積為5個柱體積,洗脫體積流量為1 mL/min,收集60%乙醇洗脫液,減壓干燥即得辣木葉黃酮部位。稱取黃酮部位10 mg,精密稱定,分別置于25 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并定容,即得黃酮部位供試液,進樣前過0.22 μm微孔濾膜。

        2.1.5 精密度試驗 取批號藥材(S1)及其黃酮部位供試品溶液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的條件進樣測定,分別連續(xù)進樣6次,以異槲皮苷峰(藥材為11號和黃酮部位為D號峰)為參照峰,計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積并計算RSD。藥材相對保留時間的RSD<0.16%,相對峰面積的RSD<3%;黃酮部位相對保留時間的RSD<0.24%,相對峰面積的RSD<3%;且藥材各譜圖相似度均在0.999以上,黃酮部位各譜圖相似度均為1.0,符合指紋圖譜技術(shù)要求,表明儀器精密度良好。

        2.1.6 重復(fù)性試驗 取批號S1的藥材和黃酮部位,按照“2.1.4”項下供試液制備方法各平行制備6份,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的條件進樣測定,以異槲皮苷峰為參照峰,計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積并計算RSD。藥材相對保留時間的RSD<0.21%,相對峰面積的RSD<3%;黃酮部位相對保留時間的RSD<0.13%,相對峰面積的RSD<2.6%;且藥材各譜圖相似度均在0.999以上,黃酮部位各譜圖相似度均為1.0,符合指紋圖譜技術(shù)要求,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取批號S1的藥材和黃酮部位供試品溶液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的條件分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定,以異槲皮苷峰為參照峰,計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積并計算RSD。藥材相對保留時間的RSD<0.43%,相對峰面積的RSD<3%;部位相對保留時間的RSD<0.48%,相對峰面積的RSD<1.25%;且藥材各譜圖相似度均≥0.999,黃酮部位各譜圖相似度均為1.0,符合指紋圖譜技術(shù)要求,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.1.8 指紋圖譜的建立及主要共有峰的指認 分別取15批辣木葉藥材和黃酮部位樣品溶液,按照“2.1.1”項和“2.1.2”項下條件進樣測定,將各樣品負離子模式下基峰離子流色譜圖(base peak chromatogram,BPC)的原始數(shù)據(jù)積分后以AIA格式輸出,導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012 A版)”,以S1號樣品色譜圖為參照圖譜,采用平均數(shù)法,時間窗寬度為0.1,生成特征圖譜,經(jīng)過多點校正和自動匹配,得到辣木葉藥材和黃酮部位的UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜疊加圖及對照圖譜(R),其中,標定出藥材17個共有峰,指認了14個峰,各樣品圖譜見圖1和對照圖譜見圖2,鑒定結(jié)果見表2;黃酮部位10個共有峰,指認了10個峰,樣品圖見圖3,對照圖譜見圖4,鑒定結(jié)果見表3。

        2.1.9 指紋圖譜相似度評價 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012 A版)”對辣木葉藥材及黃酮部位指紋圖譜進行相似度評價,以S1為參照圖譜,由于11號和D號異槲皮苷色譜峰的分離度、峰形均較好且峰面積穩(wěn)定,所以選其作為參照峰,計算得到的15批辣木葉藥材和黃酮部位的共有峰的相對保留時間及相對峰面積。結(jié)果表明顯示,共有峰的相對保留時間的RSD<3%,相對峰面積的RSD差異較大,說明不同產(chǎn)地辣木葉所含成分的含量存在較大差異。相似度評價結(jié)果(表4、5)表明,除S8和S9 2批的相似度小于0.85外,其余辣木葉藥材的相似度均在0.9以上,而15批辣木葉黃酮部位除S9的相似度是0.893,剩余14批的相似度均在0.9以上,說明辣木葉不同產(chǎn)地不同批次的辣木葉藥材的整體質(zhì)量具有較好的一致性,而S8和S9 2批藥材可能由于環(huán)境因素或者加工、儲存、運輸方式的原因,造成藥材質(zhì)量不穩(wěn)定,相似度較差。但是辣木葉經(jīng)過提取純化工藝制備后,黃酮部位的相似度基本一致,整體質(zhì)量達到基本一致。

        圖1 15批辣木葉藥材UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS疊加圖譜

        圖2 15批辣木葉藥材UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS對照指紋圖譜

        表2 不同批次辣木葉藥材共有峰鑒定結(jié)果

        圖3 15批辣木葉黃酮部位UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS疊加圖譜

        圖4 15批辣木葉黃酮部位UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS對照指紋圖譜

        表3 不同批次辣木葉黃酮部位共有峰鑒定結(jié)果

        表4 15批辣木葉藥材相似度評價

        表5 15批辣木葉黃酮部位相似度評價

        2.2 化學(xué)計量學(xué)分析

        2.2.1 聚類分析(hierarchical clustering analysis,HCA)利用SAS 8.2將15批辣木葉藥材共有峰的峰面積進行HCA,采用組間連接法,以平方歐氏距離作為樣品測度進行HCA可知,15批辣木葉藥材可聚為4類:S5、S13聚為一類,S8、S9聚為一類,S1~S4聚為一類,S6~S12、S14、S15聚為一類。HCA與相似度評價結(jié)果基本一致。

        2.2.2 主成分分析(principal component analysis,PCA) 將15批辣木葉的17個共有峰的相對峰面積導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件,采用非監(jiān)督模式識別法進行PCA,并繪制PCA得分散點圖,見圖5。15批辣木葉藥材可聚為3類:S9、S13聚為一類,S8、S5聚為一類,S1~S4、S5~S10、S11、S12、S14、S15聚為一類。與相似度評價和HCA分析結(jié)果基本一致,說明可以將不同產(chǎn)地辣木葉化學(xué)特征性成分的差異性通過指紋圖譜的差異性來反映。

        圖5 15批辣木葉藥材PCA得分散點圖

        2.2.3 正交偏最小二乘法-判別分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA) 為了更準確地反映15批辣木葉藥材的成分差異,基于PCA的結(jié)果,采用監(jiān)督模式識別法進行OPLS-DA,繪制OPLS-DA模型得分圖,見圖6。15批辣木葉藥材可聚為3類,與PCA結(jié)果一致。OPLS-DA模型的主成分回歸系數(shù)2=0.986,2=0.612,模型預(yù)測參數(shù)2=0.559,全部大于0.5,說明建立的模型穩(wěn)定且預(yù)測能力強。通過模型變量投影重要性VIP值篩選15批辣木葉的差異化學(xué)成分,VIP值越大,表明變量離軸越遠,該色譜峰對分類的貢獻越大,如圖7所示,以VIP>1為顯著影響,VIP>1的峰按照大小排序有17、5、15、4、6、3、12號峰,剩余色譜峰的VIP至均小于1,對于分類貢獻不大。

        圖6 15批辣木葉藥材OPLS-DA得分散點圖

        圖7 差異性化學(xué)成分VIP圖

        2.3 黃酮類成分的含量測定

        2.3.1 專屬性考察 取“2.1.3”項下對照品溶液及“2.1.4”項下供試品溶液,按“2.1.1”和“2.1.2”項下色譜條進樣分析,供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的保留時間處有相同的色譜峰,說明該方法專屬性良好,色譜圖見圖8。

        10-異牡荊素 11-異槲皮苷 13-紫云英苷

        2.3.2 線性關(guān)系考察 取3種對照品溶液各5.0 mL,混合均勻,定量稀釋成分別含有異牡荊素7.60、9.50、15.20、19.00、38.00、76.00 μg/mL,異槲皮苷13.87、17.33、27.73、34.67、69.33、138.67 μg/mL,紫云英苷5.64、7.05、11.28、14.10、28.20、56.40 μg/mL的混合對照品溶液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的色譜條件進樣測定分析,以質(zhì)量濃度為橫坐標(),峰面積為縱坐標(),進行線性回歸,結(jié)果見表6。

        表6 3種成分的線性關(guān)系考察結(jié)果

        2.3.3 精密度試驗 取批號S1的辣木葉藥材和黃酮部位供試品溶液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的色譜條件進樣測定,分別連續(xù)進樣6次,記錄峰面積。結(jié)果顯示,藥材異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷峰面積的RSD分別為0.37%、0.28%、0.85%;黃酮部位異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷峰面積的RSD分別為0.38%、0.43%、0.54%。

        2.3.4 重復(fù)性試驗 取批號S1的辣木葉藥材和黃酮部位,按照“2.1.4”項下供試液制備方法各平行制備6份,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的色譜條件進樣測定,計算待測成分含量。結(jié)果顯示,藥材中藥材異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為0.14%、0.38%、0.19%,RSD分別為0.49%、0.32%、0.71%;黃酮部位中中藥材異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為2.81%、12.00%、4.22%,RSD分別為0.39%、1.09%、0.61%。

        2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取批號S1的辣木葉藥材和黃酮部位供試品溶液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下相應(yīng)的色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定,記錄峰面積。辣木葉藥材異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷峰面積的RSD分別為1.71%、4.88%、2.73%;黃酮部位異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷峰面積的RSD分別為0.84%、0.49%、1.04%。

        2.3.6 加樣回收率試驗 取批號S1的辣木葉粉末250 mg,精密稱定,共6份,分別加入混合對照溶液(含有異牡荊素0.380 mg/mL、異槲皮苷0.986 mg/mL、紫云英苷0.520 mg/mL)1 mL,精密量取,分別置于100 mL錐形瓶中,加入50%甲醇49 mL,搖勻,稱定質(zhì)量,按照“2.1.4”項下制備供試液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下色譜條件進樣測定,計算加樣回收率以及RSD。結(jié)果表明藥材異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均加樣回收率分別為100.6%、100.6%、101.4%,RSD分別為1.70%、0.78%、1.35%。

        取批號S1的黃酮部位5 mg,精密稱定,共6份,分別精密加入混合對照品溶液(含有異牡荊素0.144 mg/mL、異槲皮苷0.612 mg/mL、紫云英苷0.222 mg/mL的混合對照品溶液)1 mL,置于25 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并定容,搖勻,按照“2.1.4”項下制備供試液,按照“2.1.1”和“2.1.2”項下色譜條件進樣測定,計算加樣回收率以及RSD。結(jié)果表明黃酮部位異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均加樣回收率分別為100.8%、100.2%、101.1%,RSD分別為1.31%、1.64%、1.85%。

        2.3.7 樣品含量測定 取15批辣木葉藥材粉末0.5 g和黃酮部位5.0 mg,精密稱量,平行制備3份,按照“2.1.4”項下方法制備得到供試液,并在“2.1.1”和“2.1.2”項下色譜條件進樣檢測,計算異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的含量。15批辣木葉藥材中異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為0.13%、0.44%、0.17%;質(zhì)量分數(shù)分布在0.06%~0.19%、0.27%~0.79%、0.49%~1.08%,黃酮部位中異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為2.3%,10.9%,3.43%,質(zhì)量分數(shù)分布在0.53%~3.53%、6.49%~14.36%、2.05%~4.66%,見表7。由此可見,不同產(chǎn)地不同批次辣木葉中上述3中成分的含量差異明顯。

        3 討論

        本研究建立了不同產(chǎn)地辣木葉藥材和辣木葉黃酮部位的UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指紋圖譜,分別指認14個和10個共有峰。不同產(chǎn)地的辣木葉和黃酮部位的相似度分別為0.767~0.995和0.893~0.998,不同產(chǎn)地的辣木葉藥材化學(xué)成分含量差異較大,而富集純化后的黃酮部位相似度差異明顯變小。測定了不同產(chǎn)地辣木葉藥材和辣木葉黃酮部位中異牡荊素、異槲皮苷、紫云英苷的含量,可為辣木葉藥材和黃酮部位的質(zhì)量控制提供參考。

        表7 15批辣木葉藥材及黃酮部位中3種成分的平均含量(n = 3)

        利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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        [8] 許琳, 范春林, 黃曉君, 等. 辣木葉的UPLC特征指紋圖譜研究 [J]. 中國中藥雜志, 2018, 43(22): 4474-4478.

        [9] 曾明瑩, 傅詠梅, 張蜀, 等. 不同產(chǎn)地辣木葉提取物的含量測定及指紋圖譜相似性評價 [J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué), 2018, 33(3): 485-493.

        [10] 金玲, 婁濤濤, 劉旋, 等. 辣木葉的HPLC指紋圖譜 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2017, 23(8): 86-91.

        [11] 肖丹, 范東生, 劉星, 等. 不同產(chǎn)地鐵線蕨藥材指紋圖譜的建立、分析及差異成分的含量測定 [J]. 中國藥房, 2021, 32(17): 2085-2090.

        Quality evaluation ofleaves and its flavonoid fractions based on UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS fingerprint and multi-component quantitative analysis

        YUAN Jing1, YUAN Yong-bing2, ZHOU Ming1, LIU Yue1, HUANG Ya1, WANG Bao-jin1, CHANG Zi-hao1, LIU Yu-qi1, HU Qian1, CHEN Yin-xin1, ZHOU Li-peng1, LUO Xiao-wei1, WANG Shu-kai1, LIU Xiang-xiang3, ZHANG Lan-zhen1

        1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 102488, China 2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300462, China 3. Guangzhou Zeli Pharmaceutical Technology Co., Ltd., Guangzhou 510663, China

        The UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS fingerprints ofleaves and flavonoid fractions from different producing areas were established, and the chemometrics analysis and content determination of important components were carried out to provide reference for the quality control of.leaves.UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS combined with similarity evaluation system of TCM chromatogramtic fingerprin (2012 A edition) were used to establish fingerprint of 15 batches of.leaves and flavonoid fractions from different producing areas (S1—S15). Common peaks were confirmed and their similarities were evaluated, and the contents of the identified components were determined. Stoichiometric analysis methods such as hierarchical clustering analysis (HCA), principal component analysis (PCA), orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) were used to evaluate the quality of 15 batches of.leaves and flavonoid fractions from different producing areas.A total of 17 common peaks were identified in 15 batches of.leaves from different producing areas, and 10 common peaks were identified in the flavonoid fraction of.leaves. The similarity and HCA analysis of leaves and flavonoids of 15 batches ofleaves from different producing areas were classified into four groups and the HCA results were basically consistent with the results of similarity evaluation. It was found that they were clustered into three categories by PCA and OPLS-DA analysis. The contents of isovitexin, isoquercitrin and astragalin in 15 batches of medicinal materials were 0.06%—0.19%, 0.27%—0.79% and 0.08%—0.23%, respectively. The contents of isovitexin, isoquercitrin and astragalin in flavonoid fractions were 0.53%—3.53%, 6.49%—14.36% and 2.05%—4.66%, respectively.In this study, the qualitative and quantitative methods of flavonoids in leaves of.from different producing areas with strong specificity and high sensitivity were established to provide a basis for the comprehensive evaluation of flavonoid fractions of leaves of..

        leaves ofLam.; flavonoid fractions of leaves of.Lam.; UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS; fingerprint; chemometrics; isovitexin; isoquercetin; astragalin

        R286.2

        A

        0253 - 2670(2022)24 - 7897 - 08

        10.7501/j.issn.0253-2670.2022.24.027

        2022-06-25

        北京中醫(yī)藥大學(xué)縱向科研發(fā)展基金項目(2022-ZXFZJJ-001)

        袁 靜,女,碩士研究生,研究方向為藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其藥理作用。E-mail: yuanjing961103@163.com

        張?zhí)m珍,研究員,主要從事中藥藥效物質(zhì)與質(zhì)量控制工作。E-mail: zhanglanzhen01@126.com

        [責(zé)任編輯 時圣明]

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