金 輝,肖志博，葛樹勝，吳小精，尹順花，李 媛

(1.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院麻醉科，海南 ?？?570100；2.海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心麻醉科，海南 ?？?570100)

近年來，糖尿病的發(fā)病率逐年上升，并呈年輕化趨勢，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題。2019年全球65歲及以上的人群中約有193萬人患有糖尿病，預(yù)計2045年將達(dá)到2 762萬[1]。心血管疾病，特別是急性冠狀動脈綜合征是糖尿病患者的重要合并癥，其危害遠(yuǎn)大于糖尿病本身。心肌缺血/再灌注損傷(myocardial ischemia/reperfusion injury，MI/RI)是臨床常見的病理生理過程，心肌發(fā)生缺血后，應(yīng)及時行血液再灌注恢復(fù)血液供應(yīng)以防止心肌死亡，但該過程也會對心肌造成二次損傷，這種現(xiàn)象被稱為MI/RI[2]。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者心肌缺血的發(fā)生率比非糖尿病患者高1.45～2.99倍，這對糖尿病患者來說是一個嚴(yán)重的健康威脅[3]。而且長期患有糖尿病可引發(fā)血管內(nèi)皮功能障礙，這將加劇缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)引起的心肌損傷[4-5]。

七氟醚(sevoflurane，Sev)是一種廣泛用于臨床和基礎(chǔ)研究的吸入麻醉劑。研究證實，七氟醚-后處理(sevoflurane-post conditioning，Sev-postC)可以有效減輕健康心肌的I/R損傷[6-7]；而高血糖可抵消Sev-postC的心肌保護(hù)作用，但其具體機(jī)制尚不清楚。有研究顯示，巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)在MI/RI過程中發(fā)揮著重要作用，而高血糖能夠抑制MIF的表達(dá)[8-9]。右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)是一種高度選擇性的α2受體激動劑，通常在臨床中用作鎮(zhèn)靜劑。研究證實，Dex能夠有效保護(hù)心肌免于I/R損傷，其保護(hù)機(jī)制包括上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor 1 subunit alpha，HIF-1α)的表達(dá)[10]。HIF-1α在心肌缺血過程中被顯著誘導(dǎo)表達(dá)，其在心肌缺血/缺氧過程中是啟動內(nèi)源性心肌保護(hù)機(jī)制的起始因子，是防御MI/RI的主要調(diào)節(jié)因子[11]。而MIF是HIF-1α的下游效應(yīng)因子，心肌組織中HIF-1α與MIF的表達(dá)密切相關(guān)[9,11]。因此，本研究擬通過體外研究和在體構(gòu)建糖尿病小鼠MI/RI模型，探討Dex聯(lián)合Sev-postC對糖尿病小鼠MI/RI的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

6～8周齡SPF級雄性C57 BL/KS m/m(Lepr-WT/WT)小鼠15只，體質(zhì)量(23±2)g；6～8周齡SPF級雄性C57 BL/KS db/db(Lepr-KO/KO)2型糖尿病小鼠20只，體質(zhì)量(41±3)g，購自海南藥物研究所有限責(zé)任公司；H9c2大鼠胚胎心肌細(xì)胞購自武漢普諾賽生物；FBS(批號：10091155)，低葡萄糖DMEM(批號：11966025)，高葡萄糖DMEM(葡萄糖35 μmol/L；批號：12100061)購自美國Gibco；Sev(批號：SF-2785016)，Dex(批號：YT-1732234)，戊巴比妥鈉(批號：PZ-2437186)購自北京陽光生物；乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶同工酶MB(creative kinase isoenzyme MB，CK-MB)ELISA試劑盒(批號：CSB-E11723m、CSB-E14404m)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性測定試劑盒(批號：CSB-E08556m)購自武漢華美；丙二醛(malondialdehyde，MDA)測定試劑盒(批號：S0131S)，CCK-8細(xì)胞活力測定試劑盒(批號：C0037)購自上海碧云天；BCA蛋白定量試劑盒(批號：71285-3)，ECL化學(xué)發(fā)光底物(批號：WBULS0500)，蛋白酶抑制劑混合物(批號：P2714)購自美國Merck-Millipore；RIPA裂解液(批號：89901)購自美國Thermo Fisher；兔抗HIF-1α單抗(批號：ab179483)，兔MIF單抗(批號：ab187064)，山羊抗兔IgG(H+L)HRP二抗(批號：ab3721)購自美國Abcam；酶標(biāo)儀(型號：800TS)購自美國BioTek公司；光學(xué)顯微鏡(型號：Ci-E)購自日本Nikon。

1.2 體外和在體實驗分組

體外實驗分組：①LG-Control組，低糖(LG)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞；②LG-H/R組，低糖培養(yǎng)條件下對H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)處理；③LG-Sev組，低糖培養(yǎng)條件下對H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行H/R處理后，加入Sev處理細(xì)胞；④HG-Control組，高糖(HG)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞；⑤HG-H/R組，高糖培養(yǎng)條件下對H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行H/R處理后，在常氧條件下繼續(xù)培養(yǎng)12 h；⑥HG-Sev組，高糖培養(yǎng)條件下對H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行H/R處理后，加入Sev處理細(xì)胞，在常氧條件下繼續(xù)培養(yǎng)6 h；⑦HG-Sev+Dex組，高糖培養(yǎng)條件下對H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行H/R處理后，在對細(xì)胞進(jìn)行Sev處理的同時加入Dex處理細(xì)胞，然后收獲細(xì)胞。

在體實驗分組(n=5)：①Sham組，正常小鼠MI/RI模型假手術(shù)；②MI/RI組，正常小鼠構(gòu)建MI/RI模型；③Sev-postC組，對正常小鼠構(gòu)建MI/RI模型時，在再灌注前持續(xù)吸入2.5% Sev 15 min[12]；④DM-Sham組，糖尿病小鼠MI/RI模型假手術(shù)；⑤DM-MI/RI組，糖尿病小鼠構(gòu)建MI/RI模型；⑥D(zhuǎn)M-Sev-postC組，對糖尿病小鼠構(gòu)建MI/RI模型時，在再灌注前持續(xù)吸入2.5% Sev 15 min[12]；⑦DM-Sev-postC+Dex組，對糖尿病小鼠構(gòu)建MI/RI模型時，在再灌注前持續(xù)吸入 2.5% Sev 15 min，再灌注結(jié)束后腹腔注射10 μg/kg Dex[13]。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與藥物處理

高糖培養(yǎng)：H9c2心肌細(xì)胞置于含10%FBS的高葡萄糖DMEM培養(yǎng)液中，培養(yǎng)于5%CO2、37 ℃恒溫孵育箱中。低糖培養(yǎng)：在高糖培養(yǎng)條件下細(xì)胞生長匯合度達(dá)90%，且生長狀態(tài)良好時，消化細(xì)胞，并以4×106個/皿的密度接種于6孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)24 h；第2天當(dāng)細(xì)胞生長匯合度達(dá)80%時，棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，貼壁細(xì)胞用37 ℃預(yù)熱的PBS洗滌3次后，加入無血清低葡萄糖DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。Sev處理：向細(xì)胞中加入3.4%的Sev處理6 h[14]。Sev+Dex處理：向細(xì)胞中加入3.4%的Sev處理6 h，同時加入1 μmol/L的Dex處理12 h[15]。

1.4 體外誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞H/R損傷模型

H/R損傷模型：取2×106個細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞生長匯合度達(dá)50%，適應(yīng)性貼壁后，將細(xì)胞培養(yǎng)液更換為無血清DMEM(高糖或低糖)培養(yǎng)液，置于含0.1%O2、5%CO2和95%N2的低氧室中，在37 ℃恒溫、濕潤的條件下缺氧培養(yǎng)7 h。隨后更換為含10%FBS的DMEM(高糖或低糖)完全培養(yǎng)液，置于常氧條件下正常培養(yǎng)2 h，收獲細(xì)胞檢測下游指標(biāo)。Control組細(xì)胞于含10%FBS的DMEM(高糖或低糖)完全培養(yǎng)液的常氧條件下培養(yǎng)。

1.5 MI/RI小鼠模型

MI/RI造模前，對小鼠進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)。每4只小鼠1籠，飼養(yǎng)于SPF級鼠房，12 h光照/12 h黑暗周期循環(huán)，可自由進(jìn)食和飲水。

整個手術(shù)期間都將小鼠放置在30 ℃恒溫加熱墊上。于小鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉(60 mg/kg)進(jìn)行麻醉，監(jiān)測小鼠肢體張力、自主呼吸和心率。麻醉后進(jìn)行氣管插管，連接到動物呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣。術(shù)前開始記錄小鼠心電圖。MI/RI組：小鼠開胸后，暴露心臟，用7/0無創(chuàng)縫合線結(jié)扎冠狀動脈左前降支；通過心電圖識別ST段，20 min后松開結(jié)扎線進(jìn)行再灌注。Sham組：小鼠僅開胸，將7/0無創(chuàng)縫合線放置于冠狀動脈左前降支部位，但并不進(jìn)行結(jié)扎；手術(shù)后，繼續(xù)監(jiān)測小鼠心電圖，縫合胸腔，并肌肉注射青霉素(400 kU/kg)。對于MI/RI組和Sham組小鼠，均在麻醉條件下[2%戊巴比妥(60 mg/kg)腹腔注射]采集小鼠腹主動脈血樣。待小鼠蘇醒后，繼續(xù)進(jìn)行再灌注 24 h，然后對小鼠進(jìn)行安樂死[2%戊巴比妥(100 mg/kg)腹腔注射][13]。隨后立即采集小鼠心臟樣本，用于下游指標(biāo)的檢測。

1.6 心肌細(xì)胞存活能力測定

使用CCK-8細(xì)胞活力測定試劑盒測定心肌細(xì)胞存活能力。將H9c2心肌細(xì)胞接種于96孔板中，細(xì)胞貼壁后，按照各組的要求處理細(xì)胞。處理結(jié)束后，向每孔細(xì)胞中加入試劑盒自帶的10% CCK-8溶液100 μL，在37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h。然后使用BioTek酶標(biāo)儀在450 nm波長下測量光密度值。細(xì)胞存活率(%)=各組細(xì)胞光密度值/LG-Control組細(xì)胞光密度值×100%。

1.7 HE染色

新鮮小鼠心臟首先浸沒于10%中性福爾馬林中，在4 ℃下固定48 h，然后進(jìn)行石蠟包埋并切片(5 μm)。切片經(jīng)2次二甲苯徹底脫蠟和梯度乙醇脫水，然后使用蘇木精染色液染色5 min；分化液分化 3 s；切片復(fù)藍(lán)約3 s。再用85%和95%乙醇脫水，每次 4 min。然后對切片進(jìn)行伊紅染色5 min；無水乙醇脫水3次，每次5 min；二甲苯透明化2次，每次 2 min；最后，中性樹膠封片。在Nikon光學(xué)顯微鏡下觀察和拍照。

1.8 ELISA檢測

全血樣先進(jìn)行離心(3 000 ×g，5 min)，獲得血清樣本。然后按照ELISA試劑盒說明書檢測LDH和CK-MB水平。按照成品試劑盒操作說明書檢測SOD活性和MDA水平。使用BCA蛋白定量試劑盒檢測組織或細(xì)胞總蛋白濃度。使用BioTek酶標(biāo)儀在450 nm波長處讀取吸光值。

1.9 Western blot檢測

于心臟組織或心肌細(xì)胞中加入含有蛋白酶抑制劑混合物的RIPA裂解液，在液氮中研磨組織為組織勻漿；或使用超聲破碎機(jī)在冰浴中破碎心肌細(xì)胞。使用BCA蛋白定量試劑盒檢測總蛋白濃度。取10 μg總蛋白/樣本進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳；采用半干法電轉(zhuǎn)印(恒流100 mA)，將凝膠中的蛋白電轉(zhuǎn)印至PVDF膜上。使用含10%脫脂奶粉的TBS-T對PVDF膜進(jìn)行封閉，室溫條件下封閉1 h。然后將PVDF膜與兔抗HIF-1α單抗(稀釋度1∶1 000)或兔MIF單抗(稀釋度1∶1 000)一抗于4 ℃共同孵育過夜；第2天使用TBS-T洗膜3次，每次5 min，然后將PVDF膜與山羊抗兔IgG(H+L)HRP二抗(稀釋度1∶10 000)于37 ℃共同孵育1 h。使用ECL化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光和條帶顯色。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 高糖抑制MIF表達(dá)抵消Sev對心肌細(xì)胞H/R損傷的保護(hù)作用

與LG-Control組相比，LG-H/R組細(xì)胞存活能力顯著降低(P<0.01)；與LG-H/R組相比，LG-Sev組細(xì)胞存活能力顯著升高(P<0.01)；與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞存活能力顯著降低(P<0.01)；HG-Sev組與HG-H/R組細(xì)胞存活能力比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖1a。與LG-Control組相比，LG-H/R組細(xì)胞SOD水平顯著降低(P<0.01)，LDH、CK-MB、MDA水平均顯著升高(P<0.01)；與LG-H/R組相比，LG-Sev組SOD水平顯著上升(P<0.01)，LDH、CK-MB、MDA水平均顯著降低(P<0.01)。與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞SOD水平顯著降低(P<0.01)，LDH、CK-MB、MDA水平均顯著升高(P<0.01)；HG-Sev組與HG-H/R組SOD、LDH、CK-MB、MDA水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖1b～e。與LG-Control組相比，LG-H/R組細(xì)胞HIF-1α表達(dá)顯著升高(P<0.01)；與LG-H/R組相比，LG-Sev組HIF-1α表達(dá)顯著降低(P<0.01)。與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞HIF-1α表達(dá)顯著升高(P<0.01)；而HG-H/R組與HG-Sev組HIF-1α表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與LG-Control組相比，LG-H/R組MIF表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)；與LG-H/R組相比，LG-Sev組MIF表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.01)。HG-Control組、HG-H/R組、HG-Sev組MIF表達(dá)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與LG-H/R組相比，HG-H/R組細(xì)胞MIF表達(dá)顯著降低(P<0.01)，見圖1f。

a：細(xì)胞存活率；b：LDH水平；c：CK-MB水平；d：SOD水平；e：MDA水平；f：HIF-1α和MIF蛋白表達(dá) *：P<0.05；#：P<0.01

2.2 Dex通過上調(diào)MIF增強(qiáng)Sev處理對心肌細(xì)胞H/R損傷的保護(hù)作用

與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞存活能力顯著降低(P<0.01)；與HG-H/R組相比，HG-Sev組細(xì)胞存活能力無顯著變化(P>0.05)，而HG-Sev+Dex組細(xì)胞存活能力顯著提高(P<0.01)，見圖2a。與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞SOD顯著降低(P<0.01)，LDH、CK-MB、MDA顯著升高(P<0.01)；與HG-H/R相比，HG-Sev組LDH、CK-MB、MDA、SOD水平無顯著變化(P>0.05)，而HG-Sev+Dex組LDH、CK-MB、MDA水平顯著降低(P<0.01)，SOD水平升高(P<0.01)，見圖2b～e。與HG-Control組相比，HG-H/R組細(xì)胞HIF-1α的表達(dá)顯著升高(P<0.01)；與HG-H/R組相比，HG-Sev組HIF-1α的表達(dá)無顯著變化(P>0.05)，而HG-Sev+Dex組HIF-1α的表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.01)。與HG-Control組相比，HG-H/R組、HG-Sev組細(xì)胞MIF的表達(dá)無顯著變化(P>0.05)，HG-Sev+Dex組MIF的表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)。與HG-H/R組相比，HG-Sev組MIF的表達(dá)無顯著變化(P>0.05)，HG-Sev+Dex組MIF的表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)，見圖2f。

a：細(xì)胞存活率；b：LDH水平；c：CK-MB水平；d：SOD水平；e：MDA水平；f：HIF-1α和MIF蛋白表達(dá) *：P<0.05；#：P<0.01

2.3 Dex通過上調(diào)MIF增強(qiáng)Sev-postC對糖尿病小鼠MI/RI的心肌保護(hù)作用

小鼠在體實驗結(jié)果顯示，與Sham組相比，MI/RI組、DM-Sham組小鼠心肌HIF-1α表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)；與MI/RI組相比，Sev-postC組HIF-1α表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)；與DM-Sham組相比，DM-MI/RI組HIF-1α表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)；與DM-MI/RI組相比，DM-Sev-postC組HIF-1α表達(dá)水平無顯著變化(P>0.05)，DM-Sev-postC+Dex組HIF-1α表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.01)。與Sham組相比，MI/RI組MIF表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)，DM-Sham組MIF表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)；與MI/RI組相比，Sev-postC組MIF表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)；與DM-MI/RI組相比，DM-Sham組和DM-Sev-postC組MIF表達(dá)水平無顯著變化(P>0.05)，而DM-Sev-postC+Dex組MIF表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)，見圖3a。HE染色結(jié)果顯示，DM-Sham組小鼠心肌細(xì)胞排列整齊有序，心肌纖維無斷裂及結(jié)構(gòu)破壞；DM-MI/RI組小鼠心肌細(xì)胞排列雜亂，心肌纖維斷裂和結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重；與DM-MI/RI組小鼠相比，DM-Sev-postC組小鼠心肌損傷無明顯緩解，而DM-Sev-postC+Dex組小鼠心肌損傷明顯緩解，心肌細(xì)胞排列較為整齊有序，心肌纖維無斷裂，結(jié)構(gòu)破壞不明顯(圖3b)。與DM-Sham組相比，DM-MI/RI組LDH、CK-MB和MDA水平顯著升高(P<0.01)，SOD水平顯著降低(P<0.01)；與DM-MI/RI組相比，DM-Sev-postC組LDH、CK-MB、MDA、SOD水平無顯著變化(P>0.05)，DM-Sev-postC+Dex組LDH、CK-MB和MDA水平明顯降低(P<0.01)，SOD水平明顯升高(P<0.01)，見圖3c。

a：心肌組織中HIF-1α和MIF蛋白表達(dá)；b：心肌組織HE染色；c：心肌組織中LDH、CK-MB、SOD和MDA水平 *：P<0.05；#：P<0.01

3 討論

對于ST段抬高型心肌梗死患者，通過直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)進(jìn)行快速再灌注是目前限制梗死面積的最佳干預(yù)措施[16]，然而缺血和再灌注會引起I/R損傷。在動物實驗和臨床研究中，氧氣和血液供應(yīng)恢復(fù)導(dǎo)致的再灌注損傷面積可占最終心肌梗死面積的50%[16]。

盡管及時再灌注，仍然會導(dǎo)致明顯的心肌壞死，這種I/R損傷的程度是PCI后預(yù)后的主要決定因素。已有不同的心臟保護(hù)方法來限制ST段抬高型心肌梗死患者在直接PCI期間的梗死面積，其中通過向靜脈或冠狀動脈內(nèi)注射藥物或細(xì)胞已被證明是安全有效的，但仍需要進(jìn)一步的研究以獲得滿意的臨床結(jié)果。

多數(shù)臨床前和臨床數(shù)據(jù)表明，糖尿病是急性冠狀動脈綜合征患者的重要合并癥；糖尿病患者的心臟最容易受到I/R損傷；有糖尿病存在的情況下，缺血預(yù)處理和藥物等對心臟的保護(hù)作用會削弱。因此糖尿病患者發(fā)生急性心血管事件的可能性更大，而且心臟保護(hù)措施減少梗死面積的可能性更有限[16]。本研究也顯示，高糖培養(yǎng)條件下對細(xì)胞進(jìn)行H/R處理后，給予Sev治療的效果沒有低糖培養(yǎng)條件下對細(xì)胞進(jìn)行相同處理時明顯。

糖尿病患者對I/R損傷的易感性增加是由多種機(jī)制引發(fā)的，包括心肌細(xì)胞促存活信號通路的激活不足、心肌細(xì)胞線粒體能量代謝的改變、活性氧自由基的異常產(chǎn)生以及各種胞內(nèi)和胞外位點抗氧化能力受損，而且持續(xù)的高血糖還會減少一氧化氮的產(chǎn)生和釋放[16]。有研究顯示，無論是在缺血前還是在再灌注前給予Dex，都能夠提高腎細(xì)胞的存活能力，Dex通過抑制PI3K-Akt通路和ERK通路的磷酸化和活化，實現(xiàn)促缺血缺氧細(xì)胞存活能力的功效[17-19]。同時，Dex還能通過抑制缺氧細(xì)胞的氧化應(yīng)激保護(hù)腎組織[20]。但是對于Dex作用于心肌細(xì)胞是否有類似的效果，目前尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，在高糖培養(yǎng)條件下，對心肌細(xì)胞僅給予Sev治療無明顯效果，而給予Sev+Dex后，可顯著提高HG-H/R處理后心肌細(xì)胞的LDH、CK-MB、SOD和MDA水平；同時，還可降低HG-H/R處理后心肌細(xì)胞中LDH、CK-MB、SOD和MDA水平，從而減輕氧化應(yīng)激。

HIF-1α是一種氧敏感轉(zhuǎn)錄因子，可通過轉(zhuǎn)錄激活200多個基因使生物體適應(yīng)缺氧，被認(rèn)為是缺氧和缺血信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激活的主要開關(guān)，其通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧穩(wěn)態(tài)、血管生成、心臟干細(xì)胞分化發(fā)揮保護(hù)作用[7]。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α可上調(diào)MIF的表達(dá)，而MIF可激活促存活信號通路(如AMPK磷酸化)以發(fā)揮心臟保護(hù)作用；缺血預(yù)處理通過MIF激活RISK和AMPK信號通路，減少心肌梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡，抑制活性氧自由基產(chǎn)生和細(xì)胞的炎癥浸潤，維持內(nèi)皮細(xì)胞功能，改善由MI/RI引起的心功能障礙，在心肌保護(hù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[8]。還有研究表明，MIF能抑制JNK介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并通過其抗氧化能力在MI/RI期間發(fā)揮心肌保護(hù)作用[9]。但是MIF的表達(dá)是否受高血糖的影響仍未可知。本研究結(jié)果顯示，MIF的表達(dá)在高糖條件下被抑制；同時，Sev-postC無法發(fā)揮心肌保護(hù)作用；在Sev-postC+Dex治療后，能夠上調(diào)MIF，并且發(fā)揮心肌保護(hù)作用。由此可以看出，高糖抑制了MIF的表達(dá)，Sev-postC對糖尿病小鼠的心肌保護(hù)作用消失，說明MIF很可能在其中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Dex在高血糖情況下依然能夠上調(diào)MIF的表達(dá)，抵消高血糖抑制MIF表達(dá)的作用。對這一結(jié)果可能的解釋有：①Dex能夠穩(wěn)定糖尿病小鼠的血糖波動[21]；②Dex具有在高血糖情況下顯著抑制MI/RI引起的氧化應(yīng)激的能力[22]。后者在本研究結(jié)果中也得到了證實，Sev-postC+Dex處理能夠顯著抑制DM-MI/RI引起的氧化應(yīng)激水平。

本研究初步證明了Dex聯(lián)合Sev-postC能夠明顯緩解糖尿病小鼠心肌I/R引起的損傷。然而，本研究尚未對Dex通過何種途徑提高M(jìn)IF的表達(dá)進(jìn)行深入探討，Dex是否能夠通過影響miRNAs發(fā)揮上調(diào)MIF保護(hù)心肌的作用，這是我們今后將要深入開展的研究方向，從而為深入理解Dex保護(hù)心肌免受I/R損傷的機(jī)制和臨床上安全應(yīng)用Dex進(jìn)行針對性的治療提供參考。