鄧琦程 魯錦 楊主娟 陳穎 (蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 蘇州 215004)

宮頸癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤第三位,且近年來發(fā)病逐漸趨于年輕化〔1〕。雖我國在篩查技術(shù)和治療方法均已取得較大突破,但腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移仍是威脅女性生命安全的重要因素〔2〕。因此,尋找特定、有效的能夠早期評(píng)估宮頸癌預(yù)后標(biāo)志物對(duì)預(yù)防和治療宮頸癌有重要意義。橋粒芯糖蛋白(DSG)2是DSG 的4 種亞型之一,主要在黏膜上皮細(xì)胞間的黏附上起重要作用〔3〕,既往已有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),DSG2 參與多種惡性腫瘤疾病的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化〔4〕。著絲粒蛋白(CENP)M 是近年發(fā)現(xiàn)的促癌分子,具有促進(jìn)腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移的作用〔5〕。既往有研究顯示,CENPM 上調(diào)促進(jìn)肝癌或胰腺癌惡性腫瘤發(fā)展和進(jìn)展〔6〕。本研究擬分析宮頸癌組織中DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)水平及臨床預(yù)后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年7月至2017年7月蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院治療的92 例老年宮頸癌患者,年齡60～71 歲,平均(66.34±3.23)歲。收集92 份宮頸癌組織(癌變組)和癌旁組織(距腫瘤邊緣4 cm處,癌旁組),本研究已獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)〔7〕;②手術(shù)治療且術(shù)前未行放化療。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有腦血管疾病、血液性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;②臨床資料不全者。另將85 例子宮肌瘤全子宮切除術(shù)患者的正常宮頸組織作為對(duì)照組,年齡60～72 歲,平均(66.54±3.33)歲。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)

兩組標(biāo)本均經(jīng)60℃熔點(diǎn)石蠟包埋并4 μm 連續(xù)切片后,在二甲苯脫去石蠟,再用梯度酒精脫去苯至水及蘇木素染色,采用檸檬酸修復(fù)液高溫高壓修復(fù)抗原,冷卻磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗,隨后加入按1 ∶100稀釋的一抗(產(chǎn)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的兔抗人DSG2 單克隆抗體)4℃孵育過夜,PBS 漂洗3 次,每次3 min,再加入二抗(產(chǎn)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的兔抗人CENPM 多克隆抗體)37℃孵育30 min,PBS 漂洗3 次,每次3 min,最后使用二氨基聯(lián)苯胺(DAB,DaKo 公司)顯色、蘇木素復(fù)染、樹脂膠封片,并在鏡下觀察染色情況。操作均嚴(yán)格按照SP 試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)結(jié)果判定〔8〕DSG2陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜,呈黃素或棕黃色顆粒狀分布;CENPM 陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核,著色呈棕黃色或黃褐色分布。免疫結(jié)果由兩位高年資的病理醫(yī)師共同完成,隨機(jī)選取30 個(gè)高倍鏡視野(×400),每視野讀200 個(gè)細(xì)胞,根據(jù)染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比綜合評(píng)分。染色強(qiáng)度:無色、淺黃色、棕色、深褐色分別為0、1、2、3 分。陽性細(xì)胞占總細(xì)胞百分比:＜25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別為1、2、3、4 分。陽性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度平均分乘積為最終得分,≥3 分為陽性表達(dá),＜3 分為陰性表達(dá)。

1.4 隨訪 使用電話、門診復(fù)診或上門等方式進(jìn)行隨訪,截止2022年7月31日或患者死亡。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Kaplan-Meier 法、多因素Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)水平比較 癌變組 DSG2、CENPM 蛋白陽性表達(dá)率〔64 例(69.57%)、62 例(67.39%)〕均明顯高于癌旁組〔27 例(29.35%)、29 例(31.52%)〕、對(duì)照組〔10 例(11.76%)、12 例(14.12%)〕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.001),見圖1。

圖1 DSG2、CENPM 在宮頸癌組織中表達(dá)(HE 染色,×400)

2.2 DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)在宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系 DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)在宮頸癌患者年齡、病理類型、肌層浸潤深度均無明顯差異(P＞0.05);在宮頸癌FIGO 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著差異(P＜0.001),見表1。

表1 DSG2、CENPM 蛋白陽性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系(n,n=92)

2.3 宮頸癌患者預(yù)后生存情況 本研究患者自出院后隨訪時(shí)間為3～78 個(gè)月,5年生存率為45.65%(42/92) 。DSG 2 陽性、陰性患者5年生存率〔28.13% (18/64)、85.71% (24/28)〕 差異顯著(χ2=26.037,P＜0.001);CENPM 陽性、陰性患者5年生存率〔27.42%(17/62)、83.33%(25/30)〕差異顯著(χ2=25.475,P＜0.001)。

2.4 不同特征宮頸癌患者預(yù)后比較 FIGOⅡ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者5年生存率明顯降低(P＜0.05),見表2。

表2 不同特征宮頸癌患者預(yù)后比較〔n(%)〕

2.5 宮頸癌患者預(yù)后多因素Cox 回歸分析 FIGOⅡ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、DSG2 陽性、CENPM 陽性為宮頸癌患者預(yù)后危險(xiǎn)因素(P＜0.001),見表3。

表3 宮頸癌預(yù)后多因素Cox 回歸分析

3 討 論

宮頸癌發(fā)病率僅次于乳腺癌,近年來該疾病受環(huán)境改變及性傳播疾病影響,其發(fā)病率不僅逐年升高,且逐漸趨向年輕化〔9〕,據(jù)國家癌癥中心對(duì)2015年宮頸癌統(tǒng)計(jì)顯示,我國年新增確診9.89 萬例,死亡3.05 萬例〔10〕。目前臨床雖通過放療、化療、手術(shù)等綜合治療有效控制疾病進(jìn)展,但對(duì)于宮頸癌晚期患者而言其治療效果以及預(yù)后生存期仍不理想。相關(guān)文獻(xiàn)顯示,hTERT、Cep55、FoxM1 等多項(xiàng)因子與宮頸癌預(yù)后密切相關(guān)〔11,12〕。DSG2 基因位于第18 號(hào)染色體,由3 049 個(gè)堿基對(duì)組成,在鱗狀上皮中呈橋粒細(xì)胞形式表達(dá),在腺上皮細(xì)胞中呈半橋粒狀,是促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物〔13〕。CENPM 是CCAN 蛋白家族的一員,位于內(nèi)層動(dòng)粒上,主要在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用〔14,15〕。目前關(guān)于CENPM 在腫瘤的研究較少,但根據(jù)Oncomine 數(shù)據(jù)庫顯示,CENPM mRNA 在乳腺癌、肺癌、淋巴瘤、肝癌等多種癌癥中顯著高表達(dá)。本研究結(jié)果顯示,DSG2、CENPM 在宮頸癌組織中表達(dá)升高,且參與宮頸癌患者惡性疾病的發(fā)生、發(fā)展。既往研究顯示,膽管癌組織中DSG2高表達(dá)率高于癌旁正常組織〔16〕。同時(shí)有研究顯示,與正常組織相比,CENPM 在乳腺癌組織上調(diào)〔17〕。本研究結(jié)果DSG2、CENPM 蛋白表達(dá)與宮頸癌預(yù)后密切相關(guān),陽性表達(dá)提示患者預(yù)后不良。既往有關(guān)于肝移植術(shù)后肝癌復(fù)發(fā)的研究結(jié)果顯示,CENPM 高表達(dá)組總體生存時(shí)間低于低表達(dá)組〔18〕。本研究進(jìn)一步證實(shí)CENPM、DSG2 在宮頸癌發(fā)生、進(jìn)展中有重要作用,有望作為評(píng)估患者預(yù)后的標(biāo)志物。CENPE與CENPM 均屬于CCAN 蛋白家族的一員,在有絲分裂過程中起重要作用。而既往有研究顯示,下調(diào)CENPE 可使宮頸癌腫瘤細(xì)胞的凋亡率明顯增加〔19〕。DSG2 是橋粒不可分割的組成部分,在多種癌癥中維持細(xì)胞黏附,且當(dāng)DSG2 基因敲除時(shí)能抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲〔20〕。

綜上,宮頸癌組織中DSG2、CENPM 蛋白陽性表達(dá)增加,且FIGO Ⅱ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者陽性表達(dá)水平更高,DSG2、CENPM 蛋白陽性表達(dá)宮頸癌患者預(yù)后更差,二者有望作為臨床診治宮頸癌的有效生物標(biāo)志物。