孫江漫，李 敏，邵 燕，孟祥兆，于洪遠(yuǎn)

北京航天總醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100076

胱抑素C(CysC)又名半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，是一種低分子堿性分泌蛋白，相對分子質(zhì)量為13.3×103，廣泛存在于有核細(xì)胞和各種組織中，由機(jī)體的所有有核細(xì)胞產(chǎn)生[1]。CysC可以保護(hù)人體細(xì)胞免受內(nèi)外蛋白酶的不當(dāng)水解。眾所周知，血清CysC是早期腎損傷的靈敏指標(biāo)，此外，關(guān)于CysC在呼吸系統(tǒng)疾病(如慢性阻塞性肺疾病、肺部惡性腫瘤、胸腔積液、肺氣腫等[2])和心腦血管疾病(如動脈粥樣硬化等[3])中的研究也越來越多。因此CysC檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性對于疾病的預(yù)防、診斷和治療尤為重要。量值溯源是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的重要手段[4]，而溯源至標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是臨床檢驗(yàn)中較為常用的一種方法。本研究通過評價(jià)國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)冰凍人血清CysC量值傳遞結(jié)果擬解決臨床實(shí)驗(yàn)室CysC檢測結(jié)果準(zhǔn)確性、可比性的問題。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 日立7170A全自動生化分析儀，羅氏(A，批號：44511701)、瑞源(B，批號：2020082801)2個(gè)廠家配套的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。

1.2實(shí)驗(yàn)標(biāo)本 國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[編號：GBW(E)091173～091176]，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)091173～091176認(rèn)定值±不確定度分別為(0.89±0.10)mg/L、(1.82±0.13)mg/L、(3.55±0.28)mg/L、(5.25±0.29)mg/L。IRMM有證參考物質(zhì)ERM-DA471/IFCC，認(rèn)定值±不確定度為(5.48±0.15)mg/L。40份臨床剩余單人份血清標(biāo)本。

1.3方法

1.3.1測量方法 檢測前對儀器進(jìn)行日常清洗、維護(hù)和保養(yǎng)。按照A、B 2個(gè)廠家提供的參數(shù)在日立7170A全自動生化分析儀設(shè)置參數(shù)建立測量系統(tǒng)。使用廠家提供的校準(zhǔn)品對系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)，質(zhì)控在控后同時(shí)測量冰凍人血清CysC和ERM-DA471/IFCC以及40份單人份血清標(biāo)本，其中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按照先奇后偶-倒序-先偶后奇的順序測量3次,連續(xù)測2 d；單人份血清標(biāo)本分2 d測量，每個(gè)標(biāo)本測3次。

1.3.2數(shù)據(jù)分析

1.3.2.1互通性評價(jià) 參考CLSI EP14-A3文件[5]，評價(jià)ERM-DA471/IFCC在比對系統(tǒng)中的互通性。

1.3.2.2方法學(xué)比對 以冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的靶值為X軸，常規(guī)測量系統(tǒng)的測量值為Y軸進(jìn)行線性擬合，建立回歸方程。將ERM-DA471/IFCC和40份單人份血清標(biāo)本的測量值代入方程，得出經(jīng)量值傳遞后的值，計(jì)算ERM-DA471/IFCC測量值和量值傳遞后的值與靶值的偏倚。參考CLSI EP9-A3文件[6]，對A、B 2個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比對，采用廣義ESD法進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，根據(jù)偏差圖決定回歸分析模型，計(jì)算相關(guān)系數(shù)、斜率、截距以及其95%置信區(qū)間(CI)，預(yù)估醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚，觀察其是否在臨床可接受范圍內(nèi)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用MedCalc20軟件進(jìn)行ESD離群值檢測及passing-bablok回歸分析，采用Excel 2019進(jìn)行線性回歸分析、Bland-Altman分析及配對t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測量結(jié)果及回歸分析 2個(gè)測量系統(tǒng)的測量值及其與靶值的線性回歸分析結(jié)果見表1、圖1、圖2。

圖1 A系統(tǒng)的回歸曲線

圖2 B系統(tǒng)的回歸曲線

表1 冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測量結(jié)果

2.2ERM-DA471/IFCC測量值和量值傳遞后的值與靶值的偏倚及正確度評價(jià) ERM-DA471/IFCC測量值與Y值預(yù)測值的偏倚為0.33%，故在2個(gè)測量系統(tǒng)中有互通。由表2可知經(jīng)冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值傳遞后ERM-DA471/IFCC與靶值的偏倚明顯降低，量值傳遞后2個(gè)系統(tǒng)的偏倚均小于ERM-DA471/IFCC相對不確定度(2.74%)，即其測量值正確。

表2 2個(gè)測量系統(tǒng)量值傳遞前后ERM-DA471/IFCC的測量值及偏倚

2.32個(gè)測量系統(tǒng)方法學(xué)比對結(jié)果

2.3.1A、B系統(tǒng)量值傳遞前后之間的偏倚結(jié)果見圖3、4。由圖可知量值傳遞前A、B系統(tǒng)之間的偏倚范圍為-19.15%～6.96%，其中有9個(gè)標(biāo)本超出了臨床可接受范圍，量值傳遞后的偏倚范圍為-7.44%～7.57%，且均在臨床可接受范圍內(nèi)。

圖3 量值傳遞前A、B系統(tǒng)偏倚的Bland-Altman圖

2.3.2A、B系統(tǒng)量值傳遞前后的比對結(jié)果 由表3可知，量值傳遞后A、B 2個(gè)系統(tǒng)的相關(guān)性更好，斜率更接近于1且95%CI包含1，截距更接近于0且截距95%CI包含0。由表4可知A、B 2個(gè)系統(tǒng)量值傳遞后在1 mg/L醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚有明顯改善。量值傳遞前后A、B系統(tǒng)比對結(jié)果見圖5、6。

圖4 量值傳遞后A、B系統(tǒng)偏倚的Bland-Altman圖

圖5 量值傳遞前A、B系統(tǒng)比對結(jié)果

表3 2種測量系統(tǒng)量值傳遞前后的方法學(xué)比對

表4 2種測量系統(tǒng)量值傳遞前后在醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚(%)

圖6 量值傳遞后A、B系統(tǒng)比對結(jié)果

3 討 論

CysC是一種結(jié)構(gòu)清晰的小分子蛋白，目前臨床實(shí)驗(yàn)室主要采用免疫比濁法測量。根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗(yàn)中心調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，各實(shí)驗(yàn)室胱抑素測量結(jié)果相差較大，實(shí)驗(yàn)室間缺乏可比性。量值溯源是提高臨床實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果正確度和可比性的重要手段[7]，也是避免醫(yī)療機(jī)構(gòu)重復(fù)檢查、降低患者就醫(yī)成本的有效措施[8]。國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)冰凍人血清CysC是一種血清基質(zhì)，具有良好的互換性[9]，且有4個(gè)水平，包含正常水平和病理水平，通過其量值溯源可改善臨床實(shí)驗(yàn)室不同測量系統(tǒng)測量結(jié)果的正確度和可比性。本研究中2種常規(guī)測量系統(tǒng)測量的ERM-DA471/IFCC通過冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值溯源的結(jié)果與靶值的偏倚明顯低于量值傳遞前的結(jié)果，且量值傳遞后結(jié)果均在其證書要求的不確定度范圍內(nèi)。ERM-DA471/IFCC在A、B 2個(gè)系統(tǒng)中有互通性，但在張傳寶等[10]和本課題前期研究[11]中發(fā)現(xiàn)其在部分系統(tǒng)間的互通性并不理想，所以將其作為正確度標(biāo)本應(yīng)首先評價(jià)其互通性。此外，量值傳遞后A、B 2個(gè)系統(tǒng)之間的偏倚也明顯降低，且相關(guān)性更好，在1 mg/L醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚有較大改善，1 mg/L為1歲以上所有人群CysC參考區(qū)間上限[12]，故其偏倚的提高對臨床診斷有重要意義。

綜上所述，經(jīng)冰凍人血清CysC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值傳遞后各測量系統(tǒng)的正確度和可比性有所提高。