謝亞婷，葉先文，張金蓮*，鄧亞羚，萬 全，劉敏敏，劉 穎，張 濤，黃 敏，席嘉禾，陳宇帆

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江西 南昌 330004；2.贛州市人民醫(yī)院患者服務(wù)中心，江西 贛州 341000)

濕阻中焦證，其病機為濕邪阻滯脾胃，水液運化失常，又稱濕困脾胃證，是中醫(yī)常見的一類病癥，具有發(fā)病率高、病程長的特點。臨床主要表現(xiàn)為脘腹脹滿，頭重身肢困倦，口黏淡，身困乏力，不思飲食，苔厚膩，脈濡或滑[1]。濕阻中焦證的現(xiàn)代病因尚未明確，目前造模法多以中醫(yī)病因作為出發(fā)點，模擬中醫(yī)發(fā)病機制，然此法與自然患病有差異，且造模復(fù)雜、耗費時間長、動物死亡率高。但隨著濕阻中焦患病人數(shù)的不斷上升，臨床研究的不斷深入，對動物模型復(fù)制及模型的評價指標有了更高要求，因此復(fù)制出穩(wěn)定的模型、制定顯著性好的評價指標勢在必行。本研究對已有的濕阻中焦模型的造模方法與模型評價指標進行總結(jié)，以期為濕阻中焦證的現(xiàn)代機制、臨床研究提供更多參考。

1 濕阻中焦動物模型的建立

濕阻中焦證實驗動物模型一般根據(jù)研究目的選用不同品系的大鼠。造模方法以濕阻中焦的中醫(yī)病因為基礎(chǔ)，將內(nèi)濕、外濕等作為誘導(dǎo)因素，從單純外濕和復(fù)合因素兩個方向入手，復(fù)合因素造模主要包括飲食不節(jié)、情志不遂、正氣不足等。

1.1 單純外濕造模方法

《素問·陰陽應(yīng)象大論》言：“地之濕氣，感則害人皮肉筋脈”[2]，提出濕阻中焦證的發(fā)病與外界環(huán)境有著密不可分的關(guān)系。故此類模型通過改變環(huán)境的潮濕度，以營造高濕的生存環(huán)境，久處后濕氣入侵中焦。濕性重濁致脾胃運化不足，水液代謝失衡，形成濕阻。張六通等[3]通過控制造模箱的條件進行造模，選用健康雄性wistar大鼠，控制造模箱內(nèi)相對濕度(RH)>90%，溫度(T)18～25 ℃，鼠籠底使用濕墊料，每天觀察大鼠精神、活動、關(guān)節(jié)、大小便等狀況，造模108天，成功復(fù)制出濕阻中焦模型。此法通過改變外部環(huán)境濕度的原理與中醫(yī)“氣候潮濕、涉水淋雨、居處卑濕及長期水中作業(yè)”等易招致濕邪為患的觀點相符。

1.2 復(fù)合因素造模方法

《醫(yī)碥·五行生克說》云：“飲食入胃，脾為運行其精英之氣，雖曰周部諸臟，實先上輸于肺，肺先受其益，是為脾土生肺金，肺受脾之益，則氣愈旺，化水下降，澤及百體?！敝嗅t(yī)認為的中焦多指脾胃，脾主運化水濕，胃主受納、腐熟水谷。當(dāng)飲食不節(jié)、饑飽失常時，脾胃運化功能受阻，濕不能運化，故停留在脾胃形成內(nèi)濕；此外情志不遂也與內(nèi)濕有聯(lián)系，當(dāng)睡眠生物鐘打亂，情志難抒時，機體氣機受阻致氣不能運濕，濕便停留在機體各處。因此復(fù)合因素造模法，多選用SD級大鼠、Wistar大鼠，通過控制飲食、損傷正氣、擾亂生物鐘等方法在最大程度上模擬中醫(yī)發(fā)病機理，提高模型臨床表現(xiàn)的相似度。見表1。

表1 復(fù)合因素造模操作方法

1.3 不同濕阻中焦動物模型特點比較

目前，濕阻中焦動物模型分單純外濕造模法和復(fù)合因素造模法兩種，研究動物多選用SD大鼠和Wistar大鼠，通過對已知的文獻進行查詢，發(fā)現(xiàn)單純外濕造模法操作簡單、易上手，但其存在造模時間長等不足；復(fù)合因素造模法選擇多種相關(guān)致病因素，與中醫(yī)病因相近，但其操作復(fù)雜，對條件要求高，動物死亡率高。見表2。

表2 模型特點比較

2 濕阻中焦模型檢測指標

2.1 一般體征指標

濕為重濁、黏滯之邪，易損害機體陽氣，阻遏氣機。故濕阻中焦證會導(dǎo)致脾胃氣機升降失常，納運失司，出現(xiàn)脘腹脹滿、腹瀉、精神不振等癥狀。因此濕阻中焦動物模型完成后，其飲食量、飲水量、體脂量等一般檢測指標將會發(fā)生變化[11-12]。見表3。

表3 一般檢測指標

2.2 生化指標

目前濕阻中焦證的現(xiàn)代機制尚未明確，但為了更深入地探討濕阻中焦證的機制及模型的判斷指標。本研究總結(jié)了近年來濕阻中焦模型的相關(guān)生理生化指標，發(fā)現(xiàn)其主要表現(xiàn)在胃腸功能、水液代謝、免疫系統(tǒng)、黏膜屏障、炎癥表達等方面[13]。

2.2.1 胃腸功能指標 “濕勝則濡泄”，濕阻中焦證最常見的臨床表現(xiàn)為胃腸功能障礙，如脘腹痞脹、不欲飲食、腹瀉、大便不成形等，這些癥狀與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)上胃動力不足、慢性胃炎等疾病的描述相似，故在模型評價中常選用胃腸道檢測指標。見表4。

表4 胃腸道檢測指標

2.2.2 水液代謝指標 脾胃主水液運化，濕邪入侵阻滯脾胃，致其水液運化失常，引起一系列水液代謝病理變化，如尿潴留、水腫等。通過文獻整理，發(fā)現(xiàn)濕阻中焦證可影響尿液代謝、水糖代謝、水鹽代謝、胃腸腸道水通道蛋白、離子泵等。見表5。

2.2.3 免疫反應(yīng)指標 “正氣內(nèi)存，邪不可干”，中醫(yī)認為疾病的發(fā)生與正氣和邪氣之間的斗爭有密切的關(guān)系。經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)正氣作用與臨床醫(yī)學(xué)上免疫作用相類似，其對疾病的發(fā)生起著決定性的作用。當(dāng)濕阻中焦證發(fā)生時，機體多種穩(wěn)態(tài)水平被打破，白細胞介素2、腫瘤壞死因子等免疫功能指標發(fā)生改變，故可以將此作為判斷模型成功與否的指標之一，提高模型準確性。見表6。

表5 水液代謝檢測指標

表6 免疫功能檢測指標

2.2.4 炎癥因子表達 濕阻證與脾胃腸關(guān)系密切，濕氣的長期存在，會導(dǎo)致胃腸動力不足，引起炎癥發(fā)生，引起相關(guān)炎癥因子水平的升高，與臨床慢性胃炎、腸炎臨床癥狀相似。見表7。

表7 炎癥檢測指標

2.2.5 黏膜保護屏障指標 濕困脾胃，運化受阻，尤其出現(xiàn)腹瀉、便溏等癥狀，由該癥狀可推測病位在胃、大小腸等消化系統(tǒng)，而腹瀉、便溏的發(fā)生在臨床上與胃黏膜、腸黏膜保護屏障，如機械屏障、化學(xué)屏障、微生物屏障等受損有一定關(guān)系，故在造模后常會選擇黏膜保護檢測指標作為判斷的標準之一。見表8。

表8 黏膜保護檢測指標

2.2.6 其他指標 除上述外，近幾年研究還發(fā)現(xiàn)，濕阻中焦模型還會出現(xiàn)氧化應(yīng)激失衡、能量供需失衡、代謝組學(xué)異常等。據(jù)推測這些異常與濕阻中焦動物模型細胞的氧化代謝有關(guān)，出現(xiàn)氧化能力減弱、自由基減弱、代謝率減慢等。見表9和圖1。

表9 其他檢測指標

注：淺藍六邊形表示機制分類；淺黃色菱形表示作用途徑；淺紅色橢圓形表示造模后指標上調(diào)；淺綠色三角形表示造模后指標下調(diào)。

3 討論

動物模型的準確建立是進行濕阻中焦證研究的基礎(chǔ)之一，實驗動物的正確選擇對實驗的推進也起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)大鼠的基因與人相似，且大鼠成本低、生命周期短，較小鼠造模成活率高，故目前多選用大鼠作為濕阻中焦模型的常用動物[41]。大鼠品系選擇上，Wistar大鼠種系純、性格溫順，且極易受外在環(huán)境因素如溫度、濕度、噪聲等影響，較SD大鼠更為適合用來建立濕阻中焦模型[42]。

濕阻中焦證是一種致病因素與發(fā)病機制都十分復(fù)雜的疾病，在目前的臨床研究中對其發(fā)病機制的關(guān)鍵點并未有明確的發(fā)現(xiàn)，因此難以用現(xiàn)代臨床技術(shù)讓建模過程簡單化，因而使得理想動物模型的建立變得非常困難，只能依賴于中醫(yī)病機病因模擬出與濕阻中焦證臨床癥狀相類似的模型。中醫(yī)認為濕阻中焦證由久居濕地，濕侵入體或脾胃虛弱，運化失常，水液代謝受阻，致濕阻脾胃。濕包括外濕和內(nèi)濕，故常用的造模方法有兩種：①純外濕造模法，如增加環(huán)境、墊料濕度等；②復(fù)合因素造模法，將環(huán)境外濕、脾虛內(nèi)濕、情志等多因素結(jié)合。單純外濕造模法是最早提出的一類造模法，但該法耗時長，且建立的動物模型多存在因素單一性和過程不穩(wěn)定性等特點；而多因素造模法建立的動物模型較單純外濕造模法動物模型更穩(wěn)定，且更符合濕阻中焦證的病理特點，故大多學(xué)者偏向選擇多因素造模法。

模型評價指標的合理與否，直接影響到實驗結(jié)果。前人多以形體、飲水量、飲食量、糞便、毛發(fā)等一般體征為主，胃腸道、炎癥因子等生化指標為輔。體征在中醫(yī)辨證中起著決定性的作用，然而生長體態(tài)、糞便性狀、精神狀態(tài)、被毛色澤、活動狀態(tài)等屬于宏觀體征，因此僅憑借宏觀指標作為主要判斷使造模的成功性過多依賴于主觀性判斷，無法直接量化模型質(zhì)量，從而導(dǎo)致結(jié)果缺乏準確性。故有必要通過中醫(yī)病理機制與現(xiàn)代臨床分析技術(shù)相結(jié)合，建立模型臨床評價指標體系，深入研究濕阻中焦證對水液代謝、炎癥反應(yīng)、代謝組學(xué)等產(chǎn)生的影響，為模型評價指標提供有力支撐；借助基因組學(xué)、分子生物學(xué)、芯片等學(xué)科的新技術(shù)與新方法，以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，從宏觀、微觀的角度對濕阻中焦模型和評價指標進行多方面、多角度的客觀性考察，細化評價標準，使?jié)褡柚薪鼓Ｐ偷脑u價指標更具準確性、科學(xué)性。探索建立與濕阻中焦患者臨床體征和生化檢測指標高度吻合的動物模型，是解決目前建模操作方法復(fù)雜、模型機理不清，提高模型的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性問題的關(guān)鍵。