脫穎，趙雙龍 ，黃蕾蕾

（1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080；2山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院，汾陽 032200）

新型冠狀病毒肺炎( coronavirus disease 2019，COVID-19) 是一種急性呼吸道傳染病，傳播途徑主要為飛沫傳播、接觸傳播、氣溶膠等方式。病理科細(xì)胞室操作人員在日常工作中，會接觸確診或疑似COVID-19患者的痰液、胸腔積液、腹腔積液等標(biāo)本，這些標(biāo)本在離心包埋過程中易產(chǎn)生氣溶膠污染以及液體飛濺導(dǎo)致的體液污染，因此細(xì)胞學(xué)檢查被認(rèn)定為病理科重點(diǎn)防護(hù)環(huán)節(jié)之一[1]。本文擬探討新冠疫情常態(tài)化下，漿膜腔積液標(biāo)本在60 ℃ 30 min加熱處理與室溫常規(guī)處理后，在大體觀、細(xì)胞涂片及細(xì)胞蠟塊HE和免疫組織化學(xué)染色的差異，并明確診斷結(jié)果是否一致，從而探討一種既不影響細(xì)胞學(xué)診斷，又能阻斷細(xì)胞學(xué)環(huán)節(jié)的生物安全隱患的前處理方式。

材料與方法

1 材料

選取2022年3月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科細(xì)胞室接收的漿膜腔積液標(biāo)本15例作為研究對象。

2 方法

將接收的標(biāo)本分為加熱組和對照組；加熱組對細(xì)胞學(xué)標(biāo)本行烤箱60 ℃加熱 30 min的前處理，對照組無前處理。隨后，兩組同步觀察大體，按傳統(tǒng)方式離心沉淀后，直接行細(xì)胞涂片、液基制片和細(xì)胞蠟塊HE染色，觀察細(xì)胞形態(tài)。若染色中查見不典型細(xì)胞，同步行免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步明確診斷。

免疫組織化學(xué)染色采用Leica BOND Ⅲ全自動免疫儀法， 一抗Ki-67（MIB-1）、pan CK（AE1/AE3）、Vimentin（3B4）均購自DAKO公司，二抗檢測顯色系統(tǒng)為機(jī)器配套試劑。兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的細(xì)胞病理醫(yī)師按《中國漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)檢查專家共識(2020年版)》對染色結(jié)果進(jìn)行評估和判讀[2]。

結(jié)果

兩組胸腹水標(biāo)本肉眼觀察顏色、質(zhì)地?zé)o明顯差異（圖1A、B）。在涂片和液基制片上，染色后兩組細(xì)胞輪廓均清晰可見，核、質(zhì)及細(xì)胞團(tuán)結(jié)構(gòu)清晰，兩組無明顯區(qū)別。但在細(xì)胞數(shù)量上，加熱后的涂片標(biāo)本細(xì)胞密度均略微變低，細(xì)胞團(tuán)有一定程度的散開（圖1C—F）。

兩組細(xì)胞蠟塊HE染色均可見保存良好的淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。其中可疑含腫瘤細(xì)胞的4例，均至少有1個含5個及以上腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)或者單張切片可辨認(rèn)的腫瘤細(xì)胞數(shù)量＞50個（圖2A、B）；兩組CK、Ki-67、vimentin）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果一致（圖2C—H）。

兩組標(biāo)本的最終病理診斷結(jié)果一致：11/15未見腫瘤細(xì)胞，4/15可見腫瘤細(xì)胞。

討論

新型冠狀病毒( severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 屬于冠狀病毒β屬，是有包膜的單鏈RNA病毒，當(dāng)包膜被破壞后，RNA容易被降解，從而使病毒失活。因此，病毒對紫外線和熱敏感。56 ℃ 30 min、75% 乙醇、含氯消毒劑等脂溶劑均可有效滅活病毒[3]。目前加熱滅活新冠病毒的前處理方式，對于分子檢測結(jié)果和血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果的影響，已進(jìn)行初步探討[4,5]。對于病理科細(xì)胞學(xué)標(biāo)本預(yù)處理方式，目前國內(nèi)報道的為福爾馬林固定滅活和加熱滅活兩種方法。但通過福爾馬林固定后的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本常常發(fā)生細(xì)胞固縮，尤其是細(xì)胞學(xué)涂片標(biāo)本細(xì)胞固縮較為嚴(yán)重，對診斷影響較大[6]。通過對新型冠狀病毒肺炎患者肺泡灌洗液，行水浴鍋中56 ℃滅活 30 min，認(rèn)為在生物安全二級防護(hù)措施下進(jìn)行細(xì)胞蠟塊制作，未發(fā)生實(shí)驗(yàn)室人員感染，加熱滅活的安全性得到了確認(rèn)[7]，但此實(shí)驗(yàn)未和加熱前的常規(guī)處理標(biāo)本進(jìn)行比較，無法判斷加熱前后各項(xiàng)指標(biāo)的一致性。

隨著2021年我國疫情防控措施不斷優(yōu)化和推進(jìn)、疫苗廣泛接種，我國疫情防控已經(jīng)逐步平穩(wěn)。但新突變型病毒的出現(xiàn)，使得防疫限制措施可能會持續(xù)或間歇實(shí)施，仍對我國細(xì)胞病理學(xué)工作產(chǎn)生了巨大影響[8]。因此不斷探索安全有效的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的前處理方式阻斷病毒傳播尤為重要。在新冠疫情常態(tài)化的環(huán)境下，本文對細(xì)胞學(xué)標(biāo)本前處理方進(jìn)行了探討，通過比較加熱前后漿膜腔積液標(biāo)本的大體觀、細(xì)胞涂片及細(xì)胞蠟塊HE和免疫組織化學(xué)染色，最終的病理診斷結(jié)果均一致。需指出，加熱也會對細(xì)胞形態(tài)略有影響，低倍鏡下細(xì)胞形態(tài)無明顯差異，但高倍鏡可查見核膜稍皺縮，核仁稍不清，但對最終診斷無影響。

我們探索的加熱預(yù)處理對于類似高傳染性體液標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)及制片均具有借鑒意義，能降低醫(yī)務(wù)人員操作中病毒傳播的危險，減少院內(nèi)感染，是一種簡單易行的切斷新冠病毒傳播的有效方式之一，值得借鑒。