劉楠楠 于淑玲 李麗娟

宮頸癌是常見的女性生殖道惡性腫瘤，其發(fā)病率在發(fā)展中國家中僅次于乳腺癌［1］。隨著宮頸癌篩查的開展，宮頸癌的診斷率出現(xiàn)明顯上升［2］。有研究認(rèn)為分子生物學(xué)指標(biāo)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系［3］。角質(zhì)細(xì)胞生長因子受體（Keratinocyte growth factor receptor，KGFR）是一種堿性蛋白生長因子，可特異刺激細(xì)胞的再生、分化和遷移等生理過程。組織激肽釋放酶蛋白8（Tissue kallikrein protein 8，KLK8）屬于絲氨酸蛋白酶家族，劉雪梅等［4］研究中報(bào)道KLK8 在人體內(nèi)受激素調(diào)控，與婦科腫瘤密切聯(lián)系。去整合素基質(zhì)金屬蛋白酶-19（Disintegrin matrix metalloproteinase-19，ADAM-19）是一種分泌型蛋白，其在信號傳導(dǎo)、腫瘤侵襲中具有重要作用［5］。本文旨在研究KGFR、KLK8及ADAM-19 與宮頸癌臨床病理、預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020 年12 月至2021 年12 月承德市第三醫(yī)院收治的宮頸癌患者102 例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為宮頸癌［5］；②臨床資料完整；③簽署知情同意書；④其血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能等未見異常者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②認(rèn)知功能異常，無法正常交流者；③合并代謝性疾病者。平均年齡（68.27±6.88）歲，根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Obstetrics and Gynaecology，F(xiàn)IGO）臨床分期標(biāo)準(zhǔn)［6］：Ⅰb 53 例，Ⅱa 49 例，腫瘤直徑：≤4 cm 80 例，＞4 cm 22 例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有47 例，無55 例。另選取同期子宮肌瘤全切除術(shù)中病理證實(shí)無病變的宮頸組織標(biāo)本78 例為對照組，平均年齡（69.31±6.93）歲。本研究取得醫(yī)院倫理委員會同意。

1.2 方法

1.2.1 KGFR、KLK8 及ADAM-19 檢測

KGFR、KLK8 及ADAM-19 均使用免疫組化法，石蠟包埋，連續(xù)切片厚度為3～4 μm，其中兩張用于免疫組化染色。試劑為KGFR 單克隆抗體（北京義翹神州科技股份公司提供）、山羊抗人KLK8 多克隆抗體免疫組化試劑盒（北京博爾西科技有限公司提供）、鼠抗人ADAM-19 單克隆抗體（北京義翹神州科技股份公司提供）。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，設(shè)陰陽對照組，采用PBS 液作為陰性對照組，已知陽性切片為陽性對照組。

結(jié)果判讀［7］：免疫組化陽性染色為明顯的黃色和棕黃色顆粒。KGFR：細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒為染色陽性，KLK8：胞漿為淡黃色或棕黃色顆粒為染色陽性，ADAM-19：細(xì)胞漿或細(xì)胞膜出現(xiàn)棕色和褐色顆粒為染色陽性。另外每張切片隨時(shí)觀察5 個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200 個(gè)腫瘤細(xì)胞，取平均值。KGFR、KLK8 及ADAM-19 采用半定量積分法評判結(jié)果：陽性所占比計(jì)分：0 分，未見陽性腫瘤細(xì)胞；1 分，陽性腫瘤細(xì)胞≤25%；2 分，陽性腫瘤細(xì)胞≤50%；3 分，陽性腫瘤細(xì)胞≤75%；4 分，陽性腫瘤細(xì)胞＞75%。陽性強(qiáng)度黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分，兩者積分相乘，0 分為陰性（-），l～4 分為弱陽性（+），5～8 分為中度陽性（++），9～12 分為強(qiáng)陽性（+++）。+視為低表達(dá)，++/+++視為高表達(dá)。

1.2.2 預(yù)后情況評估

所有患者行新輔助化療、根治性化療等，根據(jù)其治療后轉(zhuǎn)歸情況分為預(yù)后良好組（無復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡）和預(yù)后不良組（死亡、病情進(jìn)展）。同時(shí)收集患者一般資料：年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織分化程度、有無脈管瘤栓、有無深肌層浸潤、有無宮旁浸潤等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（±s）描述，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用多元Logistic 回歸分析影響宮頸癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組KGFR、KLK8及ADAM-19表達(dá)水平比較

觀察組KGFR、KLK8 及ADAM-1 高表達(dá)率均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 KGFR、KLK8及ADAM-19相關(guān)病理圖（雙染色法，×50）Figure 1 Relevant pathological charts of KGFR，KLK8 and adam-19（Double staining method，×50）

表1 不同組織中KGFR、KLK8 及ADAM-1 的表達(dá)比較［n（%）］Table 1 Comparison of the expressions of KGFR，KLK8 and ADAM-1 in different tissues［n（%）］

2.2 KGFR、KLK8 及ADAM-19 與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間KGFR表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同臨床分期、不同病理類型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間KLK8表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管浸潤及有無深肌層浸潤之間ADAM-1 表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 KGFR、KLK8 及ADAM-19 與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 The relationship between KGFR，KLK8 and ADAM-19 and clinicopathological features of cervical cancer［n（%）］

2.3 KGFR、KLK8 及ADAM-19 與宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系

121 例患者中預(yù)后良好71 例，預(yù)后不良31 例。預(yù)后不良組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有深肌層浸潤KGFR、KLK8 及ADAM-19 高表達(dá)率明顯高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 KGFR、KLK8 及ADAM-19 與宮頸癌患者預(yù)后關(guān)系［n（%）］Table 3 Relationship between KGFR，KLK8 and ADAM-19 and prognosis of cervical cancer patients［n（%）］

2.4 影響宮頸癌患者預(yù)后相關(guān)因素分析

經(jīng)多元Logistic回歸分析可知，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤、KGFR、KLK8 及ADAM-19 是影響宮頸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表4。

表4 影響宮頸癌患者預(yù)后多因素Table 4 Multiple factors affecting the prognosis of patients with cervical cancer

3 討論

信號傳導(dǎo)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要意義，其異常激活可引發(fā)多種腫瘤形成［8］。生長因子及其受體可參與信號傳導(dǎo)通路，對細(xì)胞分化、增殖、遷移有諸多特殊作用［9］。KGFR 主要位于人體上皮細(xì)胞，具有酪氨酸激酶活性，被視為FGFR2 的剪接變體，即FGFR2HⅢb，可間接刺激上皮細(xì)胞的有絲分裂和分化。國內(nèi)有少數(shù)研究認(rèn)為在宮頸癌中均有KGFR 表達(dá)，其與宮頸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［10］。本次研究顯示KGFR 在宮頸癌組織中呈高度表達(dá)，可能會對宮頸癌發(fā)生造成影響，同時(shí)其表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示該因子可參與癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移過程，可進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤侵襲性。

KLK 基因家族緊密參與各類疾病發(fā)展，尤其是激素依賴性腫瘤，主要為卵巢、乳腺等激素相關(guān)器官相關(guān)的腫瘤［11］。國外研究中認(rèn)為KLK8變異體對卵巢癌的預(yù)后不具備評價(jià)意義，但正常形式的KLK8 表達(dá)在卵巢癌中呈異常，如其表達(dá)下降說明患者預(yù)后良好［12］。有學(xué)者也認(rèn)為KLK8基因與宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肺癌等疾病發(fā)生有重大聯(lián)系，尤其在宮頸癌中呈高表達(dá)［13］。本次研究中通過分析KLK8基因與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)其與臨床分期、病理類型即淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示其在宮頸癌的轉(zhuǎn)移、分化中扮演重要角色，可能可作為淋巴結(jié)預(yù)測的指標(biāo)。

以往研究認(rèn)為腫瘤細(xì)胞與成分的黏附是觸發(fā)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過程后續(xù)事件的關(guān)鍵步驟［14］。ADAM-19 可借用整合素區(qū)、不同的整合素相互作用、相互制約從而對細(xì)胞黏附造成影響。有研究認(rèn)為ADAM-19 在肺癌、腦癌、子宮內(nèi)膜癌中呈高度表達(dá)，推測原因是ADAM-19 的基質(zhì)金屬蛋白酶和其抑制物對腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移有重要作用［15］。本次研究中ADAM-19 在宮頸癌組織中呈高表達(dá)，且表達(dá)與與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤及深肌層浸潤均存在重要聯(lián)系，間接說明ADAM-19 基質(zhì)金屬蛋白酶對宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移同樣具有重要意義。

本次研究顯示，KGFR、KLK8 及ADAM-19 在宮頸癌預(yù)后不良患者中呈高表達(dá)，且三者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤均是影響宮頸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說明三者對患者預(yù)后情況具有重要參考價(jià)值，臨床可進(jìn)一步增強(qiáng)上述因素的監(jiān)測，在治療中合理利用其他手段改善患者預(yù)后。

綜上，KGFR、KLK8 及ADAM-19 在宮頸癌組織中呈高度表達(dá)，與患者病理特征及預(yù)后均具有密切聯(lián)系，三者或許可成為宮頸癌診斷及預(yù)后的重要指標(biāo)，對臨床診療方案制定具有一定參考價(jià)值。