張 崢

（甘肅省白銀市會(huì)寧縣草灘鎮(zhèn)獸醫(yī)站，甘肅白銀 730723）

近年來(lái)，伴隨著寵物市場(chǎng)的發(fā)展，寵物犬飼養(yǎng)數(shù)量日益增加，鉤端螺旋體病對(duì)寵物狗以及其飼養(yǎng)人員造成危害越來(lái)越大，本文就鉤端螺旋體病的病原、流行病學(xué)特征、主要發(fā)病癥狀、病理變化、綜合診治加以論述，以供廣大獸醫(yī)從業(yè)人員參考。

1 病原學(xué)特征

鉤端螺旋體根據(jù)DNA 的不同被分為兩個(gè)不同的種群：致病性問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體、腐生性雙曲鉤端螺旋體。國(guó)內(nèi)從犬類(lèi)身體上分離下來(lái)的鉤端螺旋體，按照其特異性抗原的不同血清型，被分為犬群（L.canicola）、流感傷寒群（L.grippotyphosa）、波摩那群（L.pomona）、黃疸出血群（L.icterohemorrhagiae）等。目前我國(guó)是發(fā)現(xiàn)鉤端螺旋體血清型最多的國(guó)家。也是被鉤端螺旋體病危害最嚴(yán)重的國(guó)家之一。

鉤端螺旋體是一種需氧菌，在培養(yǎng)過(guò)程中，最佳培養(yǎng)溫度為28-30℃，但從被感染組織分離時(shí)的最佳溫度為37℃。培養(yǎng)時(shí)為了避免強(qiáng)酸強(qiáng)堿對(duì)培養(yǎng)體的影響，最好將使用的培養(yǎng)基pH 值調(diào)節(jié)至7.2。由于鉤端螺旋體生長(zhǎng)、增值速度低，需要培養(yǎng)15～20 d 方可觀察到較為顯著的生長(zhǎng)現(xiàn)象。

鉤端螺旋體菌體纖細(xì)，一頭或兩頭有彎曲的小鉤，緊密螺旋，寬約為0.1～0.2 m，長(zhǎng)7～20m；經(jīng)Fontana 鍍銀染色后呈棕褐色或者褐色。其運(yùn)動(dòng)時(shí)，兩頭較為靈活、柔軟，而中間段比較僵硬，可借此區(qū)分其他螺旋體。鉤端螺旋體是一種需氧菌，最適合它的生長(zhǎng)溫度約為28～30℃，不耐紫外線、高溫，陽(yáng)光直射超過(guò)3 h 即可殺死，60℃超過(guò)10 s或50℃維持10 min 均可將其殺死。但是鉤端螺旋體對(duì)于低溫有著較高的耐受程度，所以能在低溫環(huán)境下長(zhǎng)時(shí)間生存；不耐酸堿，漂白粉，燒堿，來(lái)蘇水均可將其殺滅。由于該菌長(zhǎng)期生活在腎臟組織中，多經(jīng)過(guò)尿液排出污染水源感染其他動(dòng)物。

2 流行病學(xué)

由于鉤端螺旋體在世界各地的廣泛生存，且宿主范圍極大，故世界各地均有該病發(fā)生，多以降水豐沛、環(huán)境溫度高的亞熱帶和熱帶發(fā)病率高。鉤端螺旋體在我國(guó)宿主分布廣泛，大多數(shù)溫血?jiǎng)游锒加斜汇^端螺旋體感染的可能性，在哺乳類(lèi)中，有袋目、嚙齒目、食肉目以及人類(lèi)飼養(yǎng)的牲畜是其最主要的宿主；鉤端螺旋體病的流行擁有著明顯的季節(jié)性，多發(fā)于夏秋兩季，7～10 月為高峰期，但常年氣溫較高的地區(qū)尤其是熱帶四季均有病例出現(xiàn)。幼犬及雄犬相較老齡犬、母犬更加容易被鉤體感染發(fā)病，發(fā)病癥狀也更加強(qiáng)烈。貓的感染率較低。老鼠、患病犬、健康帶菌犬及康復(fù)犬均可充當(dāng)鉤端螺旋體的主要傳染源。由于鉤端螺旋體長(zhǎng)期生活在宿主的腎臟組織，多經(jīng)過(guò)尿液排出，污染水源，接觸到其他動(dòng)物破損的皮膚，消化道黏膜，其他動(dòng)物由此感染；此外還可以通過(guò)咬傷、交配、食入污染物發(fā)生傳播，也可通過(guò)胎盤(pán)發(fā)生垂直傳播；吸血性節(jié)肢動(dòng)物（如蚊子）以及一些鳥(niǎo)類(lèi)（燕子）和兩棲動(dòng)物（青蛙、蟾蜍）是鉤體的最重要的傳播媒介。因?yàn)椴∪I臟長(zhǎng)期帶毒，故可通過(guò)排尿，持續(xù)性的排出鉤體，圈舍、水源、寵物食品、墊料均有可能被污染，進(jìn)而感染其他動(dòng)物。

犬鉤端螺旋體病的發(fā)生與飼養(yǎng)管理的好壞密切相關(guān)，飼養(yǎng)密度大、氣候突變、饑餓、長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激因素或其他導(dǎo)致集體衰弱的因素均可誘發(fā)隱性感染的病犬表現(xiàn)出典型的臨床癥狀，嚴(yán)重者在幾天甚至幾個(gè)小時(shí)死亡。

3 臨床癥狀及病理變化

3.1 急性感染型

初期感染主要癥狀為機(jī)體溫度升高至39℃～40℃，全身性肌肉發(fā)生觸痛、震顫，隨后發(fā)生嘔吐，脫水；由于血管內(nèi)外壁受損，鼻出血、便血、嘔血、糞便發(fā)黑等癥狀隨之而來(lái)；最后病犬體溫下降，精神沉郁乃至死亡。一些發(fā)病迅速的病犬會(huì)出現(xiàn)菌血癥，無(wú)明顯臨床反應(yīng)就立即死亡。

3.2 亞急性感染型

整體病程較長(zhǎng)，主要癥狀包括體溫升高、呼吸困難、嘔吐、脫水、飲欲增加、厭食。發(fā)病犬只的黏膜出血，可見(jiàn)紅色出血點(diǎn)；在病犬呼吸困難的同時(shí)，可能出現(xiàn)干性咳嗽、鼻炎、扁桃體炎、結(jié)膜炎的癥狀。由于部分病犬腎臟受到鉤端螺旋體侵害，會(huì)有少尿或是尿毒癥癥狀發(fā)生，尿液顏色表現(xiàn)為棕紅色，有一特別的腥臭味。經(jīng)過(guò)亞急性感染沒(méi)有死亡的犬只，一般會(huì)在發(fā)病14～20 d 恢復(fù)，但由于有些病犬由于腎臟機(jī)能受到損傷破壞，會(huì)出現(xiàn)煩渴、多尿的癥狀。

3.3 出血性黃疸性鉤端螺旋體感染型

病犬被感染后，會(huì)出現(xiàn)黏膜黃染，體溫升高，嘔吐，尿液轉(zhuǎn)變?yōu)槎褂蜕?，檢查尿液可發(fā)現(xiàn)膽紅素，牙齦牙齦泛黃，機(jī)體各部結(jié)膜發(fā)生炎癥等。有的犬則會(huì)出現(xiàn)出血性胃腸炎和潰瘍性胃炎的癥狀；還有病犬會(huì)出現(xiàn)明顯的腹水、體重減輕、肝臟衰竭的癥狀。

3.4 病理變化

經(jīng)過(guò)解剖可發(fā)現(xiàn)病犬扁桃體異常腫大，舌頭出現(xiàn)潰瘍；肺部出現(xiàn)出血，充血，淤血病變并發(fā)生纖維素性壞死，胸膜伴有出血點(diǎn)，呼吸道發(fā)生水腫。黏膜黃染，呈黃疸癥狀。心臟的表面呈粉紅色，心臟肌肉切面存在灰黃條紋，橫紋消失，質(zhì)地變脆。肝臟變腫變大，肝的質(zhì)地變脆；腎臟變腫變大，外表面可觀察到出血點(diǎn)且伴有灰白色壞死病灶；胃腸黏膜存在出血點(diǎn)且發(fā)生水腫。淋巴結(jié)腫大且伴有炎癥病理變化。

4 診斷

可以通過(guò)解剖檢查病變、觀察臨床癥狀并配合流行病學(xué)調(diào)查初步診斷急性感染型、亞急性感染型。慢性感染的病例由于病理變化、難以觀察到特異性臨床表現(xiàn)，必須經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室鑒定，才能得出結(jié)論。

4.1 顯微鏡檢查

在犬只發(fā)病后，體溫升高，菌體數(shù)量大幅增加，且未使用抗生素治療時(shí)，可采取病犬血液制成涂片，鍍銀染色，待觀測(cè)到兩頭或一頭彎曲呈鉤狀的“S”形或“C”形菌體時(shí)，即可確診。

在病程中后期，可取病犬尿液，離心，制成液滴壓片標(biāo)本，利用暗視野顯微鏡進(jìn)行觀察，經(jīng)過(guò)觀察，若發(fā)現(xiàn)“S”或“C”形彎曲、旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的帶鉤狀菌體，即可確診[1]。

4.2 血常規(guī)檢查

犬只感染鉤端螺旋體后的典型特征為血小板數(shù)量減少，而白細(xì)胞的數(shù)量大幅增長(zhǎng)，但在菌血癥時(shí)期，白細(xì)胞的數(shù)量先減少，而后大量增加，峰值約為17000～44000 個(gè)/μL。與此同時(shí)，多數(shù)發(fā)病犬只因?yàn)槟I功能損傷，會(huì)有低氯血癥、低血鈉癥、高血鉀癥出現(xiàn)，有的病犬的肌酸酐、尿素氮濃度會(huì)高于正常水平。

4.3 微生物學(xué)檢測(cè)

首先將采集到的病犬的腎組織、尿液、腦脊液等臨床樣本接種至中性培養(yǎng)基，加入10%的兔血清，放到恒溫環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度設(shè)定為30℃，然后利用暗視野顯微鏡檢查。在培養(yǎng)鉤端螺旋體的前期，鉤端螺旋體的增殖速度一般比較低，每增殖一代時(shí)間約為20 h，培養(yǎng)的時(shí)間可延長(zhǎng)到第92 天。在培養(yǎng)同一批次的培養(yǎng)物時(shí)，如果存在生長(zhǎng)者，未生長(zhǎng)培養(yǎng)物需繼續(xù)培養(yǎng)，如果15 d 后鉤體仍然未生長(zhǎng)，則判為陰性。

采集病料時(shí)，急性發(fā)熱期的病犬肝、心臟、肺等內(nèi)臟器官以及血液中的鉤端螺旋體數(shù)量極高，但是只要機(jī)體生成相應(yīng)抗體，伴隨著抗體數(shù)量的增加，鉤端螺旋體被大量消滅，數(shù)量急劇減少，僅有少數(shù)抗體很難抵達(dá)的區(qū)域，比方說(shuō)在腎小管鉤區(qū)域端螺旋體才能存活。因此，在病犬急性發(fā)熱的前期，且未使用抗生素時(shí)，最好采取病犬的血液作為樣本進(jìn)行檢驗(yàn)；病犬病程處于中后期時(shí)，則宜使用尿液、脊髓液充當(dāng)檢測(cè)病原的樣本材料。對(duì)于因感染鉤端螺旋體已經(jīng)病死的病犬，其體內(nèi)的鉤端螺旋體會(huì)在短時(shí)間內(nèi)大量溶解死亡，很難檢查出來(lái)，最好在病犬發(fā)病死亡后一小時(shí)內(nèi)立即采集病料并送檢。經(jīng)過(guò)鍍銀染色，鉤端螺旋體更容易被發(fā)現(xiàn)[2～4]。

4.4 動(dòng)物接種

在進(jìn)行動(dòng)物接種試驗(yàn)時(shí)，一般使用低齡豚鼠或倉(cāng)鼠，主要是因?yàn)槎邔?duì)致病性鉤端螺旋體存在較強(qiáng)的敏感性。對(duì)于因感染鉤端螺旋體已經(jīng)病死的病犬，一般利用病死犬的腎、肝制成的乳劑做腹腔注射接種；對(duì)未病死的病犬，一般取急性發(fā)病前期的血液注射接中至豚鼠腹腔；之后每日觀測(cè)豚鼠活動(dòng)狀態(tài)并測(cè)量體溫。對(duì)于接種病料的豚鼠，一定要進(jìn)行嚴(yán)格管理，豚鼠排出的尿液和糞便必須嚴(yán)格消毒，以防止豚鼠糞尿污染環(huán)境，導(dǎo)致人畜共患病發(fā)生，飼養(yǎng)管接種了病料的豚鼠的豚鼠必須穿好防護(hù)服，做好消毒工作。鉤端螺旋體往往先潛伏3～5 d，而后豚鼠身體溫度急劇增高，食欲不振，2 d 后黏膜發(fā)生黃染，緊接著豚鼠體溫降低，死亡。最好在豚鼠病死之前進(jìn)行撲殺，隨后開(kāi)展剖檢病變組織器官、分離培養(yǎng)、顯微鏡檢測(cè)。

4.5 PCR 技術(shù)檢測(cè)

PCR 技術(shù)檢測(cè)相較于傳統(tǒng)檢測(cè)手段在微生物病原體的檢測(cè)中擁有較大的優(yōu)勢(shì)：高度的敏感性、快速準(zhǔn)確的高效性、不需分離培養(yǎng)病原體、極強(qiáng)的特異性、更低的時(shí)間人力成本。鉤端螺旋體的許多基因，如secY、鞭毛蛋白基因等，已經(jīng)作為PCR 診斷目的基因。荷蘭皇家熱帶病研究院WHO 鉤端螺旋體病參考中心在多年研發(fā)之后，制成了針對(duì)不同致病性鉤端螺旋體的特異性擴(kuò)增的引物GT1（5’-TGAATCGCTGTATAAAAGT -3’）、GT2（5’-GGAAAACAAATGGTCGGAAG-3’），極大地推廣了PCR 技術(shù)檢測(cè)鉤端螺旋體的應(yīng)用。

4.6 血清學(xué)檢測(cè)

MAT，即顯微鏡凝集試驗(yàn)，是檢測(cè)鑒別鉤端螺旋體的重要標(biāo)準(zhǔn)之一，其使用范圍非常廣泛，與此同時(shí)也是可以鑒別不同類(lèi)群鉤端螺旋體的唯一方法；但在病犬的發(fā)病初期，該方法沒(méi)有辦法測(cè)出發(fā)病犬只是否仍處于帶菌狀態(tài)。

ELLSA，即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，該方法可針對(duì)鉤端螺旋體進(jìn)行特異性檢查，相對(duì)于顯微鏡凝集試驗(yàn)，ELLSA 擁有更高的靈敏性，而且更加容易讓操作變得標(biāo)準(zhǔn)化，故適用于試驗(yàn)樣品數(shù)量較大的批量化操作，鉤端螺旋體病的早期診斷多使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)鑒定。

4.7 墨汁染色法

染色方法：首先是取病犬的尿液（胸腔積液、腹水）1 滴，然后再取1 滴染色液，混合二者之后進(jìn)行涂片，放置于常溫之下等待其干燥，然后利用顯微鏡進(jìn)行檢查。經(jīng)過(guò)觀測(cè)后，發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)的背景呈現(xiàn)黑色，其中存在發(fā)亮或者無(wú)色的“S”形或“C”形且呈螺旋彎曲的菌體時(shí)，即可確診。該過(guò)程使用的染色液體是“一得閣”墨汁[5～7]。

5 治療

5.1 抗生素治療

治療病犬時(shí)首先將病犬隔離至原來(lái)的圈舍中，未發(fā)病則在消毒之后轉(zhuǎn)移至為發(fā)病的、消毒完畢的圈舍。給病犬肌肉注射3 萬(wàn)單位/kg 青霉素，每天早晚各一次；由于青霉素?zé)o法殺滅處于腎臟中的鉤端螺旋體，還可采用鏈霉素、呋塞米進(jìn)行聯(lián)合治療，一般肌肉注射20 mg/kg的鏈霉素，每天早晚各一次；肌肉注射4 mg/kg 呋塞米，每天中午一次。同時(shí)，可給病犬飼料摻入0.1%的四環(huán)素混飼喂養(yǎng)。一般經(jīng)過(guò)10～15 d 的治療，病犬身體狀況能有明顯的好轉(zhuǎn)。

5.2 支持性治療

在進(jìn)行抗生素治療的同時(shí)，對(duì)于身體條件較差的發(fā)病犬只，可給予針對(duì)性的支持性治療。對(duì)于發(fā)生嘔吐、吐血、脫水嚴(yán)重的病犬，可以靜脈注射生理鹽水、等滲葡萄糖以補(bǔ)充體液。若病犬發(fā)生尿毒癥，補(bǔ)充葡萄糖、生理鹽水的同時(shí)，還應(yīng)注射呋塞米，有利于其尿液排出[8～10]。對(duì)身體虛弱的病犬，則需要補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)支持治療，ATP 輔酶 A、維生素B12、葡醛內(nèi)酯、羥基淀粉-20 等，配合抗生素治療10～15 d，多數(shù)病犬身體狀況會(huì)有明顯的好轉(zhuǎn)。

6 預(yù)防

6.1 疫苗接種

用鉤端螺旋體疫苗注射免疫是主要預(yù)防措施之一[11～13]。發(fā)病后，一般按照健康犬只、假定健康犬只、發(fā)病犬只的序列對(duì)犬只注射針對(duì)鉤體的多價(jià)滅活苗，以此增強(qiáng)犬只的免疫力。幼犬在出生60 d時(shí)可進(jìn)行第一次疫苗注射，14 d 后再進(jìn)行一次接種，可以維持半年的保護(hù)期。在鉤端螺旋體病流行的夏秋季節(jié)，

6.2 滅鼠

鼠類(lèi)為傳播鉤體的常見(jiàn)宿主，可在犬只飼養(yǎng)區(qū)域布置捕鼠夾，滅鼠藥品，被捕殺的老鼠必須滅菌處理，以防污染環(huán)境。

6.3 環(huán)境消毒

若要將被病犬尿液污染的狗窩、飼養(yǎng)用具以及水源再次投入使用，需要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。一般用燒堿、次氯酸鈉、次氯酸鈣等進(jìn)行消毒[14]。