王家才，郭 蓓，黃海洋，田雨婷

（1.商丘市農(nóng)林科學(xué)院，河南 商丘 476000；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南 鄭州 450000）

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）屬真菌界（Fungi）擔(dān)子菌門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales） 蘑菇科（Agaricaceae），又稱蘑菇、雙孢菇等，享有“植物肉”“素中之葷”等美譽(yù)。其營(yíng)養(yǎng)豐富，肉質(zhì)細(xì)嫩，是著名的高蛋白、低脂肪食物，廣受消費(fèi)者喜愛。目前，雙孢蘑菇在世界上栽培區(qū)域最廣，生產(chǎn)規(guī)模最大，且產(chǎn)量最高，因此還被稱為“世界菇”[1]。自2000年以來，我國(guó)雙孢蘑菇生產(chǎn)進(jìn)入人工栽培和工廠化栽培并行發(fā)展階段。截至2008年，我國(guó)人工栽培雙孢蘑菇的產(chǎn)量已經(jīng)名列世界第一[2]。據(jù)中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)，2019年我國(guó)雙孢蘑菇總產(chǎn)量近231萬噸，工廠化栽培產(chǎn)量為24.63萬噸，人工栽培仍是雙孢蘑菇生產(chǎn)的主力軍，約占總產(chǎn)量的89%[3]。但在人工栽培過程中，由于技術(shù)水平的參差不齊，時(shí)常會(huì)有各種病蟲害發(fā)生，其中細(xì)菌性褐斑病就是雙孢蘑菇生產(chǎn)中的重要病害之一。

細(xì)菌性褐斑病又叫托拉斯假單孢桿菌病、銹斑病、細(xì)菌性斑點(diǎn)病等，分布廣泛，發(fā)生普遍。引發(fā)雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的病原菌為托拉斯假單孢桿菌（Pseudomonas tolaasii Paine）。病原菌通過侵染子實(shí)體表面組織引起病癥，主要集中在菌蓋上；菌柄上也偶爾發(fā)生，表現(xiàn)為縱向凹斑；菌褶很少感染；菌肉會(huì)發(fā)生色變，但變色部分一般很淺，很少超過表面向內(nèi)3 mm。發(fā)病初期，雙孢蘑菇的菌蓋表面出現(xiàn)暗褐色小斑點(diǎn)；后逐漸擴(kuò)大成圓形病斑，呈淡褐色至深褐色，略凹陷，水浸狀；嚴(yán)重時(shí)，菌蓋上布滿大小不一的褐色斑點(diǎn)，有時(shí)斑點(diǎn)連成片狀，產(chǎn)生褐色粘液。菌蓋發(fā)病部位往往積水嚴(yán)重，當(dāng)病斑干燥后，菌蓋易畸形、開裂[4]。關(guān)于雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的研究，主要在國(guó)外報(bào)道得比較多，包括病原菌的分離、鑒定、分類學(xué)相關(guān)的研究以及致病機(jī)制方面的研究，而國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。目前對(duì)于該病以物理防治為主，化學(xué)防治仍然比較困難，較為常用的化學(xué)制劑主要是農(nóng)用鏈霉素、春日霉素、漂白粉液等，稍有不當(dāng)便會(huì)造成巨大損失，且這些制劑在實(shí)際應(yīng)用中效果并不理想[5]。

食用菌子實(shí)體生長(zhǎng)周期短，病蟲害防治時(shí)要求選擇高效、低毒、綠色環(huán)保、特異性強(qiáng)的藥劑，防止對(duì)人體和食用菌本身造成傷害。噻霉酮（benziothiazolinone） 是一種新型、高效、低毒、低殘留的廣譜殺菌劑，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物細(xì)菌性侵染病害的防治中，如黃瓜霜霉病、梨黑星病、蘋果瘡痂病、柑橘炭疽病、葡萄黑痘病等[6]。因此，通過在雙孢蘑菇出菇間期向菇床表面噴施噻霉酮，以觀察其對(duì)雙孢蘑菇子實(shí)體細(xì)菌性褐斑病的防治效果。

試驗(yàn)中主要采用了噻霉酮的懸乳劑和微乳劑2種藥劑類型。懸浮劑是將不溶于水的固體原藥與潤(rùn)濕分散劑、粘度調(diào)節(jié)劑及其他助劑和水混合，經(jīng)濕法研磨，在水中形成高度分散的、粘稠且可流動(dòng)的懸濁液體劑型，其最大優(yōu)點(diǎn)是對(duì)環(huán)境安全。微乳劑是由油溶性原藥、乳化劑和水組成的均相液體劑型，觀感透明，是近年來發(fā)展迅速的安全劑型[7]。通過試驗(yàn)，以期為噻霉酮應(yīng)用于人工栽培食用菌的細(xì)菌性病害防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑

5%噻霉酮懸浮劑和3%噻霉酮微乳劑，陜西西大華特公司。噻霉酮的有效成份分子式為C7H5SON，其原藥的物理性狀表現(xiàn)為微黃色粉末，比重為0.8，熔點(diǎn)為（158±1）℃，在溶劑為水、溫度為20℃的條件下，其溶解度為4 g·L-1。噻霉酮制劑的外觀為微黃色穩(wěn)定均相液體，比重為1.02，pH為6～8。其系列產(chǎn)品為水乳劑，劑型先進(jìn)、散熱性好、環(huán)保、不污染環(huán)境，是無公害農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的首選殺菌劑，對(duì)真菌性病害具有預(yù)防和治療作用。

1.2 試驗(yàn)藥劑處理

設(shè)置4個(gè)不同噻霉酮有效成分量的處理，以噴施125 mL·m-2的清水作為空白對(duì)照。各處理的劑量詳見表1。

表1 供試藥劑處理Tab.1 Treatments of tested agents

如表1所示的各處理施藥劑量進(jìn)行試驗(yàn)，在雙孢蘑菇子實(shí)體發(fā)生前對(duì)菇床均勻噴霧。每組處理4次重復(fù)，每個(gè)小區(qū)面積為2 m2。

1.3 試驗(yàn)對(duì)象與作物

試驗(yàn)對(duì)象：雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病，該病害為自然發(fā)生。

試驗(yàn)作物：雙孢蘑菇，品種為W-192，播種方式為撒播。

1.4 試驗(yàn)地點(diǎn)及環(huán)境條件

試驗(yàn)地點(diǎn)：河南省商丘市農(nóng)林科學(xué)院北地試驗(yàn)田大棚 （115°43′8″E，34°32′21″N）。

環(huán)境條件：菇床土壤肥沃、平整；灌溉排水設(shè)施齊全，灌溉方式為噴灌。施藥時(shí)大棚溫度為20℃，相對(duì)濕度為60.7%。

1.5 施藥時(shí)間及方法

施藥時(shí)間：2020年4月1日，雙孢蘑菇出菇前進(jìn)行施藥。

施藥方法：采用噴霧法進(jìn)行施藥，電動(dòng)噴霧器的用水量設(shè)置為1 250 L·hm-2。

1.6 調(diào)查方法

依據(jù)《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則（第10部分）》[8]中關(guān)于殺菌劑防治蘑菇細(xì)菌性病害的要求，按照標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序SOP（standard operating procedure） 及試驗(yàn)委托方和承擔(dān)方簽定的試驗(yàn)協(xié)議要求進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)小區(qū)調(diào)查2 m2培養(yǎng)料上子實(shí)體受細(xì)菌性褐斑病感染的情況，記錄發(fā)病的子實(shí)體數(shù)量。

施藥12天后（2020年4月13日），進(jìn)行藥劑防治效果調(diào)查1次。調(diào)查內(nèi)容包括：藥物對(duì)雙孢蘑菇子實(shí)體的直接影響，觀察施藥區(qū)與對(duì)照區(qū)雙孢蘑菇的生長(zhǎng)情況。

1.7 計(jì)算與分析方法

依據(jù)參考文獻(xiàn)[8]關(guān)于殺菌劑防治蘑菇細(xì)菌性病害的要求，以及本試驗(yàn)機(jī)構(gòu)相關(guān)SOP及試驗(yàn)委托方和承擔(dān)方簽定的試驗(yàn)協(xié)議要求進(jìn)行。目測(cè)子實(shí)體菌蓋病斑面積占該子實(shí)體菌蓋面積的百分比值，以百分比值對(duì)感染細(xì)菌性褐斑病的雙孢蘑菇進(jìn)行分級(jí)。各等級(jí)的劃分標(biāo)準(zhǔn)詳見表2。

表2 染病等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)Tab.2 Standard of infection grade

基于表2劃分的等級(jí)序數(shù)（j），雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病病情指數(shù)（I，%）的計(jì)算公式為：

式中：j為等級(jí)序數(shù)；Nj為j等級(jí)下感染細(xì)菌性褐斑病的雙孢蘑菇子實(shí)體數(shù)量（個(gè)）；Mj為j等級(jí)子實(shí)體總數(shù)（個(gè)）。

噻霉酮防治率（E，%）的計(jì)算公式為：

式中：I0為空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)（%）；Ii為防治區(qū)病情指數(shù)（%）。

采用DPS軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行Duncan's新復(fù)極差法方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 噻霉酮的防治效果

使用不同劑量5%噻霉酮懸浮劑和3%噻霉酮微乳劑處理后，對(duì)雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的防治效果見表3。

由表3可知，處理3（使用5%噻霉酮懸浮劑，有效成分用量為17.5 g·hm-2）對(duì)雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的防治效果最好，防治率為86.23%。其次是處理2（使用5%噻霉酮懸浮劑，有效成分的用量為12.5 g·hm-2）和處理4（使用3%噻霉酮微乳劑，有效成分用量為13.5 g·hm-2），防治率分別為75.76%和74.85%。上述3組處理的防治效果差異不顯著。處理1（使用5%噻霉酮懸浮劑，有效成分的用量為7.5 g·hm-2）的防治效果為65.07%，與處理3之間有顯著性差異（P<0.05）。

表3 噻霉酮不同處理對(duì)雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的防治效果Tab.3 Effects of different treatments with benziothiazolinone on control of bacterial brown spot of of Agaricus bisporus

2.2 噻霉酮對(duì)子實(shí)體的影響

與處理5（CK） 相比，處理1～處理4施藥區(qū)的雙孢菇子實(shí)體長(zhǎng)勢(shì)良好，未出現(xiàn)畸形、纖細(xì)、瘦弱等現(xiàn)象；菌蓋大小無差別。施藥區(qū)的雙孢蘑菇菌蓋顏色潔白，菇形完整，外觀形態(tài)符合雙孢蘑菇W192品種的基本特征。因此，使用噻霉酮防治雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病不會(huì)影響子實(shí)體生長(zhǎng)及商品形態(tài)。

3 討論

雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的病原菌廣泛存在于自然界，在其人工栽培過程中，培養(yǎng)料、覆土、生產(chǎn)管理用水等，均可成為主要的初侵染源。研究發(fā)現(xiàn)，引起雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的假單孢桿菌常發(fā)生于高溫、高濕、通風(fēng)不良的環(huán)境中，特別是在潮濕且有機(jī)質(zhì)豐富的在栽培基質(zhì)上可被大量檢測(cè)到[9]。因此，雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病的防治仍應(yīng)以物理防治為主，化學(xué)防治為輔。首先應(yīng)加強(qiáng)人工栽培管理，嚴(yán)格把控菌種質(zhì)量，重視培養(yǎng)料發(fā)酵滅菌、覆土材料消毒等環(huán)節(jié)操作規(guī)范，仔細(xì)完成菇棚場(chǎng)地的消毒清理。同時(shí)，在雙孢蘑菇的發(fā)菌期和出菇期嚴(yán)格保障溫度、濕度、氣體環(huán)境等條件。在管理到位、嚴(yán)格把關(guān)的基礎(chǔ)上，再使用化學(xué)防治手段控制病蟲害的發(fā)生。特別是在出菇關(guān)鍵時(shí)期，必須密切關(guān)注子實(shí)體的生長(zhǎng)情況，適時(shí)噴施高效、低毒、無殘留的化學(xué)藥劑加以防治。

為了更加符合安全食品生產(chǎn)的要求，基于試驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合多方因素進(jìn)行綜合分析，建議使用5%噻霉酮懸浮劑，于雙孢蘑菇出菇間期（轉(zhuǎn)潮期）向菇床噴霧以防治細(xì)菌性褐斑病的發(fā)生，推薦使用的噻霉酮有效成分用量為 12.5 g·hm-2～17.5 g·hm-2。