李 騰，李 燕，郭 靜，江梅平，譚超莉，黃家亮

貴港市婦幼保健院遺傳實(shí)驗(yàn)室，廣西貴港 537100

珠蛋白生成障礙性貧血(原名地中海貧血，簡(jiǎn)稱(chēng)地貧)是人類(lèi)珠蛋白基因遺傳缺陷所致的慢性溶血性貧血，是由于珠蛋白基因的缺陷或點(diǎn)突變使血紅蛋白(Hb)中的珠蛋白肽鏈有一種或多種合成減少或不能合成，導(dǎo)致紅細(xì)胞壽命縮短的遺傳性溶血性貧血[1]。地貧是一組嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的遺傳性血液病，目前全世界尚缺乏有效的治療方法，阻斷患兒出生、減少遺傳病患的數(shù)量成為當(dāng)下最有效的預(yù)防措施。因此，研究地貧遺傳特點(diǎn)和分布情況對(duì)開(kāi)展有效的預(yù)防有重要作用。本研究收集廣西貴港地區(qū)38 625例來(lái)本院行地貧基因檢測(cè)的成年男女靜脈全血標(biāo)本，對(duì)貴港地區(qū)的常見(jiàn)地貧基因型分布情況和血液學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至2021年7月貴港地區(qū)38 625例來(lái)本院做地貧基因檢測(cè)的成年男女作為研究對(duì)象，其中男18 684例，女19 941例。

1.2儀器與試劑 BC6800血液分析儀及配套試劑；法國(guó)希比亞Sebia 2毛細(xì)管電泳儀；廈門(mén)至善Lab-Aid 824核酸提取儀及配套試劑；美國(guó)ABI9700 PCR擴(kuò)增儀；深圳益生堂生物有限公司缺失型α試劑；亞能生物技術(shù)有限公司非缺失型α、β試劑。

1.3方法

1.3.1血液常規(guī)檢測(cè)及Hb電泳 取2 mL 乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈全血進(jìn)行血常規(guī)及Hb電泳以檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.3.2常見(jiàn)的地貧基因檢測(cè) 取200 μL EDTA-K2抗凝靜脈全血進(jìn)行核酸提取，取提取后的DNA標(biāo)本4 μL于缺失型和非缺失型試劑中，采用ABI7900擴(kuò)增后，采用跨越斷裂點(diǎn)的PCR(Gap-PCR)結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)4種常見(jiàn)的缺失性基因( --SEA、-α3.7、-α4.2、--THAI)；采用單管多重PCR-反向斑點(diǎn)雜交(PCR-RDB)檢測(cè)3種α-地貧點(diǎn)突變基因(αCSα、αQSα、αWSα)和我國(guó)常見(jiàn)的17種β-地貧點(diǎn)突變基因(CD41-42、βE、IVS-Ⅱ-654、CD71-72、CD31、CD43、-32、CD27-28、-29、-30、CD14-15、IntM、IVS-Ⅰ-5、Cap、IVS-Ⅰ-1)檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1貴港地區(qū)α、β-地貧基因分布情況 貴港地區(qū)男女均以α-地貧基因?yàn)橹鳎?jiàn)表1。在α-地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、αCSα/αα，且均以 --SEA/αα為主，見(jiàn)表2。在β-地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是β41-42M/βN、β17M/βN、β28M/βN、β654M/βN，且均以β41-42M/βN為主，見(jiàn)表3。在αβ-復(fù)合型地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα合并β41-42M/βN、-α3.7/αα合并β41-42M/βN、 --SEA/αα合并β17M/βN、 --SEA/αα合并β28M/βN，且均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN為主，見(jiàn)表4。

表1 α、β-地貧基因檢出率

表2 男女α-地貧前6位基因型分布情況

表3 男女β-地貧前6位基因型分布情況

表4 男女αβ-復(fù)合型地貧前四位基因型分布情況

2.2α、β-地貧男女Hb、MCV、MCH、HbA2對(duì)比分析 在α-地貧中，靜止型和輕型男女的Hb、MCV、MCH差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，靜止型男女HbA2差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表5、6。中間型和重型只有男女Hb的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表7、8。在β-地貧中，β0雜合和β+雜合只有Hb男女血液學(xué)表型的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表9、10。

表5 α靜止型男女性血常規(guī)及電泳結(jié)果

表6 α輕型男女性血常規(guī)及電泳結(jié)果

表7 α中間型男女性血常規(guī)及電泳

表8 --SEA/αCSα重型男女性血常規(guī)及電泳結(jié)果

表9 β0雜合男女血常規(guī)及電泳結(jié)果

表10 β+雜合男女血常規(guī)及電泳結(jié)果

3 討 論

通過(guò)地貧基因攜帶率分析，本研究發(fā)現(xiàn)貴港地區(qū)α-地貧的檢出率(43.99%)遠(yuǎn)大于β-地貧檢出率(19.27%)，與廣西[2]、廣東[3]地區(qū)α-地貧陽(yáng)性率大于β-地貧陽(yáng)性率一致，而與何建維等[4]報(bào)道的重慶地區(qū)β-地貧陽(yáng)性率大于α-地貧陽(yáng)性率不一致。

從α-地貧基因類(lèi)型分析，廣西貴港地區(qū)男女α-地貧基因類(lèi)型主要為 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα，檢出率分別為25.14%、6.94%、3.57%占據(jù)α-地貧的前3位，且以 --SEA/αα為主。這與重慶[5]、貴陽(yáng)[6]、福建[7]地區(qū)的α-地貧基因構(gòu)成相同，同時(shí)與廣東[8]、廣西[2]地區(qū)同樣一致，但與莫亞虹等[9]報(bào)道海南地區(qū)育齡夫婦常見(jiàn)的α-地貧基因?yàn)?α3.7/αα、 --SEA/αα的結(jié)果不一致。這表明α-地貧基因存在地域性差異，但整體差異性不大。

從β-地貧基因類(lèi)型分析，貴港地區(qū)男女β-地貧基因類(lèi)型居前6位的分別為CD41-42(-TCTT)、CD17(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、βE，檢出率分別為9.66%、3.92%、2.52%、1.24%、0.88%、0.50%，這與國(guó)內(nèi)報(bào)道中國(guó)人最主要的6種β-地貧基因CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD17(A→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、CD26(G→A)不完全一致，但均以CD41-42(-TCTT)為主。與重慶[5]、貴陽(yáng)[6]地區(qū)的β-地貧基因突變類(lèi)型以CD17(A→T)為主，CD41-42(-TCTT)次之，姚莉琴等[10]報(bào)道的云南地區(qū)婚檢人群常見(jiàn)的β-地貧基因型為βE、CD17(A→T)、CD41-42(-TCTT)為主不同。與廣東[11]、廣西[12]β-地貧基因突變類(lèi)型一致，均以CD41-42(-TCTT)為主，CD17(A→T)次之，這表明β-地貧基因存在地域性差異,但在廣西、廣東地區(qū)差別不大。男性檢出率大于女性，一定程度上是因女性易受生育期[13]、月經(jīng)期[14]等導(dǎo)致血常規(guī)異常的影響，從而使篩查上出現(xiàn)假陽(yáng)性較多。

本研究通過(guò)比較分析α靜止型、α輕型、α中間型、α重型、β0雜合、β+雜合的男女Hb、MCV、MCH、HbA2，發(fā)現(xiàn)除了α靜止型、α輕型血液學(xué)表型Hb、MCV、MCH均存在較大差異外，其他幾項(xiàng)差異基本均表現(xiàn)在Hb上，考慮主要與不同類(lèi)型的地貧發(fā)生溶血時(shí)，Hb的分解產(chǎn)物刺激造血系統(tǒng)存在差異有關(guān)[15-16]。

綜上所述，貴港地區(qū)成年男女性人群α-地貧均以--SEA/αα為主，β-地貧均以β41-42M/βN為主，αβ復(fù)合型均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN為主，基因類(lèi)型具有多樣性，類(lèi)型分布具有區(qū)域性差異，且男性檢出率高于女性。α靜止型、α輕型男女間的血液學(xué)表型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而α中間型、α重型、β0雜合、β+雜合的血液學(xué)表型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因此，針對(duì)貴港地區(qū)男女地貧基因檢測(cè)制訂不同的血液學(xué)表型篩查標(biāo)準(zhǔn)，能有效地提高檢出率，減少資源浪費(fèi)。