宇汝勝 童鐘 段勝 王曉剛 鄭吉順 胡啟立

肝硬化是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)慢性攜帶者常見并發(fā)癥，也是增加病人罹患肝癌風險的重要原因[1-2]。前S1抗原(Pre-S1 antigen，PreS1Ag)結構域是肝細胞上的主要病毒附著位點，在HBV感染和宿主免疫反應中起關鍵作用，可作為治療靶點或開發(fā)HBV感染抑制劑、HBV疫苗、HBV感染的診斷工具[3-5]。此外，PreS1Ag可用于肝細胞癌發(fā)展和復發(fā)的預測[6]，證實PreS1Ag在HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生中的作用。本研究探討PreS1Ag/HBsAg比值是否可用于HBV相關肝硬化病人肝癌的發(fā)生風險。

對象與方法

一、對象

2019年3月～2021年4月我院收治HBV相關肝硬化肝癌病人61例(發(fā)生組)，未發(fā)生肝癌的HBV相關肝硬化病人61例(未發(fā)生組)[7]。納入標準：(1)HBV-DNA檢測存在HBV感染，且符合肝硬化相關診斷標準[8]；(2)肝硬化分期為代償期肝硬化(早期肝硬化，肝功正?；蜉p度異常，可有門靜脈高壓，但沒有腹水，肝性腦病或上消化道出血)[8]；(3)臨床資料完整。排除標準：合并其他型肝炎病毒感染；長期服用肝損性藥物或β、γ等射線暴露史者；因藥物性、代謝性及其他因素導致的肝硬化。發(fā)生組病人年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg高于未發(fā)生組，差異有統計學意義(P<0.05)，其余指標比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。本研究通過本院倫理委員會審核并批準。

表1 兩組病人傾向性匹配后基線資料比較

二、方法

1.一般資料收集：于入院時收集病人一般資料，包括年齡、性別、吸煙、喝酒、身高、體重、肝硬化病程、合并癥，PreS1Ag、HBsAg水平及生化指標。

2.PreS1Ag、HBsAg水平測量：抽取所有受試者5 ml空腹靜脈血，采用3.2%檸檬酸抗凝管抗凝，3 500 r/min離心5分鐘后，取上層液，置于-80 ℃醫(yī)用冰箱中保存，采用ARCHITECT?化學發(fā)光免疫分析技術，測量病人PreS1Ag、HBsAg水平及其PreS1Ag與HBsAg比值。以相對光單位測量化學發(fā)光反應結果，使用校準曲線測定標本中乙肝五項及PreS1Ag的濃度。

3.生化指標測量：取血清標本，使用全自動生化分析儀采用酶聯免疫吸附法測量病人ALT、AST、膽紅素、血清白蛋白、甲胎蛋白水平等。

4.HBV相關肝硬化病人肝癌評價標準：肝癌診斷標準參照《2017 APASL亞太臨床實踐指南：肝癌的管理》中“肝癌”的相關標準進行評估[7]。

5.質量控制：兩名專職人員嚴格按照納入、排除標準選擇研究對象；調查員經研究者統一培訓。采用統一標準進行資料收集、整理，并剔除無效數據；數據錄入采用雙人錄入、核對。

三、統計學方法

結 果

1.HBV相關肝硬化肝癌病人PreS1Ag、HBsAg水平及PreS1Ag/HBsAg比值：發(fā)生組病人PreS1Ag、HBsAg水平及PreS1Ag/HBsAg分別為(112.36±20.47)ng/ml、(3.67±0.29)log IU/ml和 (1.14±0.20)。

2.HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素的Logistic回歸分析：Logistic回歸分析顯示，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生的危險因素，見表2。

3.HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素預測效能分析:根據多因素Logistic回歸分析結果建立預測模型，結果顯示，HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg在預測HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價值，見圖1，表3。

表2 HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素的Logistic回歸分析

圖1 HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素預測效能的ROC曲線

表3 HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素預測效能分析

討論

HBsAg是臨床上判斷HBV在宿主體內復制并具有傳染性的重要血清學指標[9]。PreS1Ag可通過與牛磺膽酸鈉協同轉運多肽相互作用，介導病毒與宿主細胞受體相互作用以進入肝細胞，并在HBV病毒粒子的組裝和釋放中起關鍵作用[10]。Shouval等[11]研究認為，PreS1Ag結構域是治療性疫苗開發(fā)的理想免疫原候選物，也是識別非活動性HBV攜帶者的新工具，但與HBsAg的比值水平在早期預測HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生風險價值，尚需進一步驗證。鑒于此，本研究檢測HBV相關肝硬化測量病人PreS1Ag、HBsAg及其比值水平，并探討其對肝癌發(fā)生風險的影響。

本研究結果顯示，HBV相關肝硬化病人PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg比值升高。有分析認為，PreS是HBV的一個高度免疫原性區(qū)域，包含諸多B淋巴細胞和T淋巴細胞的表位，在病毒復制和進入肝細胞中具至關重要的作用，并反映了Dane粒子的數量。在HBV相關肝硬化病人中Dane顆粒數量增加，HBsAg水平增加，PreS1Ag也隨之增加，且增加幅度高于HBsAg，使PreS1Ag/HBsAg比值升高[12]。

本研究結果還觀察到年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生的危險因素，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg預測HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價值。先前研究也指出，HBV相關肝硬化肝癌發(fā)生率在不同年齡人群中具較大差異，40歲以下人群中較少見，但隨著年齡的增長呈線性增加，在70歲達到平臺期[13]。HBV相關肝硬化肝癌發(fā)生率在年齡中的差異機制尚不完全清楚。在HBsAg方面，經典Wnt通路的異常調節(jié)導致淋巴增強結合因子1(LEF-1)蛋白表達異常是HBV相關肝硬化肝癌發(fā)生的關鍵，免疫組織化學染色和實時 PCR 實驗研究發(fā)現，在表達HBsAg的肝細胞中Wnt信號通路失調，LEF-1上調。Tian等[14]發(fā)現，LEF-1的表達與肝癌組織中的HBsAg表達密切相關，在HBsAg陰性組織中的腫瘤細胞和瘤周細胞之間進行比較時，LEF-1蛋白表達無顯著差異。證實HBsAg 可能通過調節(jié)Wnt信號通路在HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生中發(fā)揮重要作用。PreS1Ag及PreS1Ag/HBsAg方面，PreS1Ag是成熟病毒粒子包膜的主要成分，參與了病毒-宿主細胞的相互作用過程。PreS1Ag增加可導致氧化應激和進一步的肝損傷，并通過激活血管內皮生長因子/Akt/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白、calpain切割和核因子κB通路，形成活性氧，增加肝癌發(fā)生風險[15]。

綜上所述，年齡、HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg是HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生危險因素，HBsAg、PreS1Ag、PreS1Ag/HBsAg預測HBV相關肝硬化病人肝癌發(fā)生均具臨床價值。本研究的不足之處在于HBsAg水平在HBV相關肝硬化病人疾病進展過程中具動態(tài)變化趨勢，但本研究僅測量了病人入組時的HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值，未動態(tài)測量病人HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值；同時本研究僅納入了代償期HBV相關肝硬化病人，研究結果可能存在偏倚，后期需動態(tài)測量病人HBsAg水平及其PreS1Ag/HBsAg比值，并納入失代償期HBV相關肝硬化病人，以對本研究結論做進一步驗證。