何子順，賈藝凡，李貴美

（1聊城市農業(yè)科學院，山東 聊城 252000；2江蘇省農業(yè)科學院植物保護研究所，南京 210000）

梨胴枯病又稱干枯病，是梨枝干的重要病害之一，與梨樹枝干上發(fā)生的干腐病癥狀相近，主要為害砂梨系統(tǒng)和白梨系統(tǒng)的品種。以為害枝干為主，發(fā)病嚴重時病斑能延伸至整個枝干，造成樹皮壞死、枝干死亡，樹勢衰弱，甚至整株死亡，給生產造成很大損失。該病最早發(fā)現(xiàn)于日本梨區(qū)，主要表現(xiàn)在砂梨上[1]，隨著引種傳入我國。我國梨產區(qū)發(fā)生普遍，云南、浙江、江蘇、遼寧、吉林、黑龍江等省都有分布[2]。2000年以后，我國多個梨產區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)該病，并引起生產者的重視。當前聊城梨產區(qū)尚未見該病報道。筆者先后在聊城的茌平、東阿、高唐和冠縣發(fā)現(xiàn)疑似胴枯病癥狀，經(jīng)鑒定確定為是。為準確鑒別該病、做好防控，綜合前人研究的結果，提出鑒別方法和防控措施。

1 病原菌鑒定

1.1 病原材料

病原材料樣品取自山東省高唐縣三十里鋪鎮(zhèn)后辛村 梨 園，園 面 積4.70 hm2，樹 齡8年，感 病 株 率51.20%。樣品為1年生發(fā)病梨樹枝條，于2021年12月21日從病株剪下，共50條，及時通過快遞發(fā)往江蘇省農業(yè)科學院植物保護研究所，進行病原菌鑒定。

1.2 病原菌分離

采用組織分離法。用已滅菌的手術刀在病健交界處切取少量組織；對所取的組織用75%酒精消毒，再用滅菌水洗2次；將消毒后的組織置于新鮮的PDA平板上，25℃培養(yǎng)2 d；待長出真菌，從邊緣打孔，將菌絲塊移植到新的PDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)3d。

1.3 病原菌鑒定

分離純化后，分離病原物的鑒定采用分子鑒定方法。采用擴增其內部轉錄間隔區(qū)(ITS)序列，在測序后進行BLAST分析。

PCR擴增。選用20 μL體系，包括dd H2O 8.5 μL，Mix 10 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5 μL，模板0.5 μL。PCR擴增程序為:94℃預變性5 min，94℃變性30 s，53℃褪火30 s，72℃延伸40 s，30個循環(huán)，最后72℃延伸10 min。

擴增產物用1%瓊脂糖凝膠，TBE為緩沖液，140 mv，上樣5μL電泳檢測。電泳條帶亮，大小在750 bp。

將PCR擴增產物送到擎科公司測序，將得到的序列在NCBI上進行Blastn比對。

1.4 鑒定結果

枝干病害樣品分離得到5株真菌:球黑孢菌(Nigrospora sphaerica)、間座殼屬(Diaporthesp.)、蕓薹生 鏈 格 孢(Alternaria brassicicola)、 密 實 鏈 格 孢(Alternaria compacta)、鏈格孢(Alternariasp.)，最終確定該病為梨胴枯病。通常認為，梨胴枯病致病真菌是福士擬莖點霉(Phomopsis fukushiiTanaka et Endo)，屬半知菌亞門球殼孢目擬莖點菌屬真菌，有性態(tài)屬于間座殼屬(Diaporthe)。但郭雅雙研究指出，我國梨產區(qū)梨胴枯病的病原菌種類具有多樣性，共檢測到19種，其中榆樹間座殼菌(Diaporthe eres)引起的梨胴枯病分布廣[1](圖1)。

圖1 病枝上檢測鑒定病源菌

2 病害發(fā)生情況

2.1 為害情況

該病在我國發(fā)現(xiàn)于20世紀80年代，發(fā)病范圍廣，但沒有引起足夠的重視。1988年吉林省延吉梨樹胴枯病發(fā)病株率達16.9%[3]；1997年浙江桐廬的‘黃花’‘新世紀’梨發(fā)病株率5%~10%，重者發(fā)病株率達20%[4]；2008年河北省泊頭重點產梨鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)病株率平均為13.6%[5]；2011年以來梨胴枯病嚴重影響了甘肅武威梨產業(yè)的發(fā)展[6]；2013年在江西贛東的梨園病株率達到2%~5%[7]。2021年，筆者在聊城的茌平、東阿、高唐和冠縣發(fā)現(xiàn)，梨胴枯病的感病品種以‘秋月’為主。對發(fā)生該病的縣(區(qū))各調查1個果園。由表1看出，高唐縣后辛村8年生樹發(fā)病株率51.20%，冠縣韓路村1年生樹發(fā)病株率32.00%，東阿縣北崔村2年生樹發(fā)病株率15.00%，茌平區(qū)耿店村3年生樹發(fā)病株率12.00%。由此可見，該病在我國梨產區(qū)呈現(xiàn)蔓延態(tài)勢。

表1 梨胴枯病發(fā)病情況調查

2.2 發(fā)病癥狀

梨胴枯病為害部位，多數(shù)文獻顯示的是枝條，且以一二年生枝為主。1988年Uecker[8]研究指出，梨胴枯病菌可以導致‘豐水’梨的芽死亡。在聊城，梨胴枯病明顯的特征是為害花芽和一二年生枝，受害花芽不能正常開花，甚至死亡；受害枝形成病斑，枝勢削弱，甚至枯死。受害花芽外觀癥狀是休眠期芽的鱗片散開，受害較輕時，花芽鱗片干死，內部花原基存活，但不能正常開花；受害重時，入冬后至花芽萌動期用手輕輕一觸，花芽就脫落，嚴重影響梨樹產量和質量。受害枝的表面起初形成圓形病斑，隨后慢慢擴大成橢圓形、方形等，病斑呈褐色或紅褐色，最后病部下陷，病健部交界處出現(xiàn)裂縫，有的樹皮卷翹；當病斑繼續(xù)擴展，病部超過枝條周長1/2時，病部以上的部分就會枯死，遇大風易在病部折斷。

2.3 傳播源分析

通常認為，梨胴枯病近距離傳播是靠風雨，遠距離傳播是靠苗木或種條調運。在筆者調查的4個梨園中，冠縣梨園的梨苗來源于調查的高唐梨園，可以認為，冠縣梨園的病源來源于高唐的梨園。茌平梨園和高唐梨園的苗木都來源于河北省衡水市深州，東阿梨園的梨苗木來源于河北省衡水市安平。由此推斷，河北衡水生產的‘秋月’梨苗木存有梨胴枯病的風險較高。

2.4 同梨干腐病癥狀的比較

梨胴枯病和梨干腐病為害梨枝的癥狀相似，準確區(qū)別兩種病害是做好防控的前提。二者之間的共同特點是病部褐色、壞死、凹陷、有龜裂，表面有黑色小粒點。不同點:梨胴枯病以一二年生枝為主，且擴展慢，梨干腐病以多年生枝為主，且擴展快；梨胴枯病病斑多呈橢圓形或方形，褐色至紅褐色，病皮常卷起，梨干腐病的病斑多呈梭形，褐色至黑褐色，病皮不卷起；梨胴枯病涌出的絲狀物顏色為白色，而干腐病的絲狀物顏色為淡黃色(圖2)。

圖2 梨胴枯病和梨干腐病為害枝的癥狀

3 發(fā)生規(guī)律

3.1 侵染循環(huán)

梨胴枯病以菌絲體及分生孢子器在被害枝皮內越冬。次年春季氣溫適合時，病菌在遇雨水后涌出分生孢子，引起初次侵染，主要從傷口或新芽侵入，借風雨進行短距離傳播，靠苗木或種條調運實現(xiàn)遠距離傳播。病組織內的菌絲體在適宜條件下不斷擴展，形成危害。

3.2 發(fā)病條件

氣溫 春天氣溫達15℃時病菌開始萌發(fā)，5月上中旬開始擴展，6月病斑擴展加快。在一年中有春秋兩個快速擴展期，夏季溫度高時病斑擴展減緩。該病擴展快慢、出現(xiàn)的季節(jié)，在我國不同梨產區(qū)有差異。黃窈軍等[4]指出，在浙江省桐廬病斑于3―4月擴展最快，4―5月逐漸停止擴展。王煥英等[5]指出，在河北省泊頭病斑于5―6月擴展較快，當年秋季即可形成大型病灶斑塊。黃冬華等[7]指出，在江西省贛東病斑于3月下旬開始擴展，4―5月擴展最快。在武威發(fā)病時期為6―8月。何彩等[10]研究指出，梨胴枯病菌在PDA培養(yǎng)基中表現(xiàn)為:在5℃和40℃條件下菌落不生長，在10℃和35℃下生長速度很慢，適宜生長的溫度是25~28℃。高溫高濕有利于發(fā)病。

栽培條件 病菌有潛伏侵染特性，發(fā)病程度與樹勢密切相關，樹勢弱發(fā)病重；土壤瘠薄、肥水供應不合理、化肥施入不均衡、負載過量的梨園發(fā)病重；修剪過重、傷口過多的梨樹發(fā)病重。趙成范等[3]指出，樹體是否發(fā)病與幼樹主干凍害密切相關。

品種 在日本梨中，‘幸水’易感病，‘豐水’‘新水’次之，‘長十郎’‘二十世紀’等較抗病[11]。在我國不同梨產區(qū)的不同品種發(fā)病輕重也有差異。趙成范等[3]指出，吉林省延吉主要發(fā)生在‘蘋果梨’上；黃窈軍等[4]指出，在浙江省桐廬‘黃花’梨比‘新世紀’梨發(fā)病重；黃冬華等[7]指出，在江西省贛東‘翠玉’‘初夏綠’‘翠冠’發(fā)病重，‘黃花’‘清香’‘晚秀’發(fā)病輕或不發(fā)病。

4 防控措施

4.1 做好檢疫

在進行苗木和種條調運時須經(jīng)過嚴格檢驗，發(fā)現(xiàn)帶病苗木和種條禁止運出，并及時銷毀。

4.2 加強梨園管理

施肥應做到氮、磷、鉀肥比例適當。增加有機肥施入量，以動物糞便作有機肥時要經(jīng)過腐熟。加強土壤水分管理，避免發(fā)生旱、澇災害。適時疏花疏果，達到合理負載。結合冬季修剪剪除病枝，并及時帶出園外銷毀。冬季修剪造成的大傷口(直徑在2cm以上)要及時涂抹殺菌劑。

4.3 化學藥劑防控

萌芽前用藥 萌芽前7~10 d樹上噴施5°Be石硫合劑1次，枝干全噴。仔細查找病斑，用刀在病斑處劃道，深達木質部，然后涂藥，可選腐殖酸銅原液、9281藥劑5倍液或5°Be石硫合劑。

生長期用藥 幼果套袋前、麥收前和采果后樹上各噴1次殺菌劑，枝葉全噴，注意交替用藥。可選擇50%多菌靈可濕性粉劑、70%甲基托布津可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑，一般使用濃度是700~800倍液。40%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑3 000~4 000倍、430 g/L戊唑醇懸浮劑3 000~4 000倍、40%氟硅唑乳油8000~10000倍液。