◎ 吳定芳，戴佩珍，何茫茫

（瑞安市食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，浙江 瑞安 325204）

茶，是中華民族的舉國(guó)之飲，發(fā)于神農(nóng)，聞?dòng)隰斨芄?，興于唐朝，盛于宋代。茶葉具有一定的保健功效，如興奮提神、利尿、止痢、預(yù)防便秘、防齲、助消化、明目、抗衰老、降血壓、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血糖、抗癌和抗突變作用等[1]。飲茶已經(jīng)成為人們生活的一部分，除了水以外，茶是世界上消費(fèi)最多的飲料之一。中國(guó)名茶種類繁多，其中像綠茶、紅茶和普洱茶等是最受國(guó)內(nèi)市場(chǎng)歡迎的茶葉品類[2]。然而，近年來頻頻流出普洱茶等經(jīng)過微生物發(fā)酵的茶葉存在真菌毒素污染的風(fēng)險(xiǎn)，讓越來越多的飲茶者開始關(guān)注茶葉中真菌毒素污染的風(fēng)險(xiǎn)情況。

真菌毒素是某些真菌在特定條件下產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，不僅污染食品引起飲茶者食物中毒，有些真菌毒素還具有致癌、致畸、致突變以及引起中毒性腎損傷、干細(xì)胞毒性、免疫抑制和生殖紊亂等慢性毒害作用，對(duì)健康造成極大威脅[3-4]。目前發(fā)現(xiàn)的真菌毒素有400多種，包括黃曲霉毒素B族、黃曲霉毒素M族、黃曲霉毒素G族、伏馬菌素、赭曲霉素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、T2毒素和桔青霉素[5-6]等，其中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等具有毒性較強(qiáng)、污染頻率較高的特點(diǎn)[6]。

近年來，隨著各種前處理技術(shù)的不斷發(fā)展，一些新興的材料被不斷開發(fā)，針對(duì)性更強(qiáng)、操作上更簡(jiǎn)便的樣品前處理技術(shù)及檢測(cè)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于食品、茶葉、中藥和飼料中真菌毒素的研究[7-11]。

1 真菌毒素前處理技術(shù)

由于經(jīng)過粗略的提取，大部分目標(biāo)物和雜質(zhì)會(huì)共存于提取液中，這會(huì)干擾目標(biāo)物的檢測(cè)，也會(huì)對(duì)檢測(cè)設(shè)備造成污染和損害，因此為減少雜質(zhì)的干擾及對(duì)檢測(cè)設(shè)備的損害，前處理技術(shù)的完善和改進(jìn)在檢測(cè)中就顯得尤為重要。近年來，隨著一些新興的理念和新興的材料被不斷開發(fā)和應(yīng)用，出現(xiàn)了許多高效快速的樣品前處理方法。目前已被報(bào)道或取得廣泛應(yīng)用的前處理技術(shù)不斷被引入真菌毒素的檢測(cè)中，其中主要有固相萃取技術(shù)（Solid Phase Extraction，SPE）、QuEChERS技術(shù)、凝膠滲透色譜凈化等[8,11-12]。

1.1 固相萃取技術(shù)

固相萃取技術(shù)是近年來發(fā)展較好，應(yīng)用較多的一種樣品前處理技術(shù)，一般包括3個(gè)步驟，即活化、上樣、洗脫，將提取液通過柱子后，提取液中的目標(biāo)物被保留在柱中，通過選擇合適的溶劑把保留在柱子中的目標(biāo)物洗脫下來，從而達(dá)到分離、凈化的目的[13-14]。 與傳統(tǒng)的液-液萃取相比，SPE技術(shù)具有材料選擇性多、針對(duì)性強(qiáng)、回收率高、溶劑消耗少、操作簡(jiǎn)便和更具環(huán)保性等優(yōu)點(diǎn)，這些優(yōu)點(diǎn)使得SPE技術(shù)廣泛應(yīng)用于真菌毒素的檢測(cè)[15]。在真菌毒素檢測(cè)的前處理中，用到最多的是多功能凈化柱和免疫親和柱等。曾濤等[16]利用多功能凈化柱對(duì)茶葉中黃曲霉毒素的碘柱后衍生化和光化學(xué)柱后衍生化-高效液相色譜法進(jìn)行比較。劉妍等[17]利用多功能凈化柱建立了5種真菌毒素簡(jiǎn)單、快速超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。崔悅等[18]利用免疫親和柱凈化建立了光化學(xué)柱后衍生-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中4種黃 曲霉毒素。

1.2 QuEChERS技術(shù)

QuEChERS是Quickly、Easy、Cheap、Effective、 Rugged和Safe這幾個(gè)英文單詞首字母的縮寫，該技術(shù)是以快速、簡(jiǎn)便、低廉、有效、可靠和安全等特點(diǎn)著稱的。QuEChERS技術(shù)是在固相萃取技術(shù)和基質(zhì)分散固相萃取技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，主要依靠加在基質(zhì)里的固相吸附劑對(duì)非目標(biāo)化合物的吸附而達(dá)到凈化的目的。目前該技術(shù)被廣泛應(yīng)用在茶葉中真菌毒素的檢測(cè)中。劉妍等[19]利用QuEChERS凈化，成功建立發(fā)酵黑茶中10種真菌毒素簡(jiǎn)單、快速、高靈敏度超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。

1.3 凝膠滲透色譜凈化

凝膠滲透色譜凈化是一種發(fā)展較早的前處理技術(shù)，其原理是根據(jù)凝膠的化學(xué)惰性即不具有吸附、分配和離子交換作用，從而在試樣通過時(shí)根據(jù)分子大小不同、洗脫速度不同達(dá)到去除樣品中的大分子物質(zhì)的目的。該法具有自動(dòng)化程度高、凈化效果好、回收率高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，但應(yīng)用性不是很廣。目前該技術(shù)應(yīng)用在茶葉中真菌毒素檢測(cè)的報(bào)道較少，可能跟茶葉中復(fù)雜的基質(zhì)有關(guān)，但應(yīng)用在食品中真菌毒素檢測(cè)的報(bào)道較多，如劉家陽(yáng)等[20]通過凝膠滲透色譜凈化成功建立了玉米粉中10種真菌毒素簡(jiǎn)單安全、成本低、快速準(zhǔn)確的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 檢測(cè)方法。

2 檢測(cè)方法

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展、檢測(cè)設(shè)備的更新迭代以及檢測(cè)人員素質(zhì)的不斷提高，真菌毒素的檢測(cè)技術(shù)也呈現(xiàn)出多元化的趨勢(shì)。目前常用的真菌毒素檢測(cè)方法有薄層色譜法[21]、氣相色譜法[22]、液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法和酶聯(lián)免疫法[23]等。

2.1 薄層色譜法

薄層色譜法是根據(jù)真菌毒素大多水溶能力差的特點(diǎn)，用有機(jī)溶劑提取后使用展開劑展開，再用紫外燈或熒光燈觀察。該法對(duì)樣品預(yù)處理要求低，無需特殊儀器，實(shí)驗(yàn)成本低廉，是快速檢測(cè)和定性分析的重要手段，但檢測(cè)精度有待加強(qiáng)，而且對(duì)檢測(cè)人員的檢測(cè)素質(zhì)要求較高。

2.2 氣相色譜法

氣相色譜法是以氣體為流動(dòng)相，使用電子捕獲檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器來檢測(cè)真菌毒素，但存在真菌毒素高溫下不易氣化且較難找到衍生化試劑的問題，因而限制了該法的應(yīng)用，目前該方法很少被用于茶葉中真菌毒素的檢測(cè)。

2.3 液相色譜法

高效液相色譜法配紫外檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器是檢測(cè)真菌毒素的常用方法，該法適用范圍廣，可對(duì)不易揮發(fā)不易氣化的真菌毒素進(jìn)行穩(wěn)定檢測(cè)。付朝暉等[24]利用超高效液相色譜法快速測(cè)定發(fā)酵茶葉中的4種黃曲霉毒素。崔悅等[18]利用高效液相色譜-熒光法同時(shí)測(cè)定茶葉中4種黃曲霉毒素。

2.4 液質(zhì)聯(lián)用法

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是以噴霧離子源和大氣壓化學(xué)電離源等接口技術(shù)將液相色譜和質(zhì)譜串聯(lián)起來作為整體使用的檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)具有液相色譜和質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，一些在氣相色譜質(zhì)譜儀不能分析的熱不穩(wěn)定化合物、極性較大的化合物以及相對(duì)分子量較大的化合物可使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)范圍廣、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，是一種高效率、高可靠性的分析技術(shù)。王鷺等[25]建立了液質(zhì)聯(lián)用法同時(shí)檢測(cè)普洱茶、紅茶、綠茶中的8種真菌毒素，并且模擬實(shí)際的飲茶方法，準(zhǔn)確地檢測(cè)茶葉中進(jìn)入茶湯的真菌毒素。胡琳等[26]建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定普洱茶中16種真菌毒素。將QuEChERS前處理技術(shù)與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合起來，越來越多被應(yīng)用于茶葉中多種真菌毒素的測(cè)定，擴(kuò)大了真菌毒素檢測(cè)的范圍。劉文靜等[27]將QuEChERS技術(shù)和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合起來，應(yīng)用于陳年老茶中16種真菌毒素殘留的檢測(cè)，大大提高了真菌毒素的檢測(cè)速度，擴(kuò)大了真菌毒素檢測(cè)的種類。

3 結(jié)語

總體而言，茶葉中真菌毒素的研究越來越趨向于液質(zhì)聯(lián)用法，并與QuEChERS前處理技術(shù)結(jié)合起來。然而，該設(shè)備較昂貴，一些基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)未必都能配備。因此，基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)在不具備液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀時(shí)，可以采用SPE前處理技術(shù)和液相色譜法開發(fā)茶葉中多種真菌毒素的檢測(cè)方法。