孫美超 曹 梅* 王興強 錢詩悅 盧雪旎 李 永

（1江蘇海洋大學(xué)海洋科學(xué)與水產(chǎn)學(xué)院，江蘇連云港 222005；2連云港僑海漁業(yè)科技有限公司，江蘇連云港 222045）

凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）因其生長迅速、抗病能力強、經(jīng)濟效益高，已成為全球主要的對蝦養(yǎng)殖品種之一[1]。自引入中國，在經(jīng)過4年的育苗后，于1992年突破了育苗關(guān)，并在越來越多的淡水地區(qū)養(yǎng)殖成功，由此也帶來了巨大的經(jīng)濟效益[2]。近年來，隨著凡納濱對蝦（簡稱對蝦）養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，集約化程度越來越高，隨之而來的一些負(fù)面問題也逐漸暴露出來了，比如養(yǎng)殖密度大、水質(zhì)惡化、病害嚴(yán)重等。在凡納濱對蝦的病害中，由病毒所引起的死亡最為嚴(yán)重，給養(yǎng)殖戶造成了重大經(jīng)濟損失。目前，對蝦病毒一共發(fā)現(xiàn)有20多種，其中對對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成危害比較嚴(yán)重的主要是白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus，WSSV）、傳染性皮下及造血組織壞死病毒（infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV）、蝦血細胞虹彩病毒（shrimp henocyte iridescent virus，SHIV），所引起的病毒性疾病已在全國各地廣泛流行，并已成為制約凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一個重大瓶頸[3]。

1 凡納濱對蝦病毒病概況

1.1 白斑綜合征病毒

凡納濱對蝦感染白斑綜合征的病原體為白斑桿狀病毒，對宿主具有泛嗜性[4]。結(jié)締組織、造血組織細胞和鰓上皮細胞是WSSV感染的主要靶細胞[5]。凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV最為典型的癥狀就是位于對蝦頭胸甲的觸角區(qū)內(nèi)會出現(xiàn)白斑，故也稱白斑病，頭胸甲會比較容易剝離開。凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV之后會出現(xiàn)行動緩慢、伏于池邊不動等現(xiàn)象，并在較短時間內(nèi)就會死亡[6]。經(jīng)鏡檢發(fā)現(xiàn)在對蝦的頭胸甲上出現(xiàn)針尖狀的白色斑點，出現(xiàn)的數(shù)量較少因而一般不易被觀察到，此時病蝦胃內(nèi)尚存有少量食物。發(fā)病初期主要表現(xiàn)為點狀白斑，隨之逐漸擴大，中后期達到發(fā)病的高潮期，頭胸甲、腹甲易脫落，出現(xiàn)黑白相間的斑點，肝胰腺開始腫大，這時對蝦的發(fā)病率以及死亡率都處在一個較高的水平。到了后期可檢測到對蝦殘胃或者空胃的現(xiàn)象，并且伴隨著肝胰腺的腫脹和模糊，表現(xiàn)為游動緩慢無力。王博雅等[7]研究也充分說明了感染白斑綜合征的對蝦表現(xiàn)為甲殼比較粗糙，頭胸甲上有不規(guī)則的白色斑塊，并且病蝦出現(xiàn)了離群、游動緩慢、體色發(fā)暗以及空腸空胃等現(xiàn)象。

1.2 傳染性皮下及造血組織壞死病毒

傳染性皮下及造血組織壞死病毒，是現(xiàn)在所有已知對蝦病毒粒子中最小的病毒，大小僅有22 nm，屬于無囊膜的二十面體[8]。1981年該病毒首次被發(fā)現(xiàn)于美國夏威夷地區(qū)所養(yǎng)殖的細角濱對蝦（Litopenaeus stylirostris）體內(nèi)。在我國2001年首次被報道，并成為嚴(yán)重危害我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)的病毒之一[9]。IHHNV一般對細角濱對蝦的致病性比較強，死亡率高達90%[10]；對凡納濱對蝦的致死率不明顯。感染此病毒的凡納濱對蝦會患傳染性皮下及造血組織壞死病，也有人將其稱為慢性矮小殘缺綜合征（runt-deformity syndrome，RDS）。傳播方式主要可分為垂直傳播以及水平傳播2種[11]。在感染了IHHNV但存活后的凡納濱對蝦會終生攜帶IHHNV，并可以通過受精卵等將此病毒傳播給下一代的仔蝦。除此之外也可通過水平傳播的方式將IHHNV傳播給下一代仔蝦或者其他種群。逄雪梅等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在蝦貝混養(yǎng)模式下，IHHNV可由蝦傳染給泥蚶，而由泥蚶傳染給蝦的IHHNV量卻很少。IHHNV主要感染的是凡納濱對蝦的鰓、前后腸上皮細胞以及神經(jīng)節(jié)等外胚層組織，以及造血組織、性腺以及結(jié)締組織等。其可在寄主的細胞核內(nèi)形成一定的包涵體，尤其是對幼蝦危害較大，在病蝦的觸角、額劍及頭胸部等位置可觀察到不同程度大小的病變。感染IHHNV患病后的幼蝦則主要表現(xiàn)為生長緩慢、畸形、產(chǎn)量降低，觸角和額劍彎曲和粗糙等[8，13]。

1.3 蝦血虹彩病毒

2017年中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所從來自浙江省的一批發(fā)病死亡的凡納濱對蝦的樣本中首次分離出一種新的虹彩病毒，并將其命名為蝦血細胞虹彩病毒，屬于虹彩病毒科下的一個新屬[14]。近年來，虹彩病毒陸陸續(xù)續(xù)在魚類以及紅螯螯蝦等水產(chǎn)動物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，具有明顯的跨越物種傳播的趨勢[15-16]。感染SHIV之后，凡納濱對蝦主要表現(xiàn)為空腸空胃、肝胰腺發(fā)白以及甲殼軟化等現(xiàn)象，并且在部分個體的表皮上伴有輕微的紅斑，瀕死的凡納濱對蝦游泳能力喪失，并最終沉入水底，脊尾白蝦感染SHIV后癥狀也與此相似[17-18]。有相關(guān)的組織學(xué)檢測研究表明，SHIV主要是感染對蝦的步足、鰓、肝胰腺和造血組織[19]。邱亮[20]曾對采集于浙江省一個對蝦養(yǎng)殖場病蝦的頭胸部制作了組織病理切片，發(fā)現(xiàn)造血器官、附肢和鰓絲等部位出現(xiàn)核固縮現(xiàn)象，并通過透射電鏡觀察到了病蝦組織中存在大量的大顆粒二十面體病毒，病蝦的血液淋巴細胞中有大量的病毒游離于組織的血竇中，經(jīng)人工感染發(fā)現(xiàn)此病毒可使健康的對蝦在15 d后100%死亡。

2 凡納濱對蝦病毒病防治措施

2.1 清塘消毒

對凡納濱對蝦的養(yǎng)殖環(huán)境進行徹底消毒，有利于消滅病原微生物，能夠有效阻止早期病原所引發(fā)的疾病[21]。在對蝦養(yǎng)殖比較集中的區(qū)域，排放水的過程中有很多養(yǎng)殖戶直接將沒有經(jīng)過處理的水源或只是簡單加了一層濾網(wǎng)過濾的水源引入到池塘內(nèi)替換舊水，亦或是將含有大量細菌、病毒等沒有經(jīng)過相關(guān)處理的廢水直接排放到自然水域和河流溝渠中。這樣做不僅有使凡納濱對蝦感染病毒的風(fēng)險，同時也存在很大的安全隱患。自然水體的自凈能力有一定的限度，通常在自然水體中往往含有各種各樣的病原微生物，這其中就包括了WSSV。對此可以使用漂白粉、強氯精、生石灰、二氧化硫等藥物進行消毒殺菌。綜合成本及效果考量，清塘消毒的最佳藥物是生石灰。清塘方法通常有2種：一是干法清塘，即排干對蝦池塘中的水，使用生石灰150～225 g/m2消毒；二是帶水清塘，即平均水深為1 m的池塘，使用生石灰180～270 g/m2消毒。氣溫比較低時可適當(dāng)加大生石灰的使用量。

2.2 優(yōu)選種苗

一方面，要加快凡納濱對蝦種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的制定，對現(xiàn)有對蝦苗種場進行檢測，對不符合相關(guān)檢測要求的苗種場一律停業(yè)整頓，強化對種質(zhì)的提純和復(fù)壯，對蝦苗種的生產(chǎn)全過程要嚴(yán)格參照HACCP體系規(guī)范化管理，政府部門應(yīng)對苗種生產(chǎn)過程進行有效監(jiān)督和管理。另一方面，在投放蝦苗時，不要隨意向池塘中投放來源不明的凡納濱對蝦苗以及一些小型育苗場所生產(chǎn)的二代苗，必須選擇具有凡納濱對蝦苗種生產(chǎn)資質(zhì)的養(yǎng)殖場生產(chǎn)的種苗，并且必須是經(jīng)過檢疫不帶病毒的SPF仔一代苗以及仔二代良種蝦苗。不同的蝦苗抵抗病毒感染的能力也不同，因而養(yǎng)殖過程中必須從源頭上切斷病毒傳播的來源。凡納濱對蝦應(yīng)選擇體表干凈、附肢完整、反應(yīng)快速、腸道飽滿、游泳時具有明顯方向性、大小規(guī)格一致、蝦體透明度大、規(guī)格在1.2 cm以上的健康蝦苗。

2.3 建立健全親蝦篩選、蝦苗檢疫方法

目前，針對病毒性疾病尚無有效的治療方法，在預(yù)防措施上主要采用的是避免接觸感染，從源頭上切斷病毒感染發(fā)生病毒性疾病的可能性，而這又大大依賴于病毒傳染源的快速檢測[22]。對病毒的檢測也做了很多相關(guān)的研究，鄭曉葉等[23]使用熒光檢測方法對白斑綜合征病毒、傳染性皮下及造血器官壞死病毒和蝦血細胞虹彩病毒進行了檢測，發(fā)現(xiàn)只有SHIV發(fā)生特異性擴增，并建立了一種適用于SHIV現(xiàn)場檢測和疫情監(jiān)控的具有特異性、靈敏度和準(zhǔn)確度高的熒光SHIV-LAMP檢測方法。尹偉力等[24]則運用重組酶聚合酶擴增技術(shù)同樣對白斑綜合征病毒、傳染性皮下及造血器官壞死病毒和蝦血細胞虹彩病毒進行檢測，發(fā)現(xiàn)了只有蝦血細胞虹彩病毒出現(xiàn)了明顯的特異性條帶，且與普通PCR方法相比靈敏度更高、檢測時間更短，并由此建立了蝦血細胞虹彩病毒的重組酶聚合酶擴增技術(shù)。李楠英等[25]建立了3種病原（WSSV、EHP和DIV1）同步定量PCR檢測技術(shù)。宋居易等[26]發(fā)明了一種可同時快速可視化檢測對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）和對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒（IHHNV）的試劑盒（生物芯片法）。因此，建立一種快速而準(zhǔn)確的病毒檢測方法對親蝦進行篩選、對蝦苗進行檢疫顯得尤為重要，對有效預(yù)防和控制病毒所引起的疾病有著重要的意義。

2.4 維持良好的水體環(huán)境

凡納濱對蝦的生長以及健康等狀況與水質(zhì)存在著非常密切的關(guān)系。以WSSV為例，方金龍等[27-28]設(shè)計了氨氮脅迫試驗，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，感染了WSSV的凡納濱對蝦，氨氮脅迫組的凡納濱對蝦死亡率要顯著高于無脅迫組；亞硝基氮脅迫組的凡納濱對蝦死亡率也顯著高于無脅迫組。方金龍[29]研究發(fā)現(xiàn)，在氨氮和亞硝基氮共同脅迫作用下，共同脅迫組凡納濱對蝦的死亡率要高于單獨脅迫組。氨氮和亞硝基氮共同脅迫下會加快WSSV在凡納濱對蝦體內(nèi)增殖速度，脅迫致使凡納濱對蝦免疫相關(guān)酶活性降低以及抗病原感染能力下降，最終導(dǎo)致凡納濱對蝦出現(xiàn)更高的死亡率[30]。陳勇貴等[31]研究表明，感染W(wǎng)SSV后的凡納濱對蝦平均存活時間與水體pH值、氨氮以及亞硝酸鹽氮等理化因子之間存在著極顯著的關(guān)系，但是其與鹽度的相關(guān)性并沒有達到顯著水平。除此之外，還有一些學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，凡是攜帶了WSSV的凡納濱對蝦對亞硝基氮的抵抗能力都有所下降，而水體中亞硝基氮含量的升高又為病毒在凡納濱對蝦體內(nèi)的增殖提供了有利的條件，因而亞硝基氮因而也是比較重要的水體環(huán)境脅迫因子之一[32]。綜上所述，為維持一個健康的水體環(huán)境，必須嚴(yán)格遵循“四定”原則，定期對蝦池的水進行檢測，若水體pH值偏高時可加入一些特殊的菌類降低pH值，當(dāng)氨氮、亞硝酸鹽等含量超標(biāo)時也可加入一些特殊的菌類進行降解，以保持水體環(huán)境及各項指標(biāo)處于相對良好的狀態(tài)下，可以有效減緩病毒在凡納濱對蝦體內(nèi)的增殖速度，同時也可以大大降低凡納濱對蝦暴發(fā)疾病的可能性。

2.5 做好餌料管理工作

餌料投喂必須要有規(guī)定的時間間隔，投喂的地點和方式不要隨便更改，要及時清除殘留的飼料，避免污染對蝦生存環(huán)境。在凡納濱對蝦培育環(huán)節(jié)通常會使用到一些生物餌料，例如豐年蟲、輪蟲、橈足類等。研究發(fā)現(xiàn)，橈足類可能攜帶有WSSV，而且在生產(chǎn)過程中也檢測到商品豐年蟲以及橈足類的休眠卵攜帶有WSSV，所以一定要在生產(chǎn)實踐過程中加強生物餌料的WSSV檢測工作[33]。凡納濱對蝦在白天的攝食量較小，而在晚上的攝食量占到總攝食量的70%左右，因而要根據(jù)其飲食習(xí)慣進行投喂，白天少、晚上多，以免造成飼料浪費和水質(zhì)敗壞。餌料的合理投放可以對凡納濱對蝦的病害發(fā)生起到一定的預(yù)防作用，餌料的投放應(yīng)秉持“養(yǎng)大于防、防大于治”的飼養(yǎng)原則。飼料中應(yīng)當(dāng)定期適量添加免疫多糖、有益微生物等一些可以提高凡納濱對蝦抗病力和免疫力的綠色安全制劑，定期用乳酸菌、酵母菌等一些有益微生物制劑拌料投喂，優(yōu)化對蝦消化道菌群。在凡納濱對蝦投放餌料過程中應(yīng)該仔細觀察對蝦的攝食情況，如果對蝦的攝食突然變得生猛，則很有可能是一些病害暴發(fā)的前兆，此時應(yīng)及時減少投喂量并采取適當(dāng)?shù)拇胧?，比如可以在餌料中加入適量的板藍根、大黃、VA、VC、VE等藥物，可以對病害的發(fā)生起到一個很好的預(yù)防作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加橄欖葉提取物可用于對蝦白斑綜合征的防治[34]。生物發(fā)酵飼料目前是國際上公認(rèn)的極具潛力的“第四代飼料”，近年來也受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，同時也很有可能是未來飼料行業(yè)發(fā)展的一個趨勢[35]。生物發(fā)酵餌料能提高飼料的效價和利用率，具有對水體污染較小、能夠有效增強對蝦免疫力、預(yù)防病害發(fā)生等優(yōu)點。

2.6 推廣底層增氧技術(shù)

很多的病害并非是病原本身致死的，而是由于缺氧所引起的，比如對蝦病毒性疾病，缺氧常常造成20%以上的對蝦死亡。在池塘底部安裝底層增氧設(shè)備可以有效提高池塘底部的溶解氧水平，從而促進池塘底部各種有害物質(zhì)氧化分解，可以為凡納濱對蝦養(yǎng)殖提供一個良好的底部環(huán)境。葉 鍵等[36]對對蝦病毒性疾病的防控措施進行了研究，在苗種、飼料來源以及日常管理都相同的情況下，對照組均有不同程度的發(fā)病，而試驗組蝦卻未發(fā)病，這在一定程度上也反映了底層增氧技術(shù)對預(yù)防對蝦病毒性疾病具有一定的作用。

2.7 切斷病毒傳播途徑

在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，漁具在使用前和使用后都必須經(jīng)過嚴(yán)格的消毒，一般生產(chǎn)上使用較多的是高錳酸鉀，每100 kg水中加入高錳酸鉀1～2 g，充分溶解后將所用到的漁具放入其中浸泡30 min后即可使用，但要注意時間，時間長了高錳酸鉀會氧化變色從而使消毒的效果大大降低。養(yǎng)殖過程中池塘如果出現(xiàn)病蝦、死蝦時要及時撈出，清除傳染源，將病蝦和死蝦放入專門容器內(nèi)，集中起來送到垃圾場進行無害化處理[37]。搬運和投喂飼料時要注意不要將飼料散落在池塘邊，以免引來鳥類。即使沒有飼料，鳥類也會時常捕食池塘內(nèi)的對蝦，尤其是在池塘內(nèi)對蝦健康發(fā)生異常時更會吸引來大量飛鳥，可在池塘上方鋪一層防鳥網(wǎng)或在池塘邊放置稻草人。這樣既避免了飛鳥捕食對蝦，又可以防止飛鳥作為中間宿主傳播病毒。在對蝦養(yǎng)殖比較密集的區(qū)域內(nèi)，應(yīng)采用全封閉或半封閉的養(yǎng)殖方式，從根源上切斷病毒的傳播途徑。也有許多對蝦養(yǎng)殖場反映自從對蝦白斑綜合征病毒流行以來，換水越多死亡越多，反而全封閉或半封閉養(yǎng)蝦取得了較好的效果。池塘與池塘之間應(yīng)該修建1.5～2.0 m高的簡易隔離墻，用來防止攜帶有病毒的蝦塘中的池水以及塘泥等進入其他的對蝦養(yǎng)殖池塘中，造成交叉感染。

2.8 增強蝦體免疫力

凡納濱對蝦是低等的無脊椎甲殼類動物，其免疫系統(tǒng)要比脊椎動物簡單、脆弱，因而一般凡納濱對蝦只有細胞免疫這一道防線，不具有特異性免疫系統(tǒng)[38]。內(nèi)服免疫增強劑是提高凡納濱對蝦抗病力的重要措施之一，可以在養(yǎng)殖對蝦的餌料中適當(dāng)伴喂一些免疫調(diào)節(jié)劑，比如黃芪多糖、酵母免疫多糖和酵母培養(yǎng)物等。實施間隔性投喂可調(diào)節(jié)養(yǎng)殖對蝦自身的非特異性免疫系統(tǒng)，以達到增強養(yǎng)殖對蝦免疫力的目的[39]。在飼料中也可以添加適量的植物多糖、低聚糖、VC和VE等物質(zhì)提高養(yǎng)殖對蝦的免疫力。

3 展望

凡納濱對蝦養(yǎng)殖是中國水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一，但是對蝦病毒病的傳播和流行對我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。目前，尚無有效治療對蝦病毒病的藥物，凡納濱對蝦的養(yǎng)殖前景依然十分嚴(yán)峻，現(xiàn)階段凡納濱對蝦的養(yǎng)殖原則仍然是預(yù)防為主、防治結(jié)合。因此，首先，我國應(yīng)盡快建立和完善凡納濱對蝦親蝦及蝦苗的檢疫檢測體系和相關(guān)的制度，制定健康管理技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，從源頭上阻斷病毒傳播。其次，日常管理工作要做好，凡是使用過的器具都要進行消毒，防止病毒通過器具傳播。再次，應(yīng)著重從增強凡納濱對蝦自身的免疫力著手，疾病的暴發(fā)往往是伴隨著水質(zhì)的惡化以及自身免疫力的降低，所以在日常管理過程中要注重增強對蝦的免疫力，適當(dāng)伴喂一些免疫調(diào)節(jié)劑。國內(nèi)外對對蝦免疫機制方面的研究較少，研究不成熟，目前也是水產(chǎn)動物免疫學(xué)的一個研究熱點?？梢灶A(yù)見對蝦免疫機制在未來將是一個很好的研究方向，對我國乃至全世界對蝦養(yǎng)殖業(yè)的病毒防控有著舉足輕重的作用。