黃金貴 張 勇* 李方方 張瑞陽(yáng) 尹達(dá)菲 李雪平 尹孟慧

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院，沈陽(yáng) 110866；2.江西好實(shí)沃生物技術(shù)有限公司，宜春 336000；3.東光縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，東光 061600)

近年來(lái)，隨著我國(guó)飼料行業(yè)禁抗政策的相繼出臺(tái)，使得高效、安全綠色飼料添加劑的應(yīng)用研究尤為迫切。滅活植物乳桿菌和未滅活植物乳桿菌的主要區(qū)別在于植物乳桿菌滅活后不能夠繼續(xù)繁殖、增殖，但是含有滅活的菌體細(xì)胞、細(xì)胞壁多糖、細(xì)胞內(nèi)容物以及代謝產(chǎn)生的有機(jī)酸和細(xì)菌素等多種代謝產(chǎn)物。滅活植物乳桿菌不是依靠植物乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖發(fā)揮作用，而是靠菌體的競(jìng)爭(zhēng)排斥和其代謝產(chǎn)物中含有的有機(jī)酸等發(fā)揮作用[1]。植物乳桿菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，它的主要成分是脂類物質(zhì)和肽聚糖，其中脂蛋白和肽聚糖可以讓植物乳桿菌對(duì)肉雞的腸道具備強(qiáng)黏附功能。植物乳桿菌經(jīng)過(guò)80 ℃的精準(zhǔn)高溫滅活以后，可以讓其表面的肽聚糖徹底裸露出來(lái)，從而擁有更強(qiáng)的腸道黏附作用和競(jìng)爭(zhēng)排斥性。此外，滅活的植物乳桿菌具有耐胃酸、耐膽汁和耐高溫等優(yōu)點(diǎn)，安全性更高更穩(wěn)定，如果采用活菌，生產(chǎn)高溫制?；蛘邉?dòng)物采食以后，植物乳桿菌在此過(guò)程中不一定能夠存活下來(lái)，穩(wěn)定性差，所以滅活植物乳桿菌相比較而言更有優(yōu)勢(shì)。另外，滅活植物乳桿菌及其代謝產(chǎn)物中含有豐富的乳酸、乳酸菌素，可以有效地抑制或殺滅肉雞腸道中的致病菌[2]。相比較活菌，滅活植物乳桿菌的安全性更高，并且在吸附毒素、黏附病原菌、增強(qiáng)腸黏膜屏障功能以及調(diào)節(jié)腸道菌群等方面發(fā)揮重要作用，在動(dòng)物生產(chǎn)中具有很大的應(yīng)用潛力。這些具有促進(jìn)健康功效的滅活菌和代謝產(chǎn)物均屬于后生元的范疇，為了統(tǒng)一后生元的定義，2021年5月，國(guó)際益生菌和益生元科學(xué)協(xié)會(huì)(ISAPP)發(fā)表了后生元的共識(shí)聲明：后生元是指對(duì)宿主健康有益的無(wú)生命微生物和/或其成分的制劑[3]。但是，目前植物乳桿菌后生元在我國(guó)畜牧行業(yè)中的應(yīng)用較少，尚不明確在飼糧中的適宜添加量[1]。因此，本試驗(yàn)在飼糧中添加不同劑量的植物乳桿菌后生元(postbioticsLactobacillusplantarum,PLP)，研究其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、屠宰性能、十二指腸消化酶活性、盲腸微生物組成與多樣性的影響，以期確定PLP在肉雞飼糧中的適宜添加量，為PLP在肉雞生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用PLP購(gòu)自某生物技術(shù)有限公司，含滅活植物乳桿菌數(shù)≥5.0×1010個(gè)/g；代謝產(chǎn)物主要成分為乳酸、短鏈脂肪酸及細(xì)菌素(分子質(zhì)量10 kD)，滅活菌數(shù)≥5.0×109個(gè)/g，總酸(以乳酸計(jì))含量≥2.5%，總蛋白含量≥1%。其中植物乳桿菌菌株為HEW-A911；滅活植物乳桿菌數(shù)采用血球計(jì)數(shù)法測(cè)定；代謝產(chǎn)物細(xì)菌素分子質(zhì)量是將發(fā)酵液進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)(上樣量10 μL，電泳時(shí)間20 min)后測(cè)定；總酸含量按照GB 12456—2021中的酸堿指示劑滴定法測(cè)定；總蛋白含量按照GB 5009.5—2016中凱氏定氮法測(cè)定。植物乳桿菌的發(fā)酵條件：溫度36.5～37.5 ℃，發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速50～80 r/min，發(fā)酵時(shí)間16～18 h，然后80 ℃滅活處理。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

選取當(dāng)日10:00出雛的1日齡健康并且體重接近的愛(ài)拔益加(AA)雄性肉仔雞600只，隨機(jī)分為5組，各組間平均體重差異不顯著(P>0.05)，每組各設(shè)6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)有20只雞。A組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；B、C、D、E組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上分別添加200、400、600 和800 g/t的PLP。試驗(yàn)期42 d，分為前期(1～14日齡)、中期(15～28日齡)、后期(29～42日齡)3個(gè)階段。每個(gè)組提前按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)的添加量將PLP添加加到肉仔雞的基礎(chǔ)飼糧中。3個(gè)階段的基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。肉仔雞采用的飼糧前期是破碎料，中期和后期是粉料加粒料。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items1～14日齡 1 to 14 days of age15～28日齡15 to 28 days of age29～42日齡29 to 42 days of age石粉 Limestone1.081.101.11二水合磷酸氫鈣 CaHPO4·2H2O1.251.100.90預(yù)混料 Premix1)1.001.000.95L-賴氨酸 L-Lys0.750.880.80食鹽 NaCl0.200.250.25DL-蛋氨酸 DL-Met0.210.200.18蘇氨酸 Threonine0.200.200.18氯化膽堿 Choline chloride0.100.100.10腐植酸鈉 Sodium humate0.100.080.08碳酸氫鈉 NaHCO30.05耐高溫植酸酶 Resistant to high temperature phytase0.020.02禽用復(fù)合酶 Complex enzymes for poultry0.040.040.03普通植酸酶 Common phytase0.03復(fù)合抗氧化劑 Complex antioxidant0.02合計(jì) Total100.00 100.00 100.00 營(yíng)養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)11.93 13.3313.90 粗蛋白質(zhì) CP20.25 21.1320.25鈣 Ca0.90 0.820.80 有效磷 AP0.40 0.40 0.35賴氨酸 Lys1.34 1.371.32蛋氨酸 Met0.50 0.510.46

1.3 飼養(yǎng)管理

肉雞在試驗(yàn)期間采用自由飲水和采食的方法。嚴(yán)格按照《AA肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》進(jìn)行操作，然后執(zhí)行正常的防疫流程和消毒處理程序。雞舍管理完全按照沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)的飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行管理。本試驗(yàn)應(yīng)用3層籠養(yǎng)的飼養(yǎng)方式，飲水應(yīng)用自動(dòng)飲水線，08:00和18:00分別人工添料1次。雞舍使用具有智能恒溫系統(tǒng)的暖風(fēng)爐進(jìn)行保溫供暖，溫度設(shè)定嚴(yán)格按照肉雞的飼養(yǎng)溫度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定期調(diào)整，雞舍保證良好的通風(fēng)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

在試驗(yàn)期間，每日記錄加料量和剩余料量，計(jì)算每組每日的喂料量，每日記錄各組雞的淘汰和死亡數(shù)量，并在試驗(yàn)開(kāi)始及飼養(yǎng)天數(shù)達(dá)到14、28和42 d時(shí)對(duì)所有組肉雞挨個(gè)進(jìn)行空腹稱重，同時(shí)計(jì)算每個(gè)階段和整個(gè)飼養(yǎng)期間的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和死淘率(MER)，并計(jì)算歐洲效益指數(shù)(EPI)。

ADFI(g)=耗料量/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)雞只數(shù))；
ADG(g)=增重/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)雞只數(shù))；
F/G=ADFI/ADG；
MER(%)=(試驗(yàn)期內(nèi)死淘只數(shù)/
試驗(yàn)初期存欄肉仔雞只數(shù))×100；
EPI=[成活率×體重(kg)/(F/G×
出欄天數(shù))]×10 000。

1.4.2 屠宰性能

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，為確保采樣時(shí)間相同，根據(jù)飼養(yǎng)試驗(yàn)綜合結(jié)果，選取的ADG、F/G和出欄重與對(duì)照組差異顯著的600 g/t組進(jìn)一步探討PLP對(duì)肉雞屠宰性能、十二指腸消化酶活性和盲腸微生物組成及多樣性。隨機(jī)從對(duì)照組和600 g/t組的每個(gè)重復(fù)內(nèi)抽取1只控食(期間自由飲水)12 h后的肉雞，完全按照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》(NY/T 823—2004)測(cè)定肉雞的屠宰率、胸肌率、腿肌率、腹脂率、半凈膛率和全凈膛率。

1.4.3 十二指腸消化酶活性

試驗(yàn)雞屠宰后，剪取約2 cm的十二指腸組織放在凍存管中，以備檢測(cè)消化酶活性。使用江蘇寶萊生物科技有限公司生產(chǎn)的消化酶活性測(cè)定試劑盒，按照試劑盒的操作說(shuō)明測(cè)定淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性。

1.4.4 盲腸微生物組成及多樣性

試驗(yàn)雞屠宰后，在無(wú)菌條件下采集盲腸內(nèi)容物，送至深圳微科盟科技集團(tuán)有限公司進(jìn)行后續(xù)的DNA提取以及16S rDNA擴(kuò)增子測(cè)序分析，根據(jù)Novaseq PE250測(cè)序平臺(tái)，使用單端測(cè)序的方法來(lái)構(gòu)建一個(gè)小片段文庫(kù)。經(jīng)過(guò)切割、分析后讀取來(lái)取得最后的有效數(shù)據(jù)。在這些有效數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，將所有序列聚類形成具備97%同源性的操作分類單元(OTUs)，然后利用這些OTUs序列跟Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)分別進(jìn)行物種注釋分析。依據(jù)這些物種的注釋，通過(guò)計(jì)算微生物的α多樣性和β多樣性，對(duì)照各組之間的差別，從而顯示出不同處理?xiàng)l件下群落結(jié)構(gòu)之間的差異性。通過(guò)OTUs數(shù)量來(lái)計(jì)算出α多樣性指數(shù)(Shannon、Simpson、Chao1、ACE指數(shù))。使用LEfSe分析方法來(lái)分析不同群體之間群落結(jié)構(gòu)的差異，即β多樣性。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

飼養(yǎng)試驗(yàn)的生長(zhǎng)性能數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用Excel 2010進(jìn)行初步整理，然后使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。先采用單因素方差(one-way ANOVA)程序進(jìn)行方差分析，再采用LSD法進(jìn)行多重比較，所有結(jié)果均使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，如果P<0.05則表示差異顯著，如果P<0.01則表示差異極顯著。

屠宰性能采樣及糞樣分析結(jié)果應(yīng)用Excel 2010進(jìn)行初步整理，然后使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，假設(shè)方差不相等，P<0.05表明數(shù)據(jù)之間差異有顯著性，方差齊性不一致；假設(shè)方差相等，P>0.05表明數(shù)據(jù)之間差異沒(méi)有顯著性，方差齊性一致。所有結(jié)果均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 PLP對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，在飼養(yǎng)試驗(yàn)前期階段，600 g/t PLP組的末重與對(duì)照組相比顯著增加(P<0.05)，800 g/t PLP組與對(duì)照組相比極顯著增加(P<0.01)；400和600 g/t PLP組的ADG與對(duì)照組相比顯著提高(P<0.05)，800 g/t PLP組與對(duì)照組相比極顯著提高(P<0.01)；400 g/t PLP組的ADFI與對(duì)照組相比顯著提高(P<0.05)，800 g/t PLP組與對(duì)照組相比極顯著提高(P<0.01)；各組間F/G和MER差異不顯著(P>0.05)。

在飼養(yǎng)試驗(yàn)中期階段，400 g/t PLP組的末重及ADG與對(duì)照組相比極顯著提高(P<0.01)，同時(shí)F/G極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；其他PLP組的末重、ADG、ADFI和F/G與對(duì)照組相比差異均不顯著(P>0.05)；各組間MER差異不顯著(P>0.05)。

在飼養(yǎng)試驗(yàn)的后期階段，400和600 g/t PLP組的末重與對(duì)照組相比顯著提高(P<0.05)，其他PLP組的末重與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組間ADG、ADFI、F/G和MER差異不顯著(P>0.05)。

飼養(yǎng)試驗(yàn)全期(1～42日齡)，400和600 g/t PLP組的末重、ADG和EPI與對(duì)照組相比顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G與對(duì)照組相比顯著降低(P<0.05)；各組間ADFI和MER差異均不顯著(P>0.05)。

綜合試驗(yàn)全期的結(jié)果表明，飼糧中PLP添加量為400～600 g/t時(shí)可以顯著提高肉雞的出欄重和ADG，顯著降低F/G，顯著提高EPI。

對(duì)表2中試驗(yàn)全期的末重、ADG、ADFI、F/G、MER和EPI數(shù)據(jù)進(jìn)行曲線擬合，結(jié)果可知：末重、ADG、F/G和EPI與梯度變化符合二次曲線變化規(guī)律(P<0.05)，因此對(duì)本試驗(yàn)的生長(zhǎng)性能指標(biāo)進(jìn)行二次曲線擬合計(jì)算出PLP在肉雞飼糧中的最適添加量，回歸方程如下：ADG回歸方程為y=-0.000 013 679x2+0.012 583x+50.306，R2=0.921 6，極值為460；末重回歸方程為y=-0.000 549 71x2+0.515 35x+2 156.3，R2=0.860，極值為469；F/G回歸方程為y=0.000 000 410 7x2-0.000 373 6x+1.692 9，R2=0.980 5，極值為455；EPI回歸方程為y=-0.000 152 16x2+0.148 99x+289.36，R2=0.929 3，極值為490。綜合以上二次擬合分析結(jié)果，PLP在肉雞飼糧中的適宜添加量在455～490 g/t。

表2 PLP對(duì)肉雞各階段生長(zhǎng)性能的影響

2.2 PLP對(duì)肉雞屠宰性能的影響

選取生長(zhǎng)性能與對(duì)照組差異顯著且MER最低的600 g/t PLP組進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，結(jié)果顯示其屠宰率、半凈膛率、全凈膛率與對(duì)照組相比均得到顯著提高(P<0.05)，證明肉雞飼糧中添加PLP后可以顯著提高肉雞的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率。

2.3 PLP對(duì)肉雞十二指腸消化酶活性的影響

由表4可知，600 g/t PLP組的十二指腸淀粉酶活性與對(duì)照組相比極顯著提高(P<0.01)，胰蛋白酶和脂肪酶活性與對(duì)照組相比顯著提高(P<0.05)，由此說(shuō)明飼糧中添加PLP可以使肉雞十二指腸的淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性得到提高。

2.4 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物組成及多樣性的影響

2.4.1 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物組成的影響

圖1左側(cè)展示了42日齡肉雞盲腸微生物門水平上相對(duì)豐度排行前20位的菌門。從圖中可以明顯見(jiàn)到，對(duì)照組和600 g/t PLP組的盲腸菌群都是以擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、柔膜菌門(Tenericutes)、放線菌門(Actinobacteria)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、未分類菌門(unclassified)、酸桿菌門(Acidobacteria)、廣古菌門(Euryarchaeota)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)、互養(yǎng)菌門(Synergistetes)、藍(lán)藻門(Cyanobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)和硝化菌門(Nitrospirae)為主。在盲腸微生物中，擬桿菌門和厚壁菌門是優(yōu)勢(shì)菌門，二者相對(duì)豐度之和占微生物群落總豐度的85%以上。

表3 PLP對(duì)肉雞屠宰性能的影響

表4 PLP對(duì)肉雞十二指腸消化酶活性的影響

圖1右側(cè)展示了42日齡肉雞盲腸微生物屬水平相對(duì)豐度排行前20位的菌屬。從圖中可以看出，這20個(gè)菌屬的相對(duì)豐度大約占微生物群落總豐度的90%，對(duì)照組和600 g/t PLP組在屬水平上相對(duì)豐度超過(guò)1%的有巴氏桿菌屬(Barnesiella)、擬桿菌屬(Bacteroides)、副細(xì)菌屬(Parabacteroides)、顫螺旋菌屬(Oscillospira)、瘤胃球菌屬(Ruminococcus)、糞桿菌屬(Faecalibacterium)、普雷沃菌屬(Prevotella)。對(duì)照組乳酸桿菌屬(Lactobacillus)相對(duì)豐度為0.316%，600 g/t PLP組乳酸桿菌屬相對(duì)豐度為0.367%，方差分析雖然顯示2組間差異不顯著(P>0.05)，但是600 g/t PLP組較對(duì)照組提高了16.06%。

2.4.2 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物α多樣性的影響

由表5可知，600 g/t PLP組的操作分類單元(OTUs)數(shù)量以及Chao1和ACE指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明飼糧中添加600 g/t PLP可以提高肉雞盲腸微生物的豐富度；600 g/t PLP組的Shannon指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，Simpson指數(shù)與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)，說(shuō)明飼糧中添加600 g/t PLP可以提高肉雞盲腸微生物的多樣性。

2.4.3 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物β多樣性的影響

從LEfSe分析柱形圖展示了LDA評(píng)分高于設(shè)定值(默認(rèn)值是2)的微生物種類，也就是各組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的生物標(biāo)志物(biomaker)，圖中柱形圖長(zhǎng)度越長(zhǎng)代表該微生物對(duì)盲腸內(nèi)微生物群落的影響越大。由圖2可知，600 g/t PLP組與對(duì)照組存在顯著差異的物種有17個(gè)，其中相對(duì)豐度顯著升高的物種有13個(gè)，分別為變形菌門(Proteobacteria)、嗅桿菌科(Odoribacteraceae)、丁酸弧菌屬(Butyricimonas)、黃單目(Xanthomonadales)、黃單胞菌科(Xanthomonadaceae)、代拉屬(Dyella)、厭氧菌屬(Anaerotruncus) 、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、熱單胞菌屬(Thermomonas)、戴沃斯氏屬(Devosia)、甲基桿菌科(Methylobacteriaceae)、甲基桿菌屬(Methylobacterium)、類芽孢桿菌科(Paenibacillaceae)，相對(duì)豐度降低的有4個(gè)，分別為無(wú)色桿菌屬(Achromobacter)、Terrimonas、偶氮螺菌屬(Azospirillun)、魯內(nèi)拉屬(Runella)。

A：對(duì)照組；D：600 g/t PLP組。下圖同。A: control group; D: 600 g/t PLP group. The same as below.

表5 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物α多樣性的影響

3 討 論

3.1 PLP對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)證實(shí)，飼糧中添加PLP有促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)的作用，主要表現(xiàn)為ADFI和ADG提高，說(shuō)明飼糧中添加PLP可以增加飼糧適口性和提高增重。在飼糧中添加PLP對(duì)肉雞1～14日齡、15～28日齡、29～42日齡以及1～42日齡肉雞的ADG有明顯的提高，其中添加量為400～600 g/t時(shí)效果較好。Kalavathy等[4]研究結(jié)果顯示，飼糧中添加0.1%的雞源性乳酸菌混合物可以顯著降低對(duì)肉仔雞前期(1～21 日齡)的F/G，顯著提高肉雞前期的ADG；易先國(guó)[5]研究表明，肉雞飼糧中添加10 mg/kg熱滅活植物乳桿菌可以顯著提高肉雞5～22日齡的ADG，降低F/G。趙巍等[6]研究表明，飼糧中添加6.4‰的熱滅活植物乳桿菌培養(yǎng)物可以顯著提高肉雞前期的ADG。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果相一致，飼糧中添加PLP后飼養(yǎng)試驗(yàn)前期(1～14日齡)和中期(15～28日齡)肉雞的ADG均得到顯著提高，可能是前期和中期肉雞的免疫機(jī)能尚未發(fā)育完善，抵抗力差，PLP能夠提高肉雞的機(jī)體免疫力[7]，緩解了外界應(yīng)激，從而使ADG得到提高。飼養(yǎng)試驗(yàn)后期(29～42日齡)飼糧中添加PLP對(duì)肉雞ADG提高效果不顯著，但是也有提高趨勢(shì)，對(duì)F/G的改善效果顯著，可能是因?yàn)槿怆u前期和中期免疫機(jī)能在PLP的協(xié)助下能夠快速發(fā)育完善，保障后期腸道更加健康，從而提高肉雞的ADG，同時(shí)降低F/G，提高肉雞的生長(zhǎng)性能。易先國(guó)[5]的研究表明，熱滅活植物乳桿菌可以顯著提高42日齡肉雞的出欄重、ADG，顯著降低F/G，結(jié)合前期、中期的顯著優(yōu)勢(shì)和后期的改善趨勢(shì)，綜合導(dǎo)致肉雞的全期ADG顯著提高，F(xiàn)/G顯著降低，本試驗(yàn)結(jié)果與該報(bào)道結(jié)果一致。張輝華等[8]的研究結(jié)果顯示，熱滅活植物乳桿菌微生態(tài)制劑對(duì)肉雞的ADG、F/G具有很大的改善作用，并且這都體現(xiàn)在肉雞生長(zhǎng)的前、中期，但是在肉雞生長(zhǎng)的后期效果不理想，本試驗(yàn)結(jié)果與此觀點(diǎn)相一致。

Proteobacteria：變形菌門；Odoribacteraceae：嗅桿菌科；Butyricimonas：丁酸弧菌屬；Xanthomonadales：黃單胞菌目；Xanthomonadaceae：黃單胞菌科；Dyella：代拉屬；Anaerotruncus：厭氧菌屬；Paenibacillus：類芽孢桿菌屬；Thermomonas：熱單胞菌屬；Devosia：戴沃斯氏屬；Methylobacteriaceae：甲基桿菌科；Methylobacterium：甲基桿菌屬；Paenibacillaceae：類芽孢桿菌科；Achromobacter：無(wú)色桿菌屬；Azospirillum：偶氮螺菌屬；Runella：魯內(nèi)拉屬。

3.2 PLP對(duì)肉雞屠宰性能的影響

衡量肉雞肉用性能的關(guān)鍵指標(biāo)就是屠宰性能，這與肉品質(zhì)量息息相關(guān)。黃金華等[9]研究顯示，將含有植物乳桿菌的復(fù)合益生菌添加到肉雞飼糧中可使肉雞的半凈膛率和全凈膛率得到顯著提高，這與本研究所得結(jié)果相類似，即PLP可以使肉雞的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率得到顯著提高，說(shuō)明PLP保留了植物乳桿菌的部分功能。黃金華等[9]研究結(jié)果表明，添加0.1%和0.2%含植物乳桿菌的復(fù)合益生菌到肉雞飼糧中可以顯著降低肉雞的腹脂率，但是本試驗(yàn)結(jié)果顯示肉雞的腿肌率、腹脂率、胸肌率與對(duì)照組相比較差異不顯著，這與前人的研究結(jié)果不一樣，說(shuō)明PLP對(duì)肉雞屠宰性能的影響機(jī)理需要進(jìn)一步深入研究。

3.3 PLP對(duì)肉雞十二指腸消化酶活性的影響

脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶是肉雞體內(nèi)非常重要的3種消化酶，其活性的高低直接反映了其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用水平的高低，同時(shí)也反映了腸道分泌功能的正常與否和腸道結(jié)構(gòu)的完整與否。十二指腸內(nèi)的這些消化酶活性的高低將對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能產(chǎn)生至關(guān)重要的影響。王志祥等[10]的研究結(jié)果顯示，在飼糧中添加0.25%乳酸桿菌飼喂仔豬6周，可以使得豬胰臟和十二指腸食糜的脂肪酶和淀粉酶活性得到顯著提高。王恒月[11]的研究結(jié)果顯示，在飼糧中添加乳酸桿菌屬培養(yǎng)物飼喂肉雞，可以使得肉雞小腸淀粉酶活性得到顯著提高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加PLP可以讓肉雞十二指腸淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性得到顯著提高，這與之前的報(bào)道試驗(yàn)結(jié)果基本相同。十二指腸淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性的提高會(huì)相應(yīng)地提高肉雞對(duì)飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，進(jìn)而提高肉雞的ADG和出欄重并且降低肉雞的F/G。

3.4 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物組成的影響

保持動(dòng)物機(jī)體健康與否關(guān)鍵在于動(dòng)物腸道內(nèi)的微生物區(qū)系是否平衡。腸道是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)非常重要的消化吸收器官，與此同時(shí)腸道內(nèi)也有大量的細(xì)菌聚集于此，這些細(xì)菌在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)的進(jìn)化，最終與機(jī)體的內(nèi)環(huán)境構(gòu)成穩(wěn)定的微生物系統(tǒng)。大腸桿菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌是肉雞盲腸中最常見(jiàn)的菌群，雙歧桿菌及乳酸桿菌是肉雞腸道中的主要優(yōu)勢(shì)菌群，大約占90%，對(duì)肉雞胃腸道的微生態(tài)平衡至關(guān)重要。Jin等[12]的試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加乳酸桿菌可以使肉雞盲腸內(nèi)的乳酸桿菌數(shù)量得到顯著提高，同時(shí)可以有效抑制盲腸內(nèi)大腸桿菌的繁殖和增殖。陳佳等[13]研究表明，在飼糧中加入產(chǎn)共軛亞油酸(CLA)乳桿菌代謝產(chǎn)物可以減少盲腸中大腸桿菌的數(shù)量，顯著增加盲腸中乳酸桿菌的數(shù)量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉雞飼糧中添加PLP能夠提高其盲腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量，是因?yàn)闇缁钪参锶闂U菌代謝產(chǎn)物中含有乳酸等有機(jī)酸和改善短鏈脂肪酸代謝水平的乳酸菌素，能夠有效降低腸道內(nèi)的pH，有害菌大腸桿菌和沙門氏菌等對(duì)酸性環(huán)境不耐受，所以被抑制，而有益菌乳酸桿菌和雙歧桿菌在酸性環(huán)境下有利于增殖，這與朱廣素等[14]報(bào)道的結(jié)果相一致。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，42日齡肉雞盲腸微生物中的優(yōu)勢(shì)菌門是擬桿菌門和厚壁菌門，二者相對(duì)豐度之和占微生物群落總豐度的85%以上，這與黃強(qiáng)等[15]研究結(jié)果基本相同，肉雞盲腸微生物在門水平上大部分是擬桿菌門和厚壁菌門，它們?cè)谀芰慨a(chǎn)生和代謝中起著至關(guān)重要的作用[16-18]。值得一提的是，有報(bào)道指出肉雞盲腸微生物中相對(duì)豐度最高的菌門是厚壁菌門[19-20]，但是也有其他報(bào)道稱，肉雞盲腸微生物中相對(duì)豐度最高的菌門是擬桿菌門[18,21]。本試驗(yàn)中，肉雞盲腸微生物中相對(duì)豐度最高的菌門是擬桿菌門。

3.5 PLP對(duì)肉雞盲腸微生物多樣性的影響

肉雞盲腸微生物多樣性通常使用α多樣性和β多樣性來(lái)表示，但是這2個(gè)多樣性的側(cè)重點(diǎn)有所區(qū)別。微生物的α多樣性通常用在分析樣本內(nèi)的微生物群落多樣性上[22]。通過(guò)對(duì)單樣本進(jìn)行多樣性分析，可以反映樣本內(nèi)的微生物群落的豐富度和多樣性。β多樣性是對(duì)不同樣本間的微生物群落構(gòu)成進(jìn)行分析比較，其可以通過(guò)多種指標(biāo)進(jìn)行反映。其中的LEfSe分析是一種用于發(fā)現(xiàn)和詮釋高維度數(shù)據(jù)生物標(biāo)識(shí)(基因、通路和分類單元等)的分析工具，它可以進(jìn)行2個(gè)分組或者多個(gè)分組之間的比較，它強(qiáng)調(diào)的是統(tǒng)計(jì)意義和生物相關(guān)性，能夠在組與組之間尋找到有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的生物標(biāo)志物。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加PLP的組肉雞盲腸微生物的α多樣性與對(duì)照組相比有顯著提高，盲腸微生物α多樣性越高，其腸道的消化吸收能力也越強(qiáng)。此外，本試驗(yàn)顯示600 g/t PLP組肉雞盲腸微生物中丁酸弧菌屬的相對(duì)豐度顯著高于對(duì)照組，丁酸弧菌屬可以產(chǎn)生丁酸，丁酸可以減輕炎癥，維持腸道的健康，從而再一次印證了飼糧中添加PLP對(duì)肉雞的ADG和F/G等生長(zhǎng)性能指標(biāo)有改善作用。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加400～600 g/t PLP時(shí)可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，提高飼料效率。

② 飼糧中添加600 g/t PLP時(shí)肉雞的屠宰率、全凈膛率和半凈膛率顯著提高。

③ 飼糧中添加600 g/t PLP時(shí)提高了肉雞十二指腸淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性。

④ 飼糧中添加600 g/t PLP可以改善肉雞盲腸微生物組成，提高盲腸微生物α多樣性。

⑤ 對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能指標(biāo)進(jìn)行二次曲線擬合，得出PLP在肉雞飼糧中的適宜添加量為455～490 g/t。