簡誼龍 李 璐 陳躍平 周巖民 劉 強 莊 蘇

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，南京 210095)

隨著我國雞蛋消費量的增加，高密度、高營養(yǎng)化的養(yǎng)殖模式使蛋雞腸道負荷增大，導(dǎo)致腸道功能紊亂，繼而引發(fā)炎癥、抵抗能力下降和增加腸道通透性等問題。加之，飼料中含有霉菌毒素(飼料原料中霉菌毒素檢出率高達90%以上)以及過量重金屬的風(fēng)險[1-2]，這將進一步給蛋雞養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的危害。因此，尋找一種既能減緩飼料中有毒有害物質(zhì)的危害作用、又能改善動物腸道健康的飼料添加劑成為畜牧業(yè)從業(yè)者研究的重要課題。凹凸棒石是一種含水鎂鋁硅酸鹽的黏土礦物質(zhì)，具有比表面積大、吸附性能強和離子交換性能等生物學(xué)功能，且無毒無污染，已作為飼料原料和飼料添加劑廣泛應(yīng)用于動物生產(chǎn)中，且天然凹凸棒石經(jīng)改性或修飾后其功能更強[3]。據(jù)報道，凹凸棒石能提高動物機體的抗氧化能力，增強腸道總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性[4]，具有一定的抗炎作用，能夠增強機體的免疫性能[5]。此外，凹凸棒石因其具有特殊的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，應(yīng)用于動物生產(chǎn)中能夠吸附腸道有毒有害物質(zhì)[6]、改善腸道形態(tài)[7]、降低腸道通透性[8]和保護腸道屏障功能[9]等。目前，有關(guān)凹凸棒石的應(yīng)用研究多集中于肉雞和仔豬等動物上，對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞的研究尚未多見，尤其在開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞飼糧中添加劑量尚未可知。因此，本試驗以開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞為研究對象進行90 d的飼養(yǎng)試驗，研究飼糧中添加不同劑量的改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞生長性能、抗氧化能力、免疫性能和腸道屏障功能的影響，為進一步拓寬凹凸棒石在飼料中的應(yīng)用范圍提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用的改性凹凸棒石為某公司提供，由天然凹凸棒石經(jīng)改性而得。天然凹凸棒石主要成分包括：52.3%二氧化硅(SiO2)、12.29%三氧化二鋁(Al2O3)、5.67%氧化鎂(MgO)、8.65%三氧化二鐵(Fe2O3)、2.59%氧化鈣(CaO)、2.38%氧化鉀(K2O)和0.18%氧化鈉(Na2O)。天然凹凸棒石用季銨衍生物N-(2-羥基)甲基氯化銨殼寡糖(HTACO)按如下方法進行改性：取1 000 g天然凹凸棒石按固液比1∶5的比例添加到10%的硫酸溶液中，經(jīng)機械攪拌2 h使凹凸棒石均勻分散在溶液中；然后添加150 g的HTACO于該懸浮液中，在40 ℃條件下繼續(xù)攪拌4 h；固體產(chǎn)物經(jīng)離心分離后在100 ℃下干燥4 h，粉碎通過200目篩后的產(chǎn)品即為本試驗用改性凹凸棒石。

1.2 試驗設(shè)計

試驗選取1日齡(初始均重35.9 g)海蘭褐蛋雛雞960只，隨機分為4個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)40只雞。試驗雞分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對照組)、250、500和1 000 mg/kg改性凹凸棒石的飼糧。試驗在江蘇省南京市浦口區(qū)南京盤滁機械化養(yǎng)雞場進行，試驗期90 d。

1.3 飼養(yǎng)管理及基礎(chǔ)飼糧

試驗期間試驗雞自由采食和飲水，日常飼養(yǎng)管理以及常規(guī)免疫程序按照養(yǎng)殖場要求進行。根據(jù)雞日齡在不同時間段分別飼喂相應(yīng)的飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4 樣品采集

分別在試驗第30天、第60天和第90天，隨機從每組中挑選6只雞(每個重復(fù)1只)進行頸靜脈采血，血液靜置一段時間后4 ℃下以3 500 r/min離心15 min，取血清保存于-20 ℃冰箱待測。將雞致死后立即解剖，取肝臟、空腸和回腸(腸段和黏膜)組織于凍存管中，液氮速凍后置于-80 ℃儲存待測。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目Items1～14日齡1 to 14 days of age15～42日齡15 to 42 days of age43～60日齡43 to 60 days of age61～90日齡61 to 90 days of ageDL-蛋氨酸 DL-Met0.150.160.150.15石粉 Limestone1.401.501.451.50磷酸氫鈣 CaHPO41.301.881.701.70食鹽 NaCl0.300.300.300.30預(yù)混料 Premix1)1.001.001.001.00合計 Total100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)11.8711.8111.6411.38粗蛋白質(zhì) CP19.5718.6217.6517.33鈣 Ca1.021.071.001.02總磷 TP0.630.660.650.67有效磷 AP0.440.440.410.42賴氨酸 Lys1.081.010.890.87蛋氨酸 Met0.480.460.440.43蘇氨酸 Thr0.780.730.690.68

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 生長性能

試驗期間記錄每日飼糧消耗量，每5 d抽測試驗雞體重，分別在試驗第30天、第60天和第90天按重復(fù)稱量雞只總體重，所測數(shù)據(jù)用于計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.5.2 血清和肝臟抗氧化指標(biāo)

取0.2 g左右肝臟樣品，加入預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液(質(zhì)量體積比為1∶9)進行勻漿，勻漿液在4 ℃下以4 500 r/min離心15 min，取上清液保存至-20 ℃冰箱待測。血清和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒進行測定，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5.3 腸道黏膜免疫球蛋白含量

取0.2 g左右空腸和回腸黏膜樣品，加入預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液(質(zhì)量體積比為1∶9)進行勻漿，勻漿液在4 ℃下以4 500 r/min離心15 min，取上清液保存至-20 ℃冰箱待測?？漳c和回腸黏膜中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒進行測定，采用二喹啉甲酸(BCA)微板法測定腸道黏膜總蛋白的含量，最后計算出每克腸黏膜蛋白中sIgA、IgG和IgM的含量。測定所用試劑盒均采購自南京建成生物工程研究所，操作步驟和方法均按照說明書進行。

1.5.4 腸道通透性

將采集到的試驗第30天、第60天和第90天的血清用4 ℃預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液(質(zhì)量體積比為1∶9)進行稀釋，采用ELISA法測定血清D-乳酸(D-LA)、脂多糖(LPS)含量和二胺氧化酶(DAO)活性。測定所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，操作步驟按照試劑盒說明書進行。

1.5.5 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)

腸道固定組織樣本按照常規(guī)步驟經(jīng)過修整、脫水、透明、浸蠟和包埋等程序制作成石蠟組織塊，將制作好的石蠟組織塊固定在切片機(Leica RM2235)上，切成厚度為6 μm的切片。選擇腸道組織完整的切片輕輕置于水面(50 ℃)，用載玻片撈起后進行烤片。然后將切片進行蘇木素-伊紅(HE)染色，染色后封片，最后將制備好的切片置于顯微鏡(尼康ECLIPSE 80i)測量絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)(每個切片選取6根完整腸絨毛)，并計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。

1.5.6 腸道屏障功能相關(guān)基因mRNA相對表達量

采用實時熒光定量PCR(Applied Biosystems,Grand Island,美國)測定空腸和回腸黏膜閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)、閉鎖蛋白(OCLN)、閉合蛋白-1(CLDN-1)、黏蛋白2(MUC2)、三葉因子2(TFF2)的mRNA相對表達量。取0.2 g左右空腸和回腸黏膜樣品按照TRIzol試劑盒(TaKaRa Biotechnology,中國)說明提取總RNA，用Nano Drop ND-2000分光光度計(Nano Drop Technologies,美國)檢測RNA純度和濃度，根據(jù)所測濃度統(tǒng)一稀釋至同一水平，然后利用PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)試劑盒，在20 μL反應(yīng)體系(TaKaRa Biotechnology,中國)下將檢測的純度和濃度合適的RNA反轉(zhuǎn)成cDNA。最后采用TB Green Premix Ex TaqTM試劑盒(TaKaRa Biotechnology,中國)進行實時熒光定量PCR。擴增條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 34 s，40次循環(huán)；熔解曲線95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。以β-肌動蛋白(β-actin)作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達量。引物序列見表2，并由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表2 實時熒光定量PCR引物序列

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Excel 2019對數(shù)據(jù)進行初步處理，然后采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并利用多項式對比進行線性和二次效應(yīng)分析，組間差異性采用Duncan氏法進行多重比較，以P<0.05為差異顯著，結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞生長性能的影響

由表3可知，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞1～30日齡ADFI(線性，P<0.05)，但對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞其他生長性能指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。

表3 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞生長性能的影響

2.2 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞抗氧化能力的影響

由表4可知，飼糧中添加改性凹凸棒石對30日齡海蘭褐蛋雞血清抗氧化指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。在60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞血清GSH-Px(線性，P<0.05)和SOD活性(線性和二次，P<0.05)；與對照組相比，改性凹凸棒石添加組血清GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)，飼糧中添加1 000 mg/kg改性凹凸棒石顯著提高血清SOD活性(P<0.05)。在90日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著降低海蘭褐蛋雞血清MDA含量(線性，P<0.05)，且1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組血清MDA含量顯著低于對照組(P<0.05)。

由表5可知，在30日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞肝臟SOD活性(線性，P<0.05)，且1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組肝臟SOD活性顯著高于對照組(P<0.05)。在60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞肝臟GSH-Px活性(線性和二次，P<0.05)，且500 mg/kg改性凹凸棒石添加組肝臟GSH-Px活性顯著高于對照組(P<0.05)。在90日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。

2.3 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞免疫性能的影響

由表6可知，在30日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞回腸IgM含量(線性，P<0.05)，且1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸IgM含量顯著高于對照組(P<0.05)。在60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞空腸sIgA和IgG含量(線性和二次，P<0.05)，顯著提高回腸sIgA(線性，P<0.05)和IgG含量(二次，P<0.05)；且與對照組相比，250和1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組空腸sIgA含量和回腸IgG含量顯著提高(P<0.05)，1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸sIgA含量顯著提高(P<0.05)，250、500和1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組空腸IgG含量顯著提高(P<0.05)。在90日齡，與對照組相比，飼糧中添加不同劑量改性凹凸棒石均顯著提高回腸IgM含量(P<0.05)，但對其他指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。

表4 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

表5 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

續(xù)表5項目Items改性凹凸棒石添加水平Modified attapulgite supplemental levels/(mg/kg)02505001 000均值標(biāo)準(zhǔn)誤SEMP值 P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic超氧化物歧化酶 SOD/(U/mg prot)0.610.620.590.590.010.4430.1880.689丙二醛 MDA/(nmol/mg prot)0.220.190.250.220.010.2070.6250.80290日齡 90 days of age谷胱甘肽過氧化物酶 GSH-Px/(U/mg prot)7.298.089.959.290.540.2920.5910.456超氧化物歧化酶 SOD/(U/mg prot)0.630.640.620.620.010.4760.2730.551丙二醛 MDA/(nmol/mg prot)0.200.280.230.210.020.4620.2870.429

表6 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞免疫性能的影響

2.4 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表7可知，在30日齡，盡管飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞空腸絨毛高度和隱窩深度無顯著影響(P>0.05)，但能夠顯著提高空腸V/C值(線性和二次，P<0.05)，顯著提高回腸絨毛高度和V/C值(線性，P<0.05)；且與對照組相比，1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組空腸V/C值顯著提高(P<0.05)，500 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸絨毛高度和V/C值顯著提高(P<0.05)。在60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)無顯著影響(P>0.05)。在90日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞回腸絨毛高度(線性和二次，P<0.05)和V/C值(線性，P<0.05)，且500和1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸絨毛高度和V/C值顯著高于對照組(P<0.05)。

表7 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

2.5 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道通透性的影響

由表8可知，在30和60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞腸道通透性指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。在90日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著降低海蘭褐蛋雞血清DAO活性(線性，P<0.05)和LPS含量(線性和二次，P<0.05)，并且改性凹凸棒石添加組血清DAO活性和LPS含量均顯著低于對照組(P<0.05)。

2.6 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道屏障功能相關(guān)基因mRNA相對表達量的影響

由表9可知，在60日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞空腸OCLN的mRNA相對表達量(線性，P<0.05)；且與對照組相比，500和1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組空腸OCLN的mRNA相對表達量顯著提高(P<0.05)。在90日齡，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠顯著提高海蘭褐蛋雞回腸ZO-1(線性，P<0.05)和MUC2(線性和二次，P<0.05)的mRNA相對表達量；且與對照組相比，1 000 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸ZO-1的mRNA相對表達量顯著提高(P<0.05)，250 mg/kg改性凹凸棒石添加組回腸MUC2的mRNA相對表達量顯著提高(P<0.05)。此外，飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞60日齡回腸和90日齡空腸屏障功能相關(guān)基因mRNA相對表達量均無顯著影響(P>0.05)。

表8 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道通透性的影響

表9 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道屏障功能相關(guān)基因mRNA相對表達量的影響

續(xù)表9項目 Items改性凹凸棒石添加水平Modified attapulgite supplemental levels/(mg/kg)02505001 000均值標(biāo)準(zhǔn)誤SEMP值 P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic空腸 Jejunum三葉因子2 TFF21.000.980.970.940.030.9400.9900.897閉鎖蛋白 OCLN1.000.870.890.890.020.1880.1550.136閉合蛋白-1 CLDN-11.001.030.961.000.040.9490.8500.579閉鎖小帶蛋白-1 ZO-11.000.841.000.870.040.2940.2010.078黏蛋白2 MUC21.000.991.071.060.050.9140.9200.688

3 討 論

3.1 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞生長性能的影響

凹凸棒石擁有特殊的理化性質(zhì)，能夠吸收食糜中的水分，使得腸道內(nèi)食糜黏度增加、流動速度減緩，因此能夠延長食糜在腸道的停留時間，從而提高養(yǎng)分的消化率，促進動物生長。此外，凹凸棒石類黏土本身含有多種礦物元素，在進入腸道后被釋放，能夠被動物機體吸收，參與重要的酶以及激素類物質(zhì)的合成過程，從而提高動物的生長性能。Zhang等[10]研究報道，凹凸棒石能夠提高肉雞的ADFI。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠線性提高海蘭褐蛋雞1～30日齡ADFI，對31～60日齡和61～90日齡ADFI無顯著影響且各組間無顯著差異。Qiao等[11]研究表明，飼糧中添加凹凸棒石對海蘭褐蛋雞的ADFI無顯著影響。Cheng等[12]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加凹凸棒石對肉雞的ADFI無顯著影響。造成結(jié)果差異的原因可能與試驗動物的品種、凹凸棒石的種類和添加劑量等有關(guān)。在本試驗條件下，與對照組相比，飼糧中添加改性凹凸棒石對海蘭褐蛋雞的生長性能無顯著影響。

3.2 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞抗氧化能力的影響

酶與非酶類抗氧化系統(tǒng)在機體中發(fā)揮著重要作用，能夠保持促氧化和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡，以維持細胞的正?；钚訹13]。SOD和GSH-Px等抗氧化酶類能夠有效清除機體內(nèi)過多的自由基，避免機體造成氧化應(yīng)激損傷；MDA是機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可以用來反映機體氧化應(yīng)激程度。凹凸棒石具有較強的吸附能力，能夠吸附腸道內(nèi)的有毒有害物質(zhì)，減少其對動物的傷害，同時提高抗氧化酶活性，緩解機體的氧化應(yīng)激，減少機體內(nèi)MDA含量[14]。林麗娟[15]研究報道，凹凸棒石能夠提高奶牛血清GSH-Px活性，降低血清MDA含量。與前人研究結(jié)果一致，本試驗也發(fā)現(xiàn)飼糧中添加1 000 mg/kg改性凹凸棒石能夠提高海蘭褐蛋雞血清SOD和GSH-Px活性以及肝臟SOD活性，并能降低血清MDA含量，這說明改性凹凸棒石能夠增強機體抗氧化酶類的活性，對脂質(zhì)過氧化物的形成具有抑制作用[16]。

3.3 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞免疫性能的影響

sIgA由腸黏膜的漿細胞產(chǎn)生，能夠中和腸道內(nèi)毒素和其他有害物質(zhì)，并且能夠阻止致病菌在黏膜上黏附[17]。當(dāng)腸道內(nèi)炎癥反應(yīng)發(fā)生以及病毒入侵時，機體會刺激漿細胞產(chǎn)生大量sIgA以清除病原微生物的危害[18]。IgM是體液免疫早期抗體，IgG具有中和病毒以及抗菌的作用[19]。研究表明，硅酸鹽類礦物質(zhì)具有提高免疫力的作用[20]。本研究中，飼糧中添加1 000 mg/kg改性凹凸棒石能夠提高海蘭褐蛋雞回腸IgG、IgM和sIgA含量以及空腸sIgA和IgG含量。本試驗結(jié)果與Chen等[4]和王棟等[21]分別報道肉雞和犢牛飼糧中添加凹凸棒石提高了回腸sIgA和IgM含量以及血清IgA和IgM含量的結(jié)果一致。凹凸棒石對免疫功能的有效作用可歸結(jié)為其吸附性以及硅鋁酸鹽的化學(xué)組成，在腸道內(nèi)它能夠吸附有害微生物及其代謝產(chǎn)物，減少病原菌的黏附，促進腸道免疫球蛋白的分泌，進而改善腸道健康，增強機體的免疫性能[20,22]。

3.4 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道屏障的完整性對動物腸道消化吸收功能、免疫性能具有極其重要的作用。腸道上皮細胞更新是從腸道黏膜隱窩干細胞池開始，形成新的單層上皮細胞，然后遷移至腸絨毛，發(fā)育成為能夠吸收營養(yǎng)物質(zhì)的成熟細胞[23]。所以腸道黏膜的絨毛高度和隱窩深度是衡量腸道健康狀況的重要指標(biāo)。而病原微生物入侵能夠加速上皮細胞調(diào)亡，導(dǎo)致腸道內(nèi)的絨毛變短，隱窩變深[24]。絨毛高度越高，說明上皮細胞越多，表面積越大，腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收越好；隱窩深度越淺則表明細胞成熟度越高，其分泌功能就越強[7,25]。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠提高海蘭褐蛋雞30日齡空腸V/C值，提高30和90日齡回腸絨毛高度和V/C值。有研究報道，飼糧添加2%的凹凸棒石對肉雞空腸絨毛高度有顯著提高作用[11]；類似地，De Lemos等[26]發(fā)現(xiàn)0.75%和1.50%的高嶺土(一種礦物質(zhì)黏土)能夠提高肉雞十二指腸的絨毛高度。本試驗結(jié)果與前人的研究結(jié)果一致，這說明改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞的腸道形態(tài)具有一定改善作用，這主要是由于改性凹凸棒石能夠增強機體抗氧化酶活性和提高免疫球蛋白的分泌，降低腸道上皮細胞的損傷，同時凹凸棒石還可以在腸黏膜表面形成一層保護膜，防止腸道中有害病原菌對腸道的損傷，最終達到保護腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的作用。

3.5 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道通透性的影響

DAO是一種主要存在于小腸黏膜中的胞內(nèi)酶，D-LA是腸道內(nèi)細菌的代謝產(chǎn)物，LPS是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的組成成分。當(dāng)腸道黏膜受損、腸道通透性增加時，腸道中的微生物和內(nèi)毒素等就會突破腸道屏障，進入血液，從而引發(fā)腸道炎癥反應(yīng)，甚至導(dǎo)致器官功能衰竭，因此血清中DAO活性以及D-LA和LPS含量可以用來評定腸道通透性程度[27]。研究表明，不同粒度的凹凸棒石能夠降低肉雞血清DAO活性[8]。Zhang等[28]研究報道，凹凸棒石能夠顯著降低斷奶仔豬血清LPS含量和DAO活性。本試驗結(jié)果與之一致，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠降低海蘭褐蛋雞90日齡血清DAO活性和LPS含量。以上結(jié)果歸結(jié)于改性凹凸棒石可利用其吸附性來吸附腸道內(nèi)的有害菌及其代謝產(chǎn)物[6]，降低腸道通透性，保護腸道屏障功能。

3.6 改性凹凸棒石對開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞腸道屏障功能相關(guān)基因mRNA相對表達量的影響

腸道緊密連接主要由閉鎖小帶蛋白(ZO)、閉合蛋白(CLDN)和OCLN等緊密連接蛋白組成，是腸道屏障的重要部分，而腸道緊密連接蛋白能夠阻止有害物質(zhì)進入體內(nèi)。有研究報道，當(dāng)ZO-1、CLDN-1和OCLN等緊密連接蛋白mRNA表達量降低時，會導(dǎo)致腸道通透性增加，腸道機械屏障失效[29]。TFF2和MUC2由腸道上皮杯狀細胞產(chǎn)生，參與組成腸道屏障結(jié)構(gòu)，兩者共同維護腸道健康狀態(tài)。TFF2不僅可以提高黏蛋白黏度，還可以穩(wěn)定黏蛋白結(jié)構(gòu)，而黏蛋白則能夠促進機體胃腸道的發(fā)育[30]。有研究報道，往肉雞腹腔注射LPS會導(dǎo)致血清DAO活性升高，降低回腸ZO-1的mRNA相對表達量[31]。陳躍平[32]研究表明，1%凹凸棒石能夠提高肉雞回腸ZO-1的mRNA相對表達量，還能促進MUC2和TFF2的基因表達。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加改性凹凸棒石能夠提高海蘭褐蛋雞空腸和回腸黏膜中OCLN、ZO-1和MUC2的mRNA相對表達量，結(jié)果與之前研究一致。此外，黏土類礦物質(zhì)具有良好的止瀉功能，可以預(yù)防腸道損傷[33]。結(jié)合前面所述的改性凹凸棒石對腸道通透性指標(biāo)、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)以及免疫性能的有效作用結(jié)果可以得出，改性凹凸棒石具有改善腸道屏障功能和促進腸道健康的作用。

4 結(jié) 論

飼糧中添加改性凹凸棒石能夠提高開產(chǎn)前海蘭褐蛋雞血清和肝臟抗氧化能力，提高腸道免疫性能，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，增強腸道屏障功能，保護腸道健康。綜合試驗結(jié)果，飼糧中改性凹凸棒石的適宜添加劑量為1 000 mg/kg。