劉 瑋 韓海霞 李大鵬 陶家樹 雷秋霞 周 艷 劉 杰 王 杰 曹頂國 李福偉 邵慶平 李惠敏*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所，山東省家禽育種工程技術(shù)研究中心，濟南 250100；2.山東省畜牧總站，濟南 250022；3.海陽市華盛積福蛋雞育成場，煙臺 265100)

蛋雞的生長及健康狀況受諸多因素的影響，合理的飼養(yǎng)密度對蛋雞的生長尤為重要，能夠影響蛋雞外在行為表達和內(nèi)在生理健康，是制約蛋雞福利狀況的重要因素[1-3]。飼養(yǎng)密度影響蛋雞生產(chǎn)性能，是制約養(yǎng)殖企業(yè)生產(chǎn)效益的關(guān)鍵因素[4]。Stamp Dawkins等[5]研究表明，飼養(yǎng)密度對家禽生產(chǎn)的影響僅次于環(huán)境因素。飼養(yǎng)密度過高會增加雞群之間的啄羽、啄蛋等行為[6]，蛋雞也易出現(xiàn)產(chǎn)蛋疲勞癥、焦躁不安、抗應(yīng)激能力弱、腸道結(jié)構(gòu)損傷、產(chǎn)蛋量以及免疫力下降等問題[7]。低飼養(yǎng)密度降低了舍內(nèi)空間的有效利用，降低了設(shè)備使用效率，增加了人工成本，高飼養(yǎng)密度容易引起家禽應(yīng)激反應(yīng)，進而影響動物福利以及食品健康[8]。隨著規(guī)模化蛋雞層疊式籠養(yǎng)模式的不斷推廣，探求最佳飼養(yǎng)密度對實際生產(chǎn)具有重要意義。邢媛媛等[9]研究表明低飼養(yǎng)密度(10只/m2)比高飼養(yǎng)密度(20只/m2)更有利于愛拔益加(AA)肉仔雞早期(1～21日齡)生長性能、成活率、免疫和抗氧化功能。Buijs等[10]研究表明，高飼養(yǎng)密度會影響肉雞骨骼生長。孔令琳等[11]研究認為，籠養(yǎng)模式下能使雪山雞母雞獲得較好生產(chǎn)性能和適宜腹脂指數(shù)的飼養(yǎng)密度為21只/m2。張蒙等[12]研究得出了大午金鳳蛋雞育雛期雛雞獲得較好體重、脛長、平均日采食量、飼料轉(zhuǎn)化率和血清抗氧化指標的飼養(yǎng)密度，0～2周齡為83～107 cm2/只，3～6周齡為167～214 cm2/只。楊景晁等[13]研究認為高飼養(yǎng)密度會降低海蘭褐蛋雞育雛育成期體重、脛長、龍骨長和胸寬，建議飼養(yǎng)密度0～5周齡為20～30只/m2，6～7周齡為10只/m2。目前，關(guān)于飼養(yǎng)密度的研究多集中在肉雞和育雛期的蛋雞，對于高產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋期的研究還鮮見報道。因此，本試驗通過進一步研究不同飼養(yǎng)密度下海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、羽毛狀況、腸道組織形態(tài)以及血清生化、抗氧化和免疫指標的變化規(guī)律，找出實際生產(chǎn)中海蘭褐商品代蛋雞產(chǎn)蛋期的適宜飼養(yǎng)密度，為高產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋期的飼養(yǎng)管理提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

試驗于2021年6月16日開始，在山東省海陽市某蛋雞場進行。選取432只產(chǎn)蛋率、體重體型、外觀相近的健康30周齡海蘭褐蛋雞，隨機分為3組，每組6個重復，每個重復24只雞，采用4層層疊式籠養(yǎng)(籠具規(guī)格為長62.5 cm，寬60.0 cm，高46.0 cm)，其中高密度組(HSD組)每籠10只(375 cm2/只)，中密度組(MSD組)每籠8只(470 cm2/只)，低密度組(LSD組)每籠6只(625 cm2/只)。參照《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)和《海蘭褐產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)手冊》，并結(jié)合試驗設(shè)計配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗期間自由采食，自由飲水，預(yù)試期2周，開始試驗時各組間雞只體重和產(chǎn)蛋率均差異不顯著(P>0.05)，試驗期8周。

1.2 樣品采集處理與指標測定方法

1.2.1 生產(chǎn)性能

試驗期，以重復為單位記錄每天的產(chǎn)蛋總數(shù)、總蛋重、不合格蛋數(shù)(破蛋、軟蛋、畸形蛋、砂殼蛋、蛋重<50 g或>75 g蛋數(shù))和每周的采食量；試驗結(jié)束后，以重復為單位計算平均日采食量(每只雞每天平均采食量)、平均蛋重(總蛋重/產(chǎn)蛋總數(shù))、產(chǎn)蛋率(產(chǎn)蛋數(shù)/雞數(shù))、不合格蛋率(不合格蛋數(shù)/總蛋數(shù))和料蛋比(平均日采食量/平均日產(chǎn)蛋重量)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.2.2 羽毛狀況評價

試驗結(jié)束時(第8周末)，每組隨機選取60只雞，對頸部、背部、翅膀、尾部和肛門羽毛狀況進行評價，主要參照Geng等[14]的方法進行評分，標準如下：羽毛狀況分為4個等級，1分表示身上僅有少量羽毛覆蓋，有超過50%的劃痕；2分表示身體大部分羽毛脫落，有20%～50%的劃痕；3分表示羽毛有較少損傷，有<20%的劃痕；4分表示羽毛覆蓋良好，光滑平順，無劃痕。每個部位都用4分制評分，每只雞羽毛得分是5個部位的總分，最小值為5分，最高值為20分，得分越高，說明羽毛的整體狀況越好。

1.2.3 蛋品質(zhì)

試驗結(jié)束時，每個重復隨機抽取3個雞蛋進行蛋品質(zhì)測定。蛋形指數(shù)采用游標卡尺測定；蛋殼顏色采用色差儀(5SE型，TSS公司，英國)測定；蛋殼強度采用蛋殼強度測試儀(FGV-10XY型，Nidec公司，日本)測定；蛋重、蛋黃顏色、哈氏單位和蛋白高度采用多功能蛋品質(zhì)檢測儀(EMT-5200型，Robotmation公司，日本)測定；蛋黃重、蛋殼重采用電子天平稱量；蛋殼厚度采用蛋殼厚度測量儀(NFN-380型，F(xiàn)HK公司，日本)測定。

1.2.4 血清生化、抗氧化和免疫指標

試驗結(jié)束時，每重復選取1只雞，每組6只雞，禁食12 h，翅靜脈采血3 mL，靜置分層，吸取血清于離心管中，2 500 r/min離心10 min，分離血清于-80 ℃保存，用于測定血清生化、抗氧化和免疫指標。使用AU5400(Beckman Coulter，美國)全自動血液生化分析系統(tǒng)測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(UN)、尿酸(UA)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)和葡萄糖(GLU)含量；使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定血清鈣(Ca)、磷(P)含量，溶菌酶(LZM)、堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)活性以及總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量；使用武漢基因美生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒測定血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、干擾素-α(INF-α)、干擾素-β(INF-β)、白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-6(IL-6)、皮質(zhì)酮(CORT)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量。

1.2.5 腸道組織形態(tài)

試驗結(jié)束時，屠宰翅靜脈采血后的雞，采用無菌操作分別取十二指腸、空腸和回腸的同一部位腸段約2 cm，浸入4%多聚甲醛通用型組織固定液中常溫保存，以制備石蠟切片。腸道組織經(jīng)脫水、浸蠟、包埋、切片和蘇木精-伊紅染色后，在顯微鏡下觀察拍照。使用Image-Pro-Plus軟件分析測量小腸絨毛高度和隱窩深度并計算絨毛高度/隱窩深度。

1.2.6 盲腸免疫指標

采用無菌操作取3 cm左右盲腸置于平皿中，縱向剖開，輕輕刮除腸腔內(nèi)糞便，用玻片刮取腸黏膜收集于離心管中，-20 ℃速凍待測。使用武漢基因美生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒測定盲腸分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)利用XLSX工作表整理，整理后采用SAS 9.2軟件的一般線性模型(GLM)對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，F(xiàn)檢驗顯著差異者，以最小顯著差異(LSD)法比較平均值間的差異顯著性。結(jié)果以平均值和均值標準誤(SEM)表示。P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10為有顯著趨勢。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼養(yǎng)密度對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞生產(chǎn)性能的影響見表2。LSD組和MSD組平均日采食量和產(chǎn)蛋率均顯著高于HSD組(P<0.05)，LSD組和MSD組的不合格蛋率顯著低于HSD組(P<0.05)，HSD組較LSD組和MSD組有降低平均蛋重的趨勢(P=0.092)，3組之間料蛋比無顯著差異(P>0.05)。

表2 飼養(yǎng)密度對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 飼養(yǎng)密度對蛋雞羽毛狀況的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞羽毛狀況的影響見表3。LSD組和MSD組蛋雞的羽毛評分顯著高于HSD組(P<0.05)。

表3 飼養(yǎng)密度對蛋雞羽毛狀況的影響

2.3 飼養(yǎng)密度對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞蛋品質(zhì)的影響見表4。HSD組較LSD組和MSD組有降低蛋重(P=0.082)、蛋殼強度(P=0.081)和蛋殼比例(P=0.083)的趨勢，3組之間其他蛋品質(zhì)指標均無顯著差異(P>0.05)。

表4 飼養(yǎng)密度對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.4 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清生化指標的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞血清生化指標的影響見表5。HSD組較LSD組和MSD組有增加血清ACTH含量的趨勢(P=0.084)，3組之間其他血清生化指標均無顯著差異(P>0.05)。

表5 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清生化指標的影響

續(xù)表5項目Items低密度組LSD group中密度組MSD group高密度組HSD group均值標準誤 SEMP值P-value磷 P/(mmol/L)2.112.061.510.420.351堿性磷酸酶 AKP/(U/L)149.37138.21126.5113.140.294皮質(zhì)酮 CORT/(ng/mL)8.468.388.820.540.461促腎上腺皮質(zhì)激素 ACTH/(pg/mL)71.3772.6676.641.980.084

2.5 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清抗氧化指標的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞抗氧化指標的影響見表6。LSD組和MSD組蛋雞的血清CAT和SOD活性均顯著高于HSD組(P<0.05)，3組之間其他血清抗氧化指標均無顯著差異(P>0.05)。

表6 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清抗氧化指標的影響

2.6 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清免疫指標和盲腸sIgA含量的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞血清免疫指標和盲腸sIgA含量的影響見表7。LSD組和MSD組盲腸sIgA含量顯著高于HSD組(P<0.05)，HSD組血清IgA含量較LSD組和MSD組有降低的趨勢(P=0.074)，3組之間其他血清免疫指標無顯著差異(P>0.05)。

表7 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清免疫指標和盲腸sIgA含量的影響

2.7 飼養(yǎng)密度對蛋雞腸道組織形態(tài)的影響

飼養(yǎng)密度對蛋雞腸道組織形態(tài)的影響見表8。HSD組較LSD組和MSD組有降低空腸絨毛高度/隱窩深度的趨勢(P=0.073)，3組之間其他腸道組織形態(tài)指標均無顯著差異(P>0.05)。

表8 飼養(yǎng)密度對蛋雞腸道組織形態(tài)的影響

3 討 論

3.1 飼養(yǎng)密度對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

Asghar Saki等[15]和Guo等[16]研究均表明，飼養(yǎng)密度增加會對蛋雞生產(chǎn)性能產(chǎn)生不利影響。Hanh等[17]研究發(fā)現(xiàn)，高密度組(386 cm2/只)蛋雞產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率均低于低密度組(540 cm2/只)。本研究中，LSD組和MSD組蛋雞的平均日采食量和產(chǎn)蛋率均顯著高于HSD組，HSD組較LSD組和MSD組有降低平均蛋重的趨勢，這與Incharoen等[18]的研究結(jié)果一致；LSD組和MSD組的不合格蛋率顯著低于HSD組，這與謝守前[19]的研究結(jié)果一致；Mirfendereski等[20]研究發(fā)現(xiàn)蛋雞高、低密度組之間飼料轉(zhuǎn)化率差異不顯著，而Erensoy等[21]發(fā)現(xiàn)高飼養(yǎng)密度會降低蛋雞的飼料轉(zhuǎn)化率，本研究結(jié)果顯示3個不同飼養(yǎng)密度組之間料蛋比差異不顯著。本研究中高飼養(yǎng)密度在一定程度上降低了蛋雞的生產(chǎn)性能，可能是由于試驗時間為夏季，HSD組籠內(nèi)活動空間少于其他2組，空氣流通不暢、雞體熱量散失減少、局部環(huán)境溫度較高，并且擁擠也會導致一定程度的應(yīng)激和能量損耗。

3.2 飼養(yǎng)密度對蛋雞羽毛狀況的影響

羽毛覆蓋程度和狀況可以部分反映家禽的福利狀況和管理水平。在一項通過專家意見制定蛋雞福利評估方案的研究中，在17個可測量的福利指標中，羽毛狀況被列為最重要的指標[22]。Widowski等[23]研究發(fā)現(xiàn)，高飼養(yǎng)密度會導致蛋雞羽毛狀況較差。Weimer等[24]研究表明，隨著蛋雞飼養(yǎng)密度增加，羽毛覆蓋率降低。王長平等[25]研究表明，飼養(yǎng)密度對蛋雞的啄羽行為發(fā)生頻率有顯著的影響，并隨著飼養(yǎng)密度的增加呈上升趨勢。本研究中LSD組和MSD組蛋雞的羽毛評分顯著高于HSD組，與前人研究結(jié)果基本一致，說明飼養(yǎng)密度增加會使蛋雞活動空間受限，擁擠增加了雞與雞之間、雞與雞籠之間的摩擦幾率和啄羽行為，導致羽毛損傷增加。

3.3 飼養(yǎng)密度對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

邱凌云[26]研究表明，高密度組(338 cm2/只)與低密度組(506 cm2/只)蛋雞之間蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋殼比例、蛋形指數(shù)、蛋黃比例、蛋黃顏色、蛋白高度和哈氏單位均差異不顯著。Kang等[27]研究表明，不同飼養(yǎng)密度組蛋雞的蛋殼厚度、蛋黃顏色和哈氏單位無顯著差異，高密度組(10只/m2)的蛋殼強度顯著低于其他組(5、6和7只/m2)。本研究中，HSD組較LSD組和MSD組有降低蛋重、蛋殼強度和蛋殼比例的趨勢，這可能是因為隨著飼養(yǎng)密度增加，蛋雞個體間的互動性增強，對產(chǎn)蛋活動中部分環(huán)節(jié)產(chǎn)生了不利影響并增加了產(chǎn)蛋后雞蛋在籠內(nèi)被磕碰與踩踏的幾率，對蛋殼質(zhì)量有一定的影響，但對其他蛋品質(zhì)指標影響不大。

3.4 飼養(yǎng)密度對蛋雞血清生化指標的影響

血清生化指標能夠反映出動物機體的健康狀況、物質(zhì)吸收和代謝情況。激素的變化是機體產(chǎn)生應(yīng)激的最重要標志，血液CORT[28]和ATCH[29]含量已被廣泛用作衡量家禽應(yīng)激的指標。Incharoen等[18]研究表明，高密度組(0.06 m2/只)蛋雞血清GLU、P和CORT含量顯著高于低密度組(0.12 m2/只)，血清ALB、UN、T-CHO、TG和Ca含量差異不顯著。Wang等[30]研究表明，高密度組(338 cm2/只)蛋雞血清CORT含量與低密度組(506 cm2/只)差異不顯著。盧營杰[31]研究表明，高密度組肉雞血液ATCH含量顯著高于低密度組，而CORT含量則與低密度組差異不顯著。本研究中，不同飼養(yǎng)密度對蛋雞血清生化指標的影響不大，HSD組較LSD組和MSD組有增加血清ATCH含量的趨勢，說明高飼養(yǎng)密度對機體的物質(zhì)吸收和代謝影響較小，但血清中應(yīng)激指示物ATCH含量的增加反映了雞群存在一定程度的應(yīng)激。

3.5 飼養(yǎng)密度對蛋雞抗氧化功能的影響

T-AOC是衡量體內(nèi)抗氧化能力的綜合指標，可在一定程度上反映機體的抗氧化性能[32]。SOD[33]、GSH-Px[34]和CAT[35]被認為是抗氧化防御系統(tǒng)的主要成員，形成了氧化損傷的保護系統(tǒng)。MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，其含量的高低可反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平[36]。伍源等[37]研究表明，高密度飼養(yǎng)組肉雞的血漿T-AOC顯著降低，SOD活性顯著上升，GSH-Px活性和MDA含量均無顯著變化。張蒙等[12]研究表明，飼養(yǎng)密度對大午金鳳蛋雞育雛期雛雞的血清GSH-Px、SOD活性和T-AOC均無顯著影響，高密度組血清CAT活性顯著高于低密度組。朱麗慧等[38]研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激條件下蛋雞的血清SOD活性會顯著降低。本試驗中，LSD組和MSD組蛋雞的血清CAT和SOD活性均顯著高于HSD組，說明高飼養(yǎng)密度在一定程度上會影響蛋雞的抗氧化功能，這可能是因為飼養(yǎng)密度增大會產(chǎn)生一定程度的應(yīng)激，使機體更易受到氧化損傷及細胞損傷。

3.6 飼養(yǎng)密度對蛋雞免疫功能的影響

細胞因子可分為白細胞介素、干擾素等，蛋雞血液中細胞因子含量的高低能反映其免疫力[39-40]。免疫球蛋白是機體對抗原物質(zhì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要產(chǎn)物，其中sIgA[41]、IgA、IgG和IgM[42]是機體內(nèi)重要的非特異免疫因子。邱凌云[26]研究表明，飼養(yǎng)密度對蛋雞血清中IL-1β、IL-10、INF-α、IgA和IgG含量無顯著影響。秦鑫等[43]研究表明，飼養(yǎng)密度對肉雞血清IL-1β和IL-6含量無顯著影響。本試驗中，LSD組和MSD組盲腸sIgA含量顯著高于HSD組，HSD組血清IgA含量較LSD組和MSD組有降低的趨勢，由此推測高飼養(yǎng)密度會影響機體局部特異性免疫應(yīng)答，從而降低盲腸中sIgA的分泌和血清IgA含量，在一定程度上降低蛋雞免疫功能。

3.7 飼養(yǎng)密度對蛋雞腸道組織形態(tài)的影響

小腸是動物吸收營養(yǎng)物質(zhì)和水分的重要場所，其內(nèi)壁褶皺上的小腸絨毛高度的增加會進一步增加小腸內(nèi)壁與食糜接觸面積，提高機體吸收利用營養(yǎng)物質(zhì)的效率。小腸絨毛延伸向下的底部就是腸道隱窩，隱窩深度降低表明腸道上皮細胞分化率增加，能夠促進腸絨毛生長[44-45]?？琢盍盏萚11]認為，籠養(yǎng)密度對雪山雞腸道菌群影響不大。張蒙等[12]研究表明，飼養(yǎng)密度對大午金鳳商品代蛋雛雞十二指腸、空腸以及回腸相對長度無顯著影響。本試驗中，HSD組較LSD組和MSD組有降低空腸絨毛高度/隱窩深度的趨勢，3組之間其他腸道組織形態(tài)指標均無顯著差異，可能是因為飼養(yǎng)密度增大對機體產(chǎn)生的應(yīng)激對蛋雞腸道組織形態(tài)影響不大，但是否對腸道長度、菌群平衡、消化酶活性等產(chǎn)生影響還需通過進一步試驗研究。

4 結(jié) 論

在籠養(yǎng)條件下，高飼養(yǎng)密度可在一定程度上降低蛋雞的生產(chǎn)性能、羽毛覆蓋程度、蛋殼質(zhì)量、抗氧化和免疫功能，中、低飼養(yǎng)密度蛋雞各測定指標均差別不大，但低飼養(yǎng)密度時籠內(nèi)空間利用率低，結(jié)合生產(chǎn)效益，本試驗條件下籠養(yǎng)蛋雞宜采用中密度(470 cm2/只)飼養(yǎng)模式。