覃翠遠(yuǎn)

（廣西貴港市覃塘區(qū)覃塘街道農(nóng)業(yè)農(nóng)村中心，廣西貴港 537121）

動(dòng)物檢疫作為全全面保證動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品安全重要措施，動(dòng)物檢疫基本前提需全面保證采樣工作，正式采樣過(guò)程中需嚴(yán)格依照相關(guān)規(guī)范和要求實(shí)施，保證采樣質(zhì)量可靠，從中選取有代表性的病變組織，對(duì)其進(jìn)行規(guī)范檢測(cè)。

1 動(dòng)物檢查材料的采集和處理

1.1 供病原學(xué)檢查材料的采集、處理

供微生物學(xué)檢查材料采集包含的內(nèi)容較多，常見的有以下幾點(diǎn)：（1）血液。采血部位建議選取頸靜脈或尾靜脈，家禽從翅靜脈或心臟，死亡動(dòng)物一般建議從右心房進(jìn)行采血，正常狀況下，大、中動(dòng)物采血量建議控制在10 ml，小動(dòng)物和家禽控制在3～5 ml。（2）分泌物和滲出物?？谇弧⒈乔坏葘?shí)際分泌物建議選取滅菌棉球進(jìn)行蘸?。谎适车婪置谖?，正式采樣前需禁食12 h，食道探子刮??；尿液實(shí)際排尿時(shí)采集或用導(dǎo)尿管進(jìn)行采取，常取30～50 ml。（3）淋巴結(jié)。淋巴結(jié)連帶周圍相關(guān)脂肪進(jìn)行整體性采集。

供寄生蟲檢查材料的采集、處理。正式采集血液時(shí)主要從耳靜脈完成采集工作，第一時(shí)間制作相應(yīng)的標(biāo)本；陰道分泌物選用棉擦拭采取，糞便檢查材料的獲取主要通過(guò)直腸或采集新排出的糞便。

1.2 供血清血檢查材料的采集、處理

1.2.1 血清采集處理

正式采血過(guò)程中需結(jié)合動(dòng)物實(shí)際狀況進(jìn)行分析，針對(duì)大中頭動(dòng)物每頭應(yīng)超過(guò)10 ml，家禽自身采集一般需超過(guò)3 ml，建議選用自然析出的學(xué)清，正式制備過(guò)程中血清若處于1周內(nèi)完成檢測(cè)，應(yīng)及時(shí)將其做好冷藏，將其實(shí)際溫度控制于4℃，若需存儲(chǔ)時(shí)間周期較長(zhǎng)，一般將其控制在-30℃凍結(jié)。

1.2.2 抗原

抗原材料采集、處理方法等均與微生物學(xué)檢查材料程序相統(tǒng)一。

1.3 供病理組織學(xué)檢查材料采集、處理

1.3.1 選材

材料選取主要需結(jié)合實(shí)際狀況，嚴(yán)格依照相關(guān)規(guī)范和要求實(shí)施，一般需選取發(fā)生病變與健康部位銜接處組織，關(guān)鍵性病變部位應(yīng)適當(dāng)多選取幾塊，精準(zhǔn)、客觀評(píng)析整個(gè)病變實(shí)際發(fā)展全過(guò)程，若處于同一個(gè)器官存在多種病變，建議分類進(jìn)行采集。

1.3.2 固定

供石蠟切片使用的組織切好后，充分利用清水進(jìn)行沖洗血污及時(shí)浸入固定液內(nèi)，但胃腸、膽囊等嚴(yán)禁用水沖洗。正常狀況下固定液包含福爾馬林溶液、酒精等，用量應(yīng)是病料體積5～10倍，固定時(shí)間通常為12～14 h。若應(yīng)進(jìn)行長(zhǎng)期存儲(chǔ)，歷經(jīng)12～24 h后更換1次固定液。

2 動(dòng)物檢疫技術(shù)分析

2.1 病理學(xué)檢查技術(shù)

2.1.1 病理剖檢檢查技術(shù)

正常狀況下動(dòng)物疾病檢測(cè)方法無(wú)法實(shí)現(xiàn)疫病確診的目標(biāo)，無(wú)法精準(zhǔn)性掌握動(dòng)物死亡核心因素，需聯(lián)合病理學(xué)檢查相關(guān)技術(shù)使用。實(shí)際病理解剖檢查過(guò)程中，需積極掌握尸體實(shí)際剖檢基本要求，體現(xiàn)在以下幾方面：

（1）解剖前檢查。正式解剖之前需系統(tǒng)性檢查尸體體表相關(guān)特征，以及是否存在異常狀況，進(jìn)一步排除各類惡性傳染??；患炭疽病動(dòng)物及其相關(guān)尸體，嚴(yán)禁進(jìn)行剖檢。解剖時(shí)間一般需越早越好，建議處于白天進(jìn)行剖檢，實(shí)際剖檢數(shù)量需超過(guò)5只以上，大中動(dòng)物至少應(yīng)剖檢3頭。

（2）內(nèi)外部檢查。外部檢查主要體現(xiàn)在尸體變化、皮膚、天然孔等；內(nèi)部實(shí)際檢查主要體現(xiàn)在皮下檢查、內(nèi)臟器官的檢查，特別注意的是，應(yīng)積極對(duì)病變或病變特征，精準(zhǔn)性判定病變實(shí)際性質(zhì)。

（3）剖檢記錄。記錄內(nèi)容要求應(yīng)保證完整、客觀和真實(shí)，記錄需做好全過(guò)程記錄，病變描述客觀需精準(zhǔn)性，呈現(xiàn)組織器官自身實(shí)際變化[1]。

2.1.2 病理組織學(xué)檢查

病理組織學(xué)檢查主要是從源頭補(bǔ)充人們?nèi)庋蹤z查存在的不足，可進(jìn)一步提升整個(gè)病變產(chǎn)生的性質(zhì)，從本質(zhì)層面精準(zhǔn)確診疫病，有的放矢開展治療。優(yōu)勢(shì)針對(duì)腫瘤定性，腦組織發(fā)生病變具有較高的檢查優(yōu)勢(shì)，一般主要包含以下幾方面：

（1）石蠟切片。組織離開機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組織腐敗，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。優(yōu)點(diǎn)：組織細(xì)胞形態(tài)清晰；切片可長(zhǎng)期保存，供病理診斷及復(fù)察，并可利用蠟塊作其他項(xiàng)目的回顧性研究；可以切（2～3 m）的薄片，片子薄而均勻，無(wú)皺褶。實(shí)際操作過(guò)程中包含多個(gè)操作環(huán)節(jié)，不僅包含取材、固定、洗滌等環(huán)節(jié)，而且涵蓋脫水、透明、透蠟等環(huán)節(jié)。

（2）蘇木素-伊紅染色法。蘇木素伊紅染色法最為使用頻次較高的方法，具體務(wù)實(shí)中受多方面因素的干擾，需進(jìn)一步重新染片，建議需利用一種較為高效、簡(jiǎn)介的方式，從本質(zhì)層面提高診斷時(shí)間，可利用此種方法，自身實(shí)用性較強(qiáng)。細(xì)胞涂片或細(xì)胞甩片的制備：對(duì)于貼壁細(xì)胞，可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中，讓培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)于玻片上，然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5 min。對(duì)于懸浮細(xì)胞，用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后，離心1000 r/min收集細(xì)胞，用PBS洗2次，收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×105 /ml，涂片或用離心甩片，用4%多聚甲醛固定5 min。

2.2 病原學(xué)檢查技術(shù)

2.2.1 細(xì)菌性傳染病病原檢查

針對(duì)細(xì)菌性傳染病病原檢查方法較多，不同方法使用原理、特征等存在較大差異性，需充分結(jié)合實(shí)際狀況，嚴(yán)格依照相關(guān)規(guī)范和要求進(jìn)行操作，包含以下幾個(gè)方面方法：

（1）顯微鏡檢查法。正式檢查過(guò)程中，顯微鏡檢查方法較為常用，可將其病料涂抹至均勻涂片上，放置于室內(nèi)溫度下自然干燥，若為細(xì)菌培養(yǎng)物涂片火焰進(jìn)行固定。染色水洗后涂片標(biāo)本，將其利用吸水紙進(jìn)行吸干，需注意應(yīng)嚴(yán)禁進(jìn)行磨擦，亦或處于酒精燈火焰遠(yuǎn)端進(jìn)行烘干，內(nèi)部加入相應(yīng)的香柏油，充分利用油浸鏡仔細(xì)觀察細(xì)菌自身實(shí)際形態(tài)結(jié)構(gòu)和染色特性。

（2）培養(yǎng)檢查法。培養(yǎng)檢查法主要包含兩種方法，固體培養(yǎng)基上實(shí)際菌落形狀檢查，其菌落自身大小、形狀及表面形狀因菌種存在較大差異性，所以菌落實(shí)際特征作為精準(zhǔn)鑒別細(xì)菌關(guān)鍵依據(jù)；液體培養(yǎng)基上方實(shí)際液體性狀精細(xì)化觀察，細(xì)菌放置于實(shí)際液體上可發(fā)生渾濁、沉淀等現(xiàn)象。

（3）生化試驗(yàn)。生化試驗(yàn)基本原理為，積極選用生物化學(xué)方法，動(dòng)態(tài)化檢測(cè)細(xì)菌處于人工培養(yǎng)繁殖過(guò)程中是否存在新陳代謝產(chǎn)物，其屬于一類定性檢測(cè)方法。

2.2.2 病毒傳染病病原檢查

病毒實(shí)際檢查方法存在較大差異性，包涵體檢查主要包含狂犬病、犬瘟熱病毒；病毒培養(yǎng)性狀觀察，針對(duì)雞新城疫病毒，應(yīng)積極判定雞胚全身皮膚是否存在出血點(diǎn)，雞痘病毒判定其痘斑病變，積極分析細(xì)胞病變，如細(xì)胞變形皺縮、胞漿內(nèi)產(chǎn)生顆粒等。

2.2.3 寄生蟲病原檢查

寄生蟲病原檢查主要包含兩大方面，即蟲卵檢查法、蟲體檢查法，蟲卵檢查法主要包含直接涂片鏡檢、集卵法檢查。蟲體檢查法主要包含以下3種方式：

（1）蠕蟲蟲體檢查方法。幼蟲檢查方法主要是處于低倍鏡下精細(xì)化觀察液體內(nèi)部活體實(shí)際幼蟲；成蟲檢查方法主要通過(guò)肉眼觀察其自身實(shí)際形態(tài)特征。

（2）蜘蛛昆蟲蟲體檢查法。螨蟲實(shí)際檢查主要是病料放置于載玻璃片上，滴加數(shù)滴煤油，上方覆蓋相應(yīng)的載玻片，利用手搓動(dòng)兩玻片促使其皮屑粉碎，進(jìn)一步做好鏡檢工作。針對(duì)蜱等昆蟲檢查建議選取肉眼檢查方法。

（3）原蟲蟲體檢查法。原蟲多為單細(xì)胞寄生蟲，正常狀況下不可見，需通過(guò)使用顯微鏡進(jìn)行檢查。

3 免疫學(xué)檢查技術(shù)

3.1 血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)

當(dāng)下血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)呈現(xiàn)為多元化，可充分使用抗原抗體內(nèi)已經(jīng)獲知的方法檢測(cè)未知的另一方，進(jìn)一步達(dá)到檢疫目標(biāo)。實(shí)際檢測(cè)方法包含以下幾個(gè)方面：

3.1.1 凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)包含多種內(nèi)容，如直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)、血凝和雪凝抑制試驗(yàn)，其中直接凝集反應(yīng)一般適用于布氏桿菌和豬傳染性萎縮性鼻炎成效較佳；雞白痢、雞支原體病主要為全血平板凝集反應(yīng)。間接凝集反應(yīng)其基本應(yīng)用原理為，利用已知抗原基于相應(yīng)載體上判定其抗體，其多適用于豬細(xì)小病毒病、牛日本血吸蟲病等檢測(cè)；血凝和雪凝抑制試驗(yàn)，部分病毒能選擇性凝集部分動(dòng)物的紅細(xì)胞，將此類現(xiàn)象稱之為血凝，處于相應(yīng)病毒懸液內(nèi)適量加入特異性抗體并保持一段時(shí)間，將紅細(xì)胞加入其中，紅細(xì)胞凝集被抑制，稱之為紅細(xì)胞凝集抑制反應(yīng)[2]。

3.1.2 標(biāo)記抗體技術(shù)

結(jié)合抗原抗體結(jié)合的特異性，以及標(biāo)記分子自身敏感性的診斷檢測(cè)技術(shù)，主要包含兩種類型：一種是酶標(biāo)記抗體技術(shù)。其適用于豬偽狂犬病、豬弓形蟲病、禽白血病等診斷的方法，最為典型的特征是簡(jiǎn)便、快速、敏感，適合進(jìn)行大批量樣品檢測(cè)；另一種是熒光標(biāo)記抗體技術(shù)，主要用于抗原的定位、定性，該技術(shù)自身優(yōu)勢(shì)在于特異性強(qiáng)、敏感度較高。

3.2 變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)

變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)多用于部分慢性傳染病檢疫和監(jiān)測(cè)，具有較佳的成效，尤其是動(dòng)物群體性檢疫等，作為一類檢疫牛結(jié)核病檢疫、馬鼻疽病的常規(guī)方法。

4 臨診檢疫技術(shù)

4.1 群體檢疫

群體檢疫主要是指對(duì)待檢動(dòng)物群體進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢疫，群體檢疫通?？蓜澐譃?種類型，即靜態(tài)觀察、動(dòng)態(tài)觀察和飲食觀察。

4.1.1 靜態(tài)觀察

靜態(tài)觀察主要是指動(dòng)物處于安靜休息狀態(tài)，軀體處于放松狀態(tài)，觀察其自身站立、睡臥等姿勢(shì)、精神狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況等基本活動(dòng)現(xiàn)象。需強(qiáng)調(diào)的是，應(yīng)積極注意是否發(fā)生異常站立、睡臥姿勢(shì)，是否發(fā)生咳嗽、喘息、呻吟等。

4.1.2 動(dòng)態(tài)化觀察

通過(guò)上述靜態(tài)觀察后，需將被檢動(dòng)物進(jìn)行驅(qū)趕，精細(xì)化觀察其自然活動(dòng)和驅(qū)趕活動(dòng)，應(yīng)將重點(diǎn)置于起立、運(yùn)動(dòng)姿勢(shì)和步態(tài)、精神狀態(tài)，應(yīng)進(jìn)一步注意是否存在不愿起立、步態(tài)蹣跚、曲背弓腰等態(tài)勢(shì)。

4.1.3 飲食觀察

飲食觀察核心作用在于檢查動(dòng)物自身食欲和口腔疾病，動(dòng)態(tài)化觀察動(dòng)物自然采食飲水動(dòng)作，亦或有意少給食物看其搶食行為，從中發(fā)現(xiàn)不食不飲、少食少飲的動(dòng)物。充分依托群體性檢疫，可第一時(shí)間從大群動(dòng)物內(nèi)部精準(zhǔn)篩選存在病態(tài)的動(dòng)物，將其進(jìn)行及時(shí)隔離展開個(gè)體化檢疫工作。

4.2 個(gè)體檢疫

個(gè)體檢疫作為一類臨診檢查工作，其實(shí)際針對(duì)主體目標(biāo)為群體檢疫呈現(xiàn)的可疑病態(tài)動(dòng)物，對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)化檢查。若群體檢疫過(guò)程中并未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的病態(tài)動(dòng)物，亦可抽查其中5%～20%的動(dòng)物作為個(gè)體檢疫，若抽查發(fā)現(xiàn)實(shí)際檢疫主體目標(biāo)，再抽查10%，有必要需對(duì)全群動(dòng)物進(jìn)行逐一復(fù)查。個(gè)體檢疫實(shí)際方法包含以下幾個(gè)方面：

（1）視診。視診主要是從動(dòng)物自身精神狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)程度、姿勢(shì)與運(yùn)動(dòng)、皮膚被毛等狀況，以此判定是否存在疾患。

（2）觸診。主要通過(guò)耳根、四肢末端、體表皮膚等進(jìn)行診斷。

（3）聽診。從動(dòng)物自身叫聲進(jìn)行判定，從中及時(shí)篩查異常聲音，通過(guò)咳嗽精準(zhǔn)性判定動(dòng)物是否存在呼吸器官病變，干咳通常多見于炎癥、濕咳多于支氣管和肺部炎癥。

（4）測(cè)量體溫。一般處于健康狀態(tài)的動(dòng)物，其通常早晨溫度較低，處于午后略高，實(shí)際波動(dòng)范圍處于0.5℃～1℃，動(dòng)物檢疫中多按照體溫實(shí)際升高狀況，進(jìn)而判定動(dòng)物發(fā)熱程度，估測(cè)疫病嚴(yán)重程度和可疑范圍[3]。

5 提高動(dòng)物防疫檢疫工作水平措施

5.1 加強(qiáng)資源籌措，強(qiáng)化防疫檢疫設(shè)備管理

防疫設(shè)備作為動(dòng)物防疫工作實(shí)施的前提，我國(guó)從資金、政策等方面給予強(qiáng)有力的支撐，應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大資金來(lái)源，為防疫檢疫基礎(chǔ)設(shè)施完善奠定良好的基礎(chǔ)。同時(shí)，當(dāng)?shù)卣畱?yīng)充分結(jié)合實(shí)際狀況，充分將此類資金納入實(shí)際預(yù)算中，并及時(shí)引入先進(jìn)檢測(cè)設(shè)備，推動(dòng)檢疫防疫工作高質(zhì)量實(shí)施。

5.2 健全動(dòng)物防疫檢疫工作管理機(jī)制

相關(guān)部門應(yīng)及時(shí)將各部門職責(zé)精準(zhǔn)劃分，并動(dòng)態(tài)化將其落于實(shí)處，利用信息技術(shù)構(gòu)建相應(yīng)的平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)部信息數(shù)據(jù)共享和交流。

此外，還需制定完善的考評(píng)制度。針對(duì)防疫檢疫工作開展成效，為積極調(diào)動(dòng)工作人員積極性，應(yīng)給予表現(xiàn)優(yōu)異人員獎(jiǎng)勵(lì)，針對(duì)態(tài)度急哦觀念缺少正確的人員，應(yīng)動(dòng)態(tài)化進(jìn)行正確引導(dǎo)并給予懲處，調(diào)動(dòng)人員自身工作積極性，從本質(zhì)層面促進(jìn)檢疫工作高效化落實(shí)[4]。

5.3 完善防疫檢疫監(jiān)督程序，促進(jìn)防疫檢疫管理規(guī)范化

健全的防疫檢疫監(jiān)督機(jī)制，為工作人員各環(huán)節(jié)工作推進(jìn)提供導(dǎo)向，要求防疫人員處于具體務(wù)實(shí)工作中，始終以我國(guó)基本相關(guān)規(guī)范和要求，深層次分析動(dòng)物疫病成因、潛在隱患等，并第一時(shí)間將其上報(bào)于上級(jí)部門，構(gòu)建完善的檢疫網(wǎng)，從不同層級(jí)完成動(dòng)物品種、數(shù)量全方位登記，對(duì)其做好動(dòng)態(tài)化管控。應(yīng)顯著增強(qiáng)養(yǎng)殖人員自身法律意識(shí)，擴(kuò)展多個(gè)途徑加大宣傳力度，持續(xù)性將防疫政策完成推廣，顯著提升養(yǎng)殖者防范意識(shí)，處于防疫檢疫工作中為全方位配合防疫人員，從本質(zhì)層面減少動(dòng)物產(chǎn)生疫病[5]。

5.4 加強(qiáng)動(dòng)物防疫檢疫工作隊(duì)伍建設(shè)

檢疫防疫人員自身綜合素養(yǎng)直接關(guān)乎防疫檢疫工作實(shí)施成效，應(yīng)從多方面采取相應(yīng)的措施，進(jìn)一步加強(qiáng)防疫檢疫人員隊(duì)伍建設(shè)，不僅需從本質(zhì)層面保證其數(shù)量實(shí)際需求，還應(yīng)開展多方面培訓(xùn)工作，提升人員自身素養(yǎng)，增強(qiáng)人員自身薄弱點(diǎn)，不斷增強(qiáng)防疫檢疫人員專業(yè)素養(yǎng)。同時(shí)，邀請(qǐng)動(dòng)物防疫專家實(shí)際入駐現(xiàn)場(chǎng)提供相應(yīng)指導(dǎo)，第一時(shí)間做好解疑答惑工作，增強(qiáng)防疫檢疫工作人員自身現(xiàn)場(chǎng)解決問(wèn)題水平。

6 結(jié)束語(yǔ)

檢疫作為避免動(dòng)物疾病大面積爆發(fā)、保證廣大群眾身體健康的重要舉措，在樣品采集操作環(huán)節(jié)需嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)規(guī)范和要求，相關(guān)工作人員應(yīng)積極結(jié)合實(shí)際狀況，不斷提高樣品采集水平，按照不同的情況選擇合適的檢疫技術(shù)，保證檢疫工作落于實(shí)處，避免疫病發(fā)生和蔓延。