裴 明，胡曉玥

（1.太原市衛(wèi)生學(xué)校，山西 太原 030012；2.山西醫(yī)科大學(xué)，山西 晉中 030600）

實(shí)驗(yàn)室生物安全是指實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實(shí)驗(yàn)室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實(shí)驗(yàn)室生物安全責(zé)任的要求。根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)室的操作內(nèi)容和危害程度，應(yīng)在不同等級的生物安全實(shí)驗(yàn)室開展實(shí)驗(yàn)活動(dòng)[1]。作為一名從事病原生物學(xué)與免疫學(xué)基礎(chǔ)教學(xué)和科研的教師，在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)或課題研究過程中，如何加強(qiáng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)室安全意識培養(yǎng)，避免生物毒性因子的暴露、有毒化學(xué)藥品的泄露，有效阻止其向周圍環(huán)境和人群擴(kuò)散，顯得尤為重要。因此，筆者擬從實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后幾方面談?wù)剬訌?qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全教育的思考。

1 實(shí)驗(yàn)前加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)安全意識教育

1.1 加強(qiáng)新生入學(xué)安全教育

為打造平安和諧的校園，每年新生入學(xué)教育的安全教育課程中，都將實(shí)驗(yàn)室安全列入其中，這也是新生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的第一課。教師通過介紹國內(nèi)外高校發(fā)生的實(shí)驗(yàn)室安全事故，使學(xué)生認(rèn)識到出現(xiàn)事故的主要原因是違反實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程或?qū)嶒?yàn)操作不當(dāng)，應(yīng)引起高度關(guān)注。實(shí)驗(yàn)室安全事故中爆炸與火災(zāi)占比最高，第二是化學(xué)有毒藥品的泄露，第三是生物安全，第四是中毒。這些事故離我們很近，時(shí)刻都有可能發(fā)生在我們身邊，因此學(xué)生要把實(shí)驗(yàn)室安全意識扎根心中。

1.2 認(rèn)真學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)室安全知識，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度

大多數(shù)學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前未經(jīng)過系統(tǒng)的安全教育培訓(xùn)，缺乏必要的實(shí)驗(yàn)室安全知識。學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，要了解國家的有關(guān)法律法規(guī)，如《國家危險(xiǎn)廢物名錄》《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊》等，由于實(shí)驗(yàn)課時(shí)的限制，這部分內(nèi)容可在課前自學(xué)[2]。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，要認(rèn)真學(xué)習(xí)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室的安全管理制度、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的使用規(guī)定、實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)等。做實(shí)驗(yàn)前組織考核，可以通過學(xué)習(xí)通App、問卷星等，以選擇題方式進(jìn)行測試，合格者方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)。通過學(xué)習(xí)和考核，學(xué)生的實(shí)驗(yàn)室安全意識大大增強(qiáng)。

另外，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度。在儀容儀表上，首先要穿實(shí)驗(yàn)服，摘除首飾，不留長指甲，長發(fā)應(yīng)扎好，避免在實(shí)驗(yàn)過程中長發(fā)遮蓋眼睛，用手整理時(shí)引發(fā)危險(xiǎn)或使用酒精燈時(shí)燒著頭發(fā)；在實(shí)驗(yàn)室不穿露腳趾的鞋，防止試劑直接滴灑在皮膚上；進(jìn)行特殊實(shí)驗(yàn)時(shí)要求學(xué)生穿隔離衣并戴口罩、護(hù)目鏡、防毒面具。在行為規(guī)范上，在實(shí)驗(yàn)室不吸煙、不吃零食、不化妝打扮、不戴隱形眼鏡等；實(shí)驗(yàn)臺上不放書包、衣服等與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品。

1.3 實(shí)驗(yàn)教師要不斷提升個(gè)人素質(zhì)

實(shí)驗(yàn)教師作為實(shí)驗(yàn)室的第一責(zé)任人，不僅要具備豐富的理論知識及熟練的操作技能，還要具有學(xué)習(xí)新知識的興趣和能力[3]。學(xué)校要鼓勵(lì)和組織實(shí)驗(yàn)教師參加有關(guān)實(shí)驗(yàn)室生物安全的交流、培訓(xùn)活動(dòng)，不斷更新實(shí)驗(yàn)教師的實(shí)驗(yàn)室安全知識，提高綜合業(yè)務(wù)素養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)教師在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)、管理、合理使用過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，也是保證學(xué)生實(shí)驗(yàn)安全的重要力量。

2 實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范

2.1 根據(jù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱合理安排實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

學(xué)校根據(jù)實(shí)驗(yàn)室和學(xué)生實(shí)際情況安排實(shí)驗(yàn)教學(xué)，既要保證實(shí)驗(yàn)課的開出率，又要考慮到學(xué)生實(shí)驗(yàn)的安全性。教研室授課教師和實(shí)驗(yàn)教師集體備課，對實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行調(diào)整，采取逐層遞進(jìn)原則，首先設(shè)置一些基本的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，其次設(shè)置綜合性實(shí)驗(yàn)，最后設(shè)置創(chuàng)新設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，在保證學(xué)生掌握實(shí)驗(yàn)室基本操作技能和實(shí)驗(yàn)規(guī)范的基礎(chǔ)上，注重培養(yǎng)其實(shí)踐能力和創(chuàng)新能力。

在病原微生物實(shí)驗(yàn)室開設(shè)的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)包括細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查法、培養(yǎng)基的配制、細(xì)菌的分離與培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)等；綜合性實(shí)驗(yàn)主要是細(xì)菌的生化實(shí)驗(yàn)和鑒定；設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)材料選擇上盡量選擇容易得到的、安全性能高的、學(xué)生感興趣的材料，讓學(xué)生自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟、流程，不僅可以大大提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)積極性，還能加強(qiáng)學(xué)生對理論知識的理解。如在人體天然防御功能實(shí)驗(yàn)中，可選擇學(xué)生自己的唾液作為實(shí)驗(yàn)材料，做唾液中溶菌酶的殺菌實(shí)驗(yàn)。對一些操作時(shí)間長、難度大的實(shí)驗(yàn)，可以選取部分內(nèi)容對學(xué)生進(jìn)行示范教學(xué)，這就要求教師在實(shí)驗(yàn)前做更多準(zhǔn)備工作和預(yù)實(shí)驗(yàn)，也可選擇一些認(rèn)真負(fù)責(zé)的學(xué)生參與進(jìn)來和實(shí)驗(yàn)教師共同完成，這對學(xué)生來說是一個(gè)很好的鍛煉機(jī)會，對實(shí)驗(yàn)教師來說也減輕了工作量。對有可能造成學(xué)生感染的實(shí)驗(yàn)，可以采用錄像教學(xué)或虛擬實(shí)驗(yàn)方式，不但彌補(bǔ)了實(shí)驗(yàn)課時(shí)的不足，還開闊了學(xué)生的視野。

2.2 在實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)無菌操作意識

病原生物實(shí)驗(yàn)室與其他生物實(shí)驗(yàn)室有很大不同，有微生物培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)范進(jìn)行。如在進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)過程中，接種前要對接種環(huán)進(jìn)行燒灼滅菌處理（有可能被環(huán)境中的微生物污染），接種過細(xì)菌的接種環(huán)一定要再次燒灼滅菌后再放回接種環(huán)架（避免接種環(huán)上殘留的細(xì)菌污染環(huán)境）。雖然實(shí)驗(yàn)室一般選取的菌種標(biāo)本是安全的，但學(xué)生在操作時(shí)可能由于不熟練導(dǎo)致菌種被污染，而實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本和培養(yǎng)物均有可能具有傳染性，要做好個(gè)人防護(hù)措施。實(shí)驗(yàn)室所有用過的樣本、培養(yǎng)物和廢棄物應(yīng)假定有傳染性，要以安全方式進(jìn)行處理。任何使形成氣溶膠的危險(xiǎn)性上升的操作都必須在生物安全柜里進(jìn)行，盡可能使氣溶膠或氣霧的形成控制在最小限度，有害氣溶膠不得直接排放[4]。盡量避免使用尖銳物品（如一次性手術(shù)刀、針頭、玻璃等），使用后的利器應(yīng)放入利器盒中，不能隨意丟棄。

2.3 培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)態(tài)度，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣

良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣是實(shí)驗(yàn)科研工作的重要組成部分，是減少實(shí)驗(yàn)事故的有力保障[5]?？茖W(xué)實(shí)驗(yàn)都是非常嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的，容不得半點(diǎn)馬虎，實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格要求自己。

在使用水電的時(shí)候一定不要離開，萬一要離開，應(yīng)請其他人幫忙照看；實(shí)驗(yàn)過程中要按實(shí)驗(yàn)步驟逐步完成，不要為了省時(shí)省事而同時(shí)進(jìn)行幾項(xiàng)不可能完成的事情；隨身帶上記號筆，養(yǎng)成隨時(shí)做記錄的好習(xí)慣，每次記錄的數(shù)據(jù)不能隨意亂放，要及時(shí)分析；新配制好的試劑一定要及時(shí)做好標(biāo)記，加入試劑前一定要混勻，以免放置時(shí)間過長試劑濃度不均，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；在使用天平進(jìn)行測量時(shí)，不能直接把測量的藥品放在托盤里，應(yīng)該在托盤里放上濾紙，再把藥品放在濾紙上；使用移液器移取溶液時(shí)要用洗耳球，禁止用口吹吸，不能甩移液管，防止移液管中的酸或堿等液體甩出傷到自己或他人；玻璃管冷凝管上套膠塞時(shí)一定要小心，不要用力過猛導(dǎo)致冷凝管破碎，扎傷皮膚。

使用有機(jī)高危溶劑或鹽酸等有刺激性氣味的物品時(shí)，一定要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)期間要開排風(fēng)扇或開窗通風(fēng)；硫酸、硝酸等氧化性酸若不小心滴在身上，要用清水清洗，然后用碳酸氫鈉液洗滌，不要因?yàn)闈舛鹊投鲆?，因?yàn)殡S著水分的蒸發(fā)硫酸的濃度會增高，會使原來的稀硫酸變成濃硫酸[6]。

加熱試管一定不能集中加熱，試管口不得對準(zhǔn)人，嚴(yán)防液體過熱而沖出試管[7]；未經(jīng)處理的有害微生物或有害化學(xué)品，不能直接向下水道排放，有可能污染周圍環(huán)境；用移液槍頭吸完后，應(yīng)當(dāng)及時(shí)取下來，以免忙亂時(shí)又用同一槍頭吸取其他試劑；移液槍千萬不能用于揮發(fā)性有機(jī)溶劑的吸取。

在進(jìn)行革蘭氏染色過程中，每一步染色步驟都有嚴(yán)格的時(shí)間規(guī)定，時(shí)間不能延長也不能縮短，否則會出現(xiàn)錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。染色過程中使用的載玻片、蓋玻片要先放入消毒液里消毒處理，不能直接在水龍頭下沖洗，不能直接丟入生活垃圾中，防止有活的微生物存在污染環(huán)境。實(shí)驗(yàn)中使用過的玻璃器皿要及時(shí)浸泡、清洗、晾干，為下次實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要將實(shí)驗(yàn)臺上的實(shí)驗(yàn)試劑統(tǒng)一放回原來的位置。對工作臺面進(jìn)行清潔消毒，脫去手套后用液體肥皂和流動(dòng)水按七步洗手法洗手，脫去實(shí)驗(yàn)服，確保水、電、門窗全都關(guān)好后方可鎖門離開實(shí)驗(yàn)室。這些看起來都微不足道，但一旦出現(xiàn)事故可能會造成不可估量的損失。良好實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的養(yǎng)成對于高素質(zhì)人才培養(yǎng)非常重要，不僅可以避免很多意外事故的發(fā)生，還會對以后的生活、工作產(chǎn)生潛移默化的影響，使學(xué)生受益終身[8]。

2.4 實(shí)驗(yàn)過程中突發(fā)事件的處理

（1）在生物實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常要注意水、火、電的安全，水龍頭不能有滴漏現(xiàn)象，不能用濕手碰觸電器。在明火周圍不能放易燃易爆物品，在使用電爐加熱配制培養(yǎng)基時(shí)燒杯、燒瓶一定要墊上石棉網(wǎng)，防止容器破碎液體外流引起火災(zāi)，加熱容器中的液面不得超過2/3，防止液體噴出，電爐短路。使用過程中操作人員不得離開，直至加熱完畢關(guān)閉電源電爐絲冷卻后方可離開。冰箱中不能放置易揮發(fā)的溶劑，否則有爆炸的風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室突發(fā)火災(zāi)（酒精燈里的酒精著火、電爐著火）的處理辦法，可以通過消防演練形式讓學(xué)生熟悉。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，要檢查鍋內(nèi)水量是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，防止燒干，加熱前檢查鍋蓋是否密封良好，還要定期檢查壓力閥門是否堵塞。干烤箱消完毒后一定要溫度降下來方可打開箱門，并帶上厚手套防止?fàn)C傷，取出所需物品后及時(shí)關(guān)好箱門。在使用離心機(jī)時(shí)，要選擇重量相等的離心管，對稱放置；離心的液體不得超過離心體積的2/3，防止液體泄漏腐蝕轉(zhuǎn)頭，發(fā)生危險(xiǎn)；離心機(jī)工作過程中有異常聲響時(shí)立刻切斷電源，等離心機(jī)停止運(yùn)轉(zhuǎn)后再靠近。這些常識可以小視頻或Flash動(dòng)畫形式發(fā)送給學(xué)生，讓學(xué)生提前觀看，課堂上檢查學(xué)生掌握情況。

（2）實(shí)驗(yàn)過程中如有試劑濺出、有明顯或潛在的暴露感染性材料，應(yīng)及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)教師，不要擅作主張自行處理，根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行消毒或立即按照意外事故應(yīng)急預(yù)案的程序處理。

2.5 大型實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的使用規(guī)范化

實(shí)驗(yàn)室大型儀器設(shè)備必須有專人管理，儀器負(fù)責(zé)人在使用前需經(jīng)專門培訓(xùn)，考核合格方可操作使用，未經(jīng)允許任何人不準(zhǔn)私自操作運(yùn)行。儀器使用過程中不得私自離開，當(dāng)儀器出現(xiàn)報(bào)警時(shí)能熟練處理，能做到安全斷電、斷水、斷氣，徹底消除因儀器故障出現(xiàn)的安全隱患。儀器使用完要按正確操作關(guān)機(jī)，切斷電源。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將實(shí)驗(yàn)儀器恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)前的狀態(tài)，將儀器內(nèi)的樣品及時(shí)取出進(jìn)行安全處理，嚴(yán)禁在儀器內(nèi)存留實(shí)驗(yàn)樣品。定期對實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行安全檢查和維護(hù)，保證實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行。教師以演示方式邊操作邊講解，學(xué)生操作時(shí)一定要有教師在旁邊指導(dǎo)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后廢棄物的處理

實(shí)驗(yàn)室工作人員要牢固樹立環(huán)保意識，熟悉國家有關(guān)環(huán)境保護(hù)的法律法規(guī)，對醫(yī)療廢物可按《醫(yī)療廢物分類目錄（2021年版）》處理。嚴(yán)格執(zhí)行國家環(huán)保制度，對進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須進(jìn)行環(huán)保方面的安全教育，使其熟悉廢棄物處理的原則和規(guī)定[9]。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室廢棄物的特點(diǎn)，做到分類收集、存放，集中處理，處理方法應(yīng)簡單、易操作，處理效率高，不需要很多投資。

（1）廢棄的消毒液，有毒、有害、有腐蝕性的試劑，過期或廢棄的藥品等，不能隨意倒入水池中，應(yīng)放在指定的地點(diǎn)分類進(jìn)行無害化處理，對于含有高濃度有機(jī)溶劑的廢液應(yīng)回收再用。對于某些數(shù)量較少、濃度較高的有毒有機(jī)物，可通入燃燒爐中供給充分的氧氣，使其完全燃燒，生成二氧化碳和水。對高濃度廢酸、廢堿液要經(jīng)中和至中性時(shí)排放。少量有毒氣體可通過通風(fēng)設(shè)備排出室外，通風(fēng)管道應(yīng)有一定的高度，使排出的氣體能讓空氣稀釋。產(chǎn)生毒氣量大時(shí)，必須經(jīng)過吸收處理才能排出。如氮、硫、磷等酸性氧化物氣體可用導(dǎo)管通入堿液中，使其被吸收后排出[10]。自己處理不了的廢棄物可收集后交由具備相應(yīng)資質(zhì)的醫(yī)療廢物處置單位或危險(xiǎn)廢物處置單位進(jìn)行處置。

（2）感染性廢物，如廢棄的細(xì)菌病毒標(biāo)本、培養(yǎng)使用后的細(xì)菌、細(xì)胞、病毒，病原體培養(yǎng)基和污染的試管，菌種和毒種保存液及其容器，應(yīng)及時(shí)使用壓力蒸汽滅菌鍋進(jìn)行消毒滅菌處理，然后按感染性廢物收集于符合環(huán)保規(guī)定的醫(yī)療廢物包裝袋中，運(yùn)送至專門的處理地進(jìn)行焚燒或深埋。

（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物嚴(yán)禁帶出實(shí)驗(yàn)室，如狗、兔子等不能作為寵物被領(lǐng)養(yǎng)，堅(jiān)決制止實(shí)驗(yàn)人員食用經(jīng)無害化實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，活體動(dòng)物如小白鼠、青蛙、蟾蜍等實(shí)驗(yàn)后要妥善保管組織標(biāo)本，廢棄的動(dòng)物尸體、組織器官必須統(tǒng)一收集、集中存放、統(tǒng)一及時(shí)進(jìn)行處理，不得積壓在室內(nèi)亂放。不得將動(dòng)物尸體或器官隨意丟棄，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)收集于符合國家標(biāo)準(zhǔn)的醫(yī)療廢物包裝袋中，作為醫(yī)療廢棄物交由具有相關(guān)資質(zhì)的環(huán)保部門統(tǒng)一處理。

（4）損傷性廢物指能夠刺傷或割傷人體的廢棄的醫(yī)用銳器，如廢棄的金屬類銳器針頭、探針、解剖刀、手術(shù)刀，玻璃類的載玻片、蓋玻片，應(yīng)收集于符合《醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標(biāo)志標(biāo)準(zhǔn)》（HJ421）的利器盒中，利器盒達(dá)到3/4滿時(shí)，應(yīng)當(dāng)封閉嚴(yán)密，按流程運(yùn)送、貯存[11]。

習(xí)近平總書記在指導(dǎo)抗擊新冠肺炎疫情的戰(zhàn)斗中強(qiáng)調(diào)，必須從保護(hù)人民健康、保障國家安全、維護(hù)國家長治久安的高度，把生物安全納入國家安全體系[12]。突如其來的疫情使我們深刻認(rèn)識到實(shí)驗(yàn)室安全的重要性，要將實(shí)驗(yàn)室安全教育貫穿于實(shí)驗(yàn)教學(xué)的全過程，加強(qiáng)培養(yǎng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)室生物安全意識，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)室安全操作習(xí)慣，不斷提高自身的生物安全素養(yǎng)[13]，從而更好地服務(wù)社會、服務(wù)患者。