許崇友 韓 勇

1.山東省日照市東港區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，山東東港 276800；2.山東省日照市動物疫病預(yù)防控制中心，山東日照 276800

2021年8月2日，山東畜牧獸醫(yī)局印發(fā)《山東省重點動物疫病監(jiān)測凈化工作方案（2021 版）》，要求推進全省重點動物疫病監(jiān)測凈化，提高規(guī)模養(yǎng)殖場管理水平和疫病防控能力，推動動物疫病防控從穩(wěn)定控制到凈化消滅轉(zhuǎn)變。2021年10月7日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下發(fā)《關(guān)于推進動物疫病凈化的意見》，要求推進動物疫病凈化工作，力爭通過5年時間，在全國建立一批高水平的凈化場。

自非洲豬瘟在我國發(fā)生以來，種豬已成為當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)的稀缺資源，如何做好非洲豬瘟防控，對主要豬病開展凈化，提高豬群健康水平，是種豬場急需解決的問題。日照市種豬品種較多，既有國外引進品種大白長白等瘦肉型品種，又有地方優(yōu)良品種五蓮黑豬。國外大白長白等品種引入國內(nèi)后由于飼養(yǎng)環(huán)境、凈化技術(shù)等原因，PRRS、PRV、PCV、PPV 等主要疫病感染不容樂觀。五蓮黑豬是日照市的優(yōu)良地方豬種，因原產(chǎn)于日照市五蓮縣而得名，1975年命名為五蓮黑豬，屬肉脂兼用型。五蓮黑豬具有耐粗飼、繁殖力高、抗病力強、肉質(zhì)好、雜交優(yōu)勢明顯等特點[1]。五蓮黑豬作為地方豬種先后被列入1999年10月出版的《山東省畜禽品種志》，2010年5月入選山東省畜牧獸醫(yī)局公布的《山東省畜禽遺傳資源保護名錄》。20 世紀(jì)80、90年代，由于外來品種的引進和雜交改良，五蓮黑豬感染PRV、PCV、PPV 等垂直傳播病的病例逐漸增多，凈化工作刻不容緩。

為從源頭上控制疫病，保護和振興地方豬種資源，2019年起，日照動物疫病預(yù)防控制中心選擇2家五蓮黑豬種豬場，2 家國外瘦肉型大白和長白種豬場，按照國家和省的要求開展規(guī)模豬場主要疫病凈化工作，推動疫病從有效控制向凈化消滅轉(zhuǎn)變。本試驗通過3年持續(xù)監(jiān)測，了解種豬場ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 主要病原感染狀況，為凈化提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品類型和數(shù)量

選擇種豬場4 家，包括五蓮黑豬原種場2 家，國外瘦肉型大白和長白種豬場2 家。原種豬場按照置信水平95%，預(yù)期流行率3%，每次采樣不少于100 份。祖代、父母代按照置信水平95%，預(yù)期流行率6%，每次采樣不少于50 份。樣品來源每個種豬場不少于4 棟豬舍的豬只，種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬要兼顧一定比例。每頭豬采集血清、抗凝血和扁桃體，并一一對應(yīng)。

1.2 樣品采樣和處理方法

1）血清。每頭豬用促凝血管采血5 mL，室溫靜置30 min 后，3 000 r/min 離心3～5 min，取上層血清1.0～1.2 mL 放1.5 mL 離心管中，在離心管蓋上編號。

2）抗凝血。每頭豬用抗凝血管采集血3 mL，室溫靜置30 min 后，在采樣管上編號。采集抗凝血與血清樣品一一對應(yīng)。

3）扁桃體。利用扁桃體采樣器（鼻捻子、開口器和采樣槍）采樣。采樣器使用前先用3%氫氧化鈉溶液消毒，再用純凈水沖洗。首先固定活豬的上唇，用開口器打開口腔，用采樣槍采取扁桃體樣品，用滅菌牙簽挑至滅菌1.5 mL 離心管并作好標(biāo)記。采集扁桃體與血清、抗凝血樣品一一對應(yīng)。

1.3 檢測試劑

豬瘟病毒實時熒光RT-PCR 試劑盒、豬藍耳病毒實時熒光RT-PCR 試劑盒、豬圓環(huán)病毒實時熒光RT-PCR 試劑盒、豬細(xì)小病毒實時熒光RT-PCR 試劑盒購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司。豬瘟病毒抗體ELISA 試劑盒、豬偽狂犬病毒gE、gB 抗體ELISA 試劑盒、豬藍耳病毒抗體ELISA 試劑盒、豬圓環(huán)病毒抗體ELISA 試劑盒、豬細(xì)小病毒抗體ELISA 試劑盒購自武漢科前有限公司。

1.4 主要儀器設(shè)備

核酸提取儀購自西安天隆公司，實時熒光PCR儀購自美國ABI 公司，酶標(biāo)儀購自美國MD 公司，離心機購自Sigma 公司等。

1.5 方 法

1）病原檢測。采集的扁桃體樣品，提取病毒核酸，采用熒光定量RT-PCR 方法，檢測ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 病毒核酸。采集抗凝血，提取病毒核酸，采用熒光定量PCR 方法，檢測ASF。采集血清進行PRV-gE 抗體檢測。操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。

2）免疫抗體效果檢測。采集的血清進行CSF、PRRS、PRV-gB 抗體檢測，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原學(xué)監(jiān)測

1）不同年份感染情況。2019-2021年連續(xù)3年的監(jiān)測結(jié)果顯示，4 個種豬場ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 總體陽性率呈下降趨勢。4 個種豬場均未檢測到ASFV、CSFV 核酸陽性，說明ASF、CSF 在日照市種豬場得到較好凈化，凈化效果明顯。只有1 個豬場在2020年檢測到PRRSV，提示日照市種豬場PRRSV 感染風(fēng)險仍存在。PRV、PCV、PPV在2019 和2020年均全部感染，2021年雖然降為75%，但感染仍較嚴(yán)重，應(yīng)引起足夠重視（表1）。

2）各個豬場感染情況。2019-2021年連續(xù)3年監(jiān)測結(jié)果顯示，每個豬場ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 的個體陽性率呈下降趨勢，說明監(jiān)測凈化取得了較好的效果。原種場的個體陽性率總體小于祖代場，祖代的個體陽性率總體小于父母代。4 個種豬場均未檢測到ASFV、CSFV 核酸陽性，只有1 個豬場在2020年檢測到PRRSV。其中，PRV-gE、PCV、PPV 陽性率整體呈下降趨勢，但污染面仍較廣，全部種豬場均檢測到PCV、PPV 核酸陽性，感染較嚴(yán)重。其中五蓮黑豬場的PCV 和PPV 感染率較高，可能與近年來引種有關(guān)，需進一步加強凈化力度（表2）。

2.2 免疫抗體效果監(jiān)測

對采集的血清樣本進行免疫效果檢測，2019-2021年連續(xù)3年監(jiān)測結(jié)果顯示，各年份CSF、PRRS、PRV 抗體水平差距不大，合格率均超過70%，達到保護要求。CSFV 抗體水平高于PRRSV、PRV 抗體；PRV 抗體水平偏低，需要加強免疫。2018年非洲豬瘟在我國發(fā)生以來，豬場高度重視生物安全，但對CSF、PRRS、PRV 等的免疫稍有松懈，豬場主要疫病抗體水平均不高，應(yīng)引起足夠重視（表3）。

3 討 論

3.1 凈化總體情況

2018年8月，非洲豬瘟在我國部分地區(qū)暴發(fā)，對我國養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)生了巨大的沖擊[2]。非洲豬瘟沒有疫苗，需要采取嚴(yán)格的生物安全措施。2011-2018年，王琴[3]開展CSF 病原學(xué)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)健康豬群帶毒率從9.26%下降到0.7%，表明我國CSFV C 株疫苗保護效果較好，CSF 得到有效控制，具備開展凈化條件。目前我國PRRS 流行情況較復(fù)雜，部分豬場感染嚴(yán)重。王倩等[4]對2015-2018年安徽省定點豬場主要疫病病原進行檢測，發(fā)現(xiàn)PRRSV 平均陽性率為26.9%。2019-2021年連續(xù)3年日照市動物疫病預(yù)防控制中心對4 個種豬場進行監(jiān)測，均未檢測到ASF、CSF 病原，PRRS 只在2020年檢測到1 次。免疫效果監(jiān)測結(jié)果表明CSF、PRRS 抗體水平均超過70%，能夠?qū)ωi群提供較好的保護。說明經(jīng)過多年的監(jiān)測凈化，日照市種豬場ASF、CSF、PRRS 防控取得了一定成效，具備開展ASF、CSF 凈化條件。

PRV、PCV、PPV 近年來在種豬場感染較嚴(yán)重，臨床多表現(xiàn)為混合感染，且都能垂直傳播至下一代，引起母豬繁殖障礙、生長緩慢等癥狀，造成更大范圍的感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[5]。本研究結(jié)果表明，日照市種豬場PRV、PCV、PPV 感染較嚴(yán)重，尤其五蓮黑豬地方品種，個體感染率達10%以上，需要進一步采取生物安全、免疫、消毒等措施，凈化PRV、PCV、PPV。

3.2 地方品種五蓮黑豬感染較嚴(yán)重

近年來，由于國外品種的大量引入，地方品種豬感染PRV、PCV、PPV 的報道越來越多，本次監(jiān)測結(jié)果也表明，五蓮黑豬PRV、PCV、PPV 感染較嚴(yán)重，尤其是PCV，個別年份個體陽性率達到18%。PRV、PCV、PPV 是垂直傳播疫病，能通過垂直傳播感染下一代，難以根除，對保種構(gòu)成較大威脅，應(yīng)加以重視[6]。2 個五蓮黑豬場均未檢測到ASFV、CSFV、PRRSV，應(yīng)繼續(xù)做好防控。

3.3 不同代次感染情況

監(jiān)測結(jié)果表明，日照市原種群病原感染率明顯低于祖代和父母代，凈化效果較好。由于父母代豬場從祖代引種，祖代豬場從原種場引種。因此，原種群疫病狀況在動物疫病凈化中起關(guān)鍵作用。如果原種豬場疫病不加以控制凈化，將會通過引種傳播到祖代和父母代豬場，給凈化工作帶來難度。因此，動物疫病凈化要從源頭入手，以原種場為抓手，消滅源頭的傳播，才能做好疫病防控[7]。

3.4 下步工作重點

經(jīng)過3年持續(xù)監(jiān)測，4 個種豬場均未檢測到ASFV、CSFV，且豬瘟抗體水平超過70%，能夠?qū)ωi群提供較好的保護。以上條件說明日照市種豬場具備開展ASF、CSF 凈化條件。PRRS 在2020年1 個祖代場檢出病原陽性，說明日照市種豬場仍存在風(fēng)險。PRRSV 變異快，僅靠疫苗防控效果有限，需繼續(xù)采取嚴(yán)格的生物安全措施和疫苗免疫措施控制[8]。監(jiān)測結(jié)果表明，4 個種豬場PRV、PCV、PPV 目前感染嚴(yán)重，能引起母豬繁殖障礙，對豬群造成較大威脅，尤其是五蓮黑豬的PRV、PCV、PPV 陽性感染率較高，對保種構(gòu)成較大威脅，應(yīng)作為后續(xù)凈化的重點疫病。