王路路，周忠海，陳 玲，楊 陽，陳復(fù)興，孫蕾清，呂小婷，馮守信

電離輻射（ionizingradiation）是指會引起物質(zhì)電離、破壞原子或分子結(jié)構(gòu)的輻射。一般認(rèn)為，接受長時(shí)間或較高強(qiáng)度的電離輻射會危害機(jī)體健康，導(dǎo)致器官和系統(tǒng)發(fā)生病理改變，引起放射病，甚至具有誘導(dǎo)癌癥發(fā)生的可能性。近年來，電離輻射誘導(dǎo)免疫激活的現(xiàn)象逐漸引起科研人員的興趣，其潛在的控制腫瘤的作用及其機(jī)制已成為研究熱點(diǎn)。研究表明，較低劑量輻射不僅不會損害機(jī)體的免疫功能，反而能夠正向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，抑制和延緩原發(fā)或轉(zhuǎn)移性腫瘤的進(jìn)展[1，2]；上調(diào)免疫系統(tǒng)的固有和適應(yīng)性免疫能力是其重要機(jī)制之一[3]。

γδT細(xì)胞是外周血中一類獨(dú)特的T淋巴細(xì)胞群，在防御多種病原體和清除轉(zhuǎn)化細(xì)胞方面發(fā)揮著重要作用，在人外周血淋巴細(xì)胞中的比例約為1%～5%，并且以δ2細(xì)胞亞群為主，是機(jī)體具有非特異性免疫和適應(yīng)性免疫雙重效應(yīng)的免疫細(xì)胞，可通過T細(xì)胞受體依賴性地識別磷酸化抗原來活化和擴(kuò)增，發(fā)揮強(qiáng)大的抗腫瘤效應(yīng)。文獻(xiàn)調(diào)研表明，既往實(shí)驗(yàn)主要進(jìn)行以整體動物或動物細(xì)胞為模型的不同劑量電離輻射作用的研究，而電離輻射能否對人γδT細(xì)胞產(chǎn)生影響未見報(bào)道。因此，筆者擬進(jìn)行不同劑量電離輻射對人γδT細(xì)胞體外增殖及細(xì)胞毒活性的影響實(shí)驗(yàn)，探討電離輻射應(yīng)用于腫瘤生物治療的可能性，為尋找增強(qiáng)細(xì)胞活性的合適劑量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

選擇8例健康志愿者，其中男性5例，女性3例，年齡為（35±8）歲。抽取外周血并分離獲得單個核細(xì)胞，采用無血清培養(yǎng)液加白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）細(xì) 胞 因 子 和 異 戊 烯 焦 磷 酸（isopentenyl diphosphate，IPP）的方法活化擴(kuò)增人γδT細(xì)胞。人肝癌細(xì)胞株HepG2購自于中國科學(xué)院細(xì)胞庫/干細(xì)胞庫（上海）。

1.1.2 主要試劑

最小必需培養(yǎng)液 （minimum essential medium，MEM）（Invitrogen，美國）；GT551 H3培養(yǎng)液（TaKaRa，日本）；胎牛血清、胰蛋白酶/乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）溶液（Gibco，美國）；重組人白細(xì)胞介素2（recombinant human interleukin-2，rhIL-2）（廈門特寶生物工程股份有限公司，中國）；淋巴細(xì)胞分離液（天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司，中國）；異硫氰酸熒光素 （fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的抗人γδT細(xì)胞受體（cell receptor，CR）單抗、藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）標(biāo)記的穿孔素（perforin）單抗、PE標(biāo)記的顆粒酶B（granzyme B）單抗、別藻青蛋白（allophycocyanin，APC）標(biāo)記的溶酶體相關(guān)膜蛋白-1（lysosome-associated membrane protein 1）單抗（CD107a單抗）（eBioscience，美國）；Fix＆Perm破膜和固定劑（英杰生命技術(shù)有限公司，美國）；乳酸脫氫酶測定試劑盒（上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)公司，中國）。IPP、磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered solution，PBS）（分析純）（Sigma，美國）。

1.1.3 主要設(shè)備

直 線 加 速 器 治 療 機(jī) （精 度99.8 %；2300C/D SN416型）（Varian，美國）；酶標(biāo)儀（KHB st-360型）（上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司，中國）；全自動生化分析儀（AU680型）（Beckman Coulter，美國）；倒置相差顯微鏡 （TE-2000型）（Nikon，日本）；CO2培養(yǎng)箱（HF90/HF240型）（上海力康公司，中國）；流式細(xì)胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM Calibur型）（BD，美國）。采用Cell Quest軟件分析細(xì)胞，每個標(biāo)本分析細(xì)胞數(shù)大于104個細(xì)胞。

1.2 方法

1.2.1 人γδT細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定

在無菌條件下，抽取健康志愿者（健康志愿者均知情同意，簽屬知情同意書）20 mL上臂外周靜脈血；使用抗凝管抗凝處理，加入淋巴細(xì)胞分離液后離心，獲取外周血單個核細(xì)胞。經(jīng)PBS洗滌后加入至GT551 H3無血清培養(yǎng)液中，補(bǔ)加rhIL-2（濃度100 IU/mL）、IPP（質(zhì)量濃度2μg/mL）溶液，形成初始細(xì)胞密度為1×106/mL的細(xì)胞溶液；置于溫度為37°C、體積分?jǐn)?shù)5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培育，每2 d補(bǔ)完全培養(yǎng)液1次。10 d后，收集培養(yǎng)增殖的少量細(xì)胞，經(jīng)PBS洗滌后，再將細(xì)胞配成1×107/mL，取100μL與20μL FITC標(biāo)記的抗人γδT CR單抗在室溫下避光孵育15 min，再次使用PBS洗滌后經(jīng)上機(jī)檢測人γδT細(xì)胞的百分含量，評估γδT細(xì)胞是否有效擴(kuò)增。

1.2.2 人γδT細(xì)胞的純度分析

收集擴(kuò)增效率達(dá)80%以上的人γδT細(xì)胞，經(jīng)PBS洗滌2遍后懸浮于含0.5%牛血清白蛋白、2 mmol/L EDTA的PBS中，采用抗人γδT CR單抗包被的磁珠陽性分選γδT細(xì)胞，使用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞純度。

1.2.3 不同劑量輻射人γδT細(xì)胞進(jìn)行分組

將分選純化后的人γδT細(xì)胞按1×107/mL的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)移至6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔3 mL，采用直線加速器治療機(jī)，于室溫條件下以6 MV X射線分別給 予0.08、0.50、2.00、4.00、6.00 Gy進(jìn) 行 輻 射。其 中0.08 Gy劑 量 組 輻 射 時(shí) 機(jī) 架 （gantry angle，GA）為270°，源皮距（source skin distance，SSD）=500 cm，輻射野10 cm×10 cm，劑量率為0.08 Gy/min，輸出量為2 Gy/min，培養(yǎng)皿前覆蓋1.5 cm等效填充物（補(bǔ)償膜）；其余各組均采用垂直輻射，GA為180°，SSD=100 cm，輻射野15 cm×15 cm，劑量率為2.00 Gy/min，分別給予0.50 Gy、2.00 Gy、4.00 Gy、6.00 Gy輻射，培養(yǎng)皿底部墊1.5 cm等效填充物。相應(yīng)設(shè)置0.00 Gy未輻射對照組（簡稱未輻射對照組）。輻射結(jié)束后置于溫度為37°C、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2環(huán)境下的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.4 不同劑量輻射后人γδT細(xì)胞的增殖分析

人γδT細(xì)胞輻射后繼續(xù)培養(yǎng)24、48 h，收集各劑量輻射組細(xì)胞，經(jīng)PBS洗滌后采用臺盼蘭染色法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，分析人γδT細(xì)胞增殖情況。

1.2.5 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)

從液氮中取出HepG2細(xì)胞株，溫水快速復(fù)蘇，接種于MEM（含10%胎牛血清）中，置于溫度為37°C、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培育，每2 d補(bǔ)完全培養(yǎng)液1次。使用倒置相差顯微鏡觀察HepG2細(xì)胞形態(tài)，查看細(xì)胞生長情況，及時(shí)換液傳代，收集處于對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)，待實(shí)驗(yàn)。

1.2.6 乳酸脫氫酶 釋放法檢測 人γδT細(xì)胞對肝 癌HepG2細(xì)胞的殺傷活性

以輻射后繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h的人γδT細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，以處于對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞作為靶細(xì)胞，按照效靶比20∶1的比例置于溫度37°C、體積分?jǐn)?shù)5%CO2環(huán)境下的細(xì)胞培養(yǎng)箱中共孵育6 h，置于1 500 r/min下離心10 min，收集各組上清液，在全自動生化分析儀上于340 nm波長下檢測光密度（optical density，OD）值。每組設(shè)置3個復(fù)孔，以單獨(dú)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞作為對照組，計(jì)算各組細(xì)胞殺傷活性。計(jì)算公式為：殺傷活性（%）=[（OD實(shí)驗(yàn)組-OD效應(yīng)細(xì)胞自然釋放組-OD靶細(xì)胞自然釋放組）/（OD靶細(xì)胞最大釋放組-OD靶細(xì)胞自然釋放組）]×100%[4]，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù) 檢測人γδT細(xì)胞 胞內(nèi)抗原穿 孔素、顆粒酶B的表達(dá)

取輻射后繼續(xù)培養(yǎng)48 h的各組人γδT細(xì)胞，離心棄去上清液，經(jīng)洗滌后，再加入PBS調(diào)整細(xì)胞密度為1×107/mL。取各組細(xì)胞懸液100μL，加入FITCanti-TCR-γδ、PerCP-Cy5.5標(biāo)記的抗人CD3單抗各20μL，室溫下避光孵育20 min，然后加入Fix＆Perm破膜劑繼續(xù)孵育15 min，再加入PE標(biāo)記的抗人穿孔素單抗5μL，避光孵育20 min后用PBS洗滌，棄去上清液；再以400μL PBS重懸細(xì)胞，待機(jī)檢測。

與檢測穿孔素步驟相同，在加入Fix＆Perm破膜劑繼續(xù)孵育15 min后，加入PE標(biāo)記的抗人顆粒酶B單抗，避光孵育20 min后，重懸于0.5 mL的PBS中，待機(jī)檢測。

1.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測人γδT細(xì)胞表面抗原CD107a的表達(dá)

取輻射后繼續(xù)培養(yǎng)48 h的各組人γδT細(xì)胞，離心棄去上清液，經(jīng)洗滌后，再加入PBS調(diào)整細(xì)胞密度為1×107/mL。取各組細(xì)胞懸液100μL，加入FITCanti-TCR-γδ、PerCP-Cy5.5標(biāo) 記 的 抗 人CD3單 抗、APC標(biāo)記的抗人CD107a單抗各20μL，室溫避光孵育20 min，重懸于0.5 mL的PBS中，使用流式細(xì)胞術(shù)檢測人γδT細(xì)胞表面抗原CD107a的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，運(yùn)用單因素方差分析比較組間差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人γδT細(xì)胞的鑒定

rhIL-2、IPP擴(kuò)增培養(yǎng)的第10天，在倒置相差顯微鏡下可見細(xì)胞呈梭形、圓形、紡錘形等不同形態(tài)及大小不等的細(xì)胞集落（圖1）。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，γδT細(xì)胞百分含量為81.22%±3.51%，與擴(kuò)增前分離的單個核細(xì)胞中的γδT細(xì)胞比例比較，γδT細(xì)胞得到了有效擴(kuò)增；經(jīng)磁珠陽性分選純化后的γδT細(xì)胞百分含量為96.76%±1.37%（圖2）。

圖1 人γδT細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征圖（倒置相差顯微鏡，×400）Fig.1 Image of morphological characteristics of humanγδT cells(inverted phase contrast microscope,×400)

圖2 人γδT細(xì)胞的流式細(xì)胞純度鑒定圖Fig.2 Image of purity identification of humanγδT cells by flow cytometry

2.2 人γδT細(xì)胞增殖能力

輻射后培養(yǎng)24、48 h的各組人γδT細(xì)胞中，0.08 Gy劑量組增殖最為顯著，其輻射后培養(yǎng)24 h的擴(kuò)增倍數(shù)為1.32±0.07，增殖能力較未輻射對照組增強(qiáng)（P＜0.05）；輻射后培養(yǎng)48 h的擴(kuò)增倍數(shù)為2.22±0.11，增殖能力較未輻射對照組顯著增強(qiáng)（P＜0.01）。0.50 Gy劑量組較未輻射對照組略有增強(qiáng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；其余各組人γδT細(xì)胞隨輻射劑量增加呈增殖抑制趨勢。見圖3。

圖3 不同劑量電離輻射后人γδT細(xì)胞的擴(kuò)增比較柱狀圖Fig.3 The amplification comparison histogram of humanγδT cells after different doses of ionizing radiation

2.3 人γδT細(xì)胞對肝癌HepG2細(xì)胞的殺傷效應(yīng)

按照效靶比20∶1比例共孵育6 h后，輻射后培養(yǎng)24 h的2.00 Gy劑量組、4.00 Gy劑量組人γδT細(xì)胞的殺傷活性分別為45.33%±3.22%、42.42%±3.54%，顯著高于未輻射對照組（分別P＜0.01、P＜0.05）。輻射后培養(yǎng)48 h的2.00 Gy劑量組、4.00 Gy劑量組人γδT細(xì)胞的殺傷活性分別為47.33%±3.81%、43.85%±3.39%，顯著高于未輻射對照組（分別P＜0.01、P＜0.05）。見圖4。

圖4 不同劑量電離輻射后人γδT細(xì)胞對HepG2細(xì)胞的殺傷活性柱狀圖Fig.4 Comparison histogram of cytotoxic activity of humanγδT cells against HepG2 cells after different doses of ionizing radiation

2.4 人γδT細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B及CD107a的表達(dá)

流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，輻射后培養(yǎng)48 h的2.00 Gy劑量組、4.00 Gy劑量組人γδT細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素、顆粒酶B表達(dá)均顯著高于未輻射對照組，2.00 Gy劑量組人γδT細(xì)胞表面CD107a表達(dá)顯著高于未輻射對照組。見表1、圖5。

表1 不同劑量電離輻射48 h后人γδT細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B及CD107a的表達(dá)比較Tab.1 The expression comparison of perforin,granzyme B and CD107a in humanγδT cell after 48-hours ionizing radiation with different doses

圖5 不同劑量電離輻射48 h后人γδT細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B及CD107a表達(dá)的流式細(xì)胞圖Fig.5 The expression of perforin,granzyme B,and CD107a in humanγδT cell after 48 hours of different doses of ionizing radiation by flow cytometry

3 討論

T淋巴細(xì)胞（T lymphocyte）簡稱T細(xì)胞，來源于骨髓多能干細(xì)胞，通過淋巴和血液循環(huán)分布到全身的免疫器官和組織中，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[5]。

人γδT細(xì)胞在外周血循環(huán)T淋巴細(xì)胞中的比例約占5%，在腫瘤監(jiān)視和抗腫瘤免疫中發(fā)揮了主要作用[6]。與αβT細(xì)胞不同，γδT細(xì)胞占T細(xì)胞總數(shù)比例較低，但是功能獨(dú)特，γδT細(xì)胞不需要經(jīng)過抗原遞呈，而是以主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）非限制的方式識別和殺傷靶細(xì)胞[7]；通過膜表面分子和分泌多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)特應(yīng)性免疫應(yīng)答，是固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁[8]。

近年來，許多學(xué)者就如何提高γδT細(xì)胞體外增殖能力和增強(qiáng)腫瘤殺傷活性進(jìn)行了深入的研究。研究表明，除了無翅型小鼠乳腺癌病毒整合位點(diǎn)（wingless-type MMTV integration site，Wnt）通路外，4，6-二取代吡咯并嘧啶（4，6-disubstituted pyrrolopyrimidine，TWS119）可通過激活哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）通路、上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2（B cell lymphoma-2）的表達(dá)并抑制裂解的caspase-3蛋白顯著增強(qiáng)γδT細(xì)胞的增殖和存活；TWS119增強(qiáng)γδT細(xì)胞對人結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性主要與體外及體內(nèi)穿孔素和顆粒酶B表達(dá)的上調(diào)有關(guān)[9]。與通過IPP或唑來膦酸擴(kuò)增的γδT細(xì)胞相比，IPP加雷西莫德擴(kuò)增的γδT細(xì)胞對程序性細(xì)胞死亡蛋白-1（programmed death 1，PD-1）表達(dá)較低的腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性顯著增強(qiáng)；其機(jī)制為共刺激增強(qiáng)了磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）-哺乳動物mTOR通路和Toll樣受體（Toll-like receptors，TLR）7/8-MyD88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）通路的哺乳動物靶標(biāo)的激活，雷西莫特以抗原呈遞細(xì)胞依賴性和非依賴性方式刺激γδT細(xì)胞擴(kuò)增[10]。

當(dāng)前，放射治療作為腫瘤治療的重要手段廣泛應(yīng)用于臨床，電離輻射可通過直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡和調(diào)節(jié)表型等機(jī)制發(fā)揮其增強(qiáng)抗腫瘤免疫效能。研究表明，電離輻射可導(dǎo)致調(diào)節(jié)性T細(xì)胞牛叉頭型基因P3（forkhead box protein 3 gene，F(xiàn)oxp3）表達(dá)下調(diào)從而減弱其對CD8+T細(xì)胞增殖的抑制效果[11]。低劑量輻射體內(nèi)可增加抗氧化基因的表達(dá)，下調(diào)促炎性細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α和白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6的表達(dá)[12]，增加傷口愈合能力，還可以刺激機(jī)體正常細(xì)胞增殖，激活其防御系統(tǒng)，減少對正常組織的損傷，誘導(dǎo)適應(yīng)性反應(yīng)發(fā)生，從而減少高劑量放射治療對機(jī)體免疫系統(tǒng)的損傷，增加對微小腫瘤的清除，降低癌癥發(fā)生率[13]；同時(shí)還具有增強(qiáng)癌癥治療效果和減少抗癌治療毒副作用的潛力等[14]。低劑量輻射體外可激活自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞功能，顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞的擴(kuò)增和細(xì)胞毒活性[3，15]。為進(jìn)一步驗(yàn)證電離輻射能否對人γδT細(xì)胞產(chǎn)生類似的作用，筆者嘗試采用不同劑量電離輻射作為影響人γδT細(xì)胞生物學(xué)功能的干預(yù)手段，觀察不同劑量電離輻射對人γδT細(xì)胞體外增殖與細(xì)胞毒活性作用，探討其相關(guān)分子機(jī)制，為以人γδT細(xì)胞為基礎(chǔ)的電離輻射聯(lián)合細(xì)胞免疫治療惡性腫瘤的可能性及合適劑量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及參考。

為排除其他免疫細(xì)胞的干擾，筆者首先對培養(yǎng)擴(kuò)增的人γδT細(xì)胞進(jìn)行了磁珠陽性分選純化，得到百分含量95 %以上的人γδT細(xì)胞，然后將純化后的γδT細(xì)胞分組以相同的細(xì)胞密度分別接受了0.08、0.50、2.00、4.00、6.00 Gy的6MV X-ray電離輻射，再與HepG2細(xì)胞共孵育。結(jié)果表明，0.08 Gy電離輻射能夠顯著促進(jìn)了人γδT細(xì)胞的增殖。該低劑量的免疫興奮效應(yīng)，有望為提高人γδT細(xì)胞體外擴(kuò)增效率進(jìn)而應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞免疫治療提供一個低成本策略。

穿孔素/顆粒酶B途徑是包括γδT細(xì)胞、NK細(xì)胞、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine-induced killer，CIK）等在內(nèi)的細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞清除腫瘤的重要機(jī)制之一，細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的分子機(jī)制與其活化后釋放穿孔素和顆粒酶B等細(xì)胞毒效應(yīng)分子密切相關(guān)[9，16]。筆者研究結(jié)果表明，2.00 Gy或4.00 Gy電離輻射雖然對人γδT細(xì)胞的增殖無明顯的促進(jìn)作用，但其能夠顯著上調(diào)γδT細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)。提示2.00 Gy或4.00 Gy電離輻射能夠增強(qiáng)γδT細(xì)胞的細(xì)胞毒功能，從而提升其對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。溶酶體相關(guān)膜蛋白-1（CD107a）是CD8+T細(xì)胞激活后脫顆粒的標(biāo)志物，與NK細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞等免疫細(xì)胞的細(xì)胞毒功能密切相關(guān)[17，18]。筆者研究結(jié)果表明，2.00 Gy或4.00 Gy電離輻射后的人γδT細(xì)胞對HepG2細(xì)胞的殺傷效應(yīng)顯著增強(qiáng)，而2.00 Gy更為顯著，這可能與電離輻射觸發(fā)γδT細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B表達(dá)增強(qiáng)導(dǎo)致的脫顆粒有關(guān)，該結(jié)果與Diegeler S等[19]對NK細(xì)胞暴露于不同輻射劑量后細(xì)胞毒活性增強(qiáng)的機(jī)制類似。CD107a為細(xì)胞毒效應(yīng)功能的一個重要標(biāo)志，其表達(dá)明顯提高也間接地證明了2.00 Gy電離輻射對γδT細(xì)胞殺傷功能的免疫增強(qiáng)效應(yīng)。

綜上所述，單次0.08 Gy電離輻射能夠顯著促進(jìn)體外人γδT細(xì)胞增殖能力，單次2.00 Gy或4.00 Gy電離輻射可顯著增強(qiáng)人γδT細(xì)胞對肝癌HepG2細(xì)胞的腫瘤殺傷活性；其機(jī)制可能與電離輻射促進(jìn)人γδT細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B及CD107a的表達(dá)相關(guān)。