亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        山楂葉中4種黃酮提取工藝的優(yōu)化

        2022-12-04 09:19:18杜義龍田孟堯李艷榮趙勝男潘海峰
        中成藥 2022年10期
        關(guān)鍵詞:黃酮

        杜義龍, 田孟堯, 李艷榮, 洪 霞, 趙勝男, 潘海峰

        (河北省承德醫(yī)學(xué)院/河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北 承德 067000)

        山楂葉具有活血化瘀、理氣通脈、化濁降脂的功效[1],富含黃酮類、多糖類、三萜類等多種化合物,其中黃酮為活性物質(zhì)[2-6]。以山楂葉黃酮為主要成分的心安膠囊、益心酮片等制劑已廣泛應(yīng)用于臨床[7-9],目前已從中分離鑒定出牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、金絲桃苷、異槲皮素等成員,具有抗動脈粥樣硬化、抗氧化、降血糖等作用[10-15]。本實(shí)驗(yàn)采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化山楂葉中牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、金絲桃苷、異槲皮素4種黃酮的提取工藝,以期為該藥材開發(fā)應(yīng)用提供參考。

        1 材料

        Agilent 1200型高效液相色譜儀(配置四元泵、自動進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器、Chemstation色譜工作站,美國Agilent公司);AG-245型電子分析天平(0.01 mg,瑞士Mettler-Toledo公司);JA5003型電子天平(1 mg,天津天馬衡基儀器有限公司);KQ-700型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。牡荊素葡萄糖苷(批號20042350)、牡荊素鼠李糖苷(批號18060103)、金絲桃苷(批號19103001)、異槲皮素(批號18062702)對照品均購于成都普菲德生物技術(shù)有限公司。山楂葉采自河北省承德市隆化縣荒地大后溝村,經(jīng)承德民族師范學(xué)院董建新教授鑒定為正品,標(biāo)本(編號HBCD-3-11)保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所。色譜純乙腈(美國Fisher Scientific公司);色譜純甲醇(美國Mreda Technology公司);分析純甲酸(美國ROE公司);分析純甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);水為娃哈哈純凈水(天津娃哈哈宏華振飲料有限公司)。

        2 方法

        2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相0.4%甲酸(A)-乙腈(B)-四氫呋喃(C),梯度洗脫(0~15 min,5%~7%B,4%C;15~22 min,7%~12%B,4%~2%C;22~30 min,12%~14%B,2%C;30~45 min,14%B,2%C;45~50 min,14%~28%B,2%~4%C;50~55 min,28%B,4%C;55~65 min,28%~85%B,4%C~0);體積流量1.0 mL/min;柱溫30 ℃;檢測波長350 nm;進(jìn)樣量10 μL。

        2.2 對照品溶液制備 精密稱取牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、金絲桃苷、異槲皮素對照品適量,50%甲醇溶解并定容,即得(四者質(zhì)量濃度分別為297.4、409.6、255.8、117.6 μg/mL)。

        2.3 供試品溶液的制備 取藥材粉末(過80目篩)約1.0 g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加入60%甲醇50 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理30 min,放冷,60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,12 000 r/min離心10 min,收集上清液,0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

        2.4 方法學(xué)考察

        2.4.1 專屬性考察 取供試品、對照品、空白溶液適量,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,結(jié)果見圖1。由此可知,各黃酮分離度良好,空白無干擾。

        2.4.2 線性關(guān)系考察 取對照品溶液適量,50%甲醇依次稀釋2、4、8、16、32、64、128倍,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定。以對照品峰面積為縱坐標(biāo)(Y),質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行回歸,結(jié)果見表1,可知各黃酮在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

        表1 各黃酮線性關(guān)系

        2.4.3 精密度試驗(yàn) 取同一份供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定6次,測得各黃酮峰面積RSD均小于3.0%,表明儀器精密度良好。

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材6份,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,測得各黃酮含量RSD均小于3.0%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液,于0、2、4、8、12、24 h在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,測得各黃酮峰面積RSD均小于3.0%,表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 取6份各黃酮含量已知的藥材約0.5 g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,分別加入對照品牡荊素葡萄糖苷1.715 3 mg、牡荊素鼠李糖苷3.078 4 mg、金絲桃苷0.902 41 mg、異槲皮素0.297 62 mg,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,計(jì)算回收率。結(jié)果,各黃酮平均加樣回收率(RSD)分別為牡荊素葡萄糖苷101.12%(0.77%)、牡荊素鼠李糖苷101.08%(1.5%)、金絲桃苷101.70%(3.7%)、異槲皮素101.11%(2.3%)。

        2.5 單因素試驗(yàn)

        2.5.1 料液比 取藥材粉末6份,每份約1 g,精密稱定,分別加入60%甲醇25、50、80、100、150、200 mL,超聲提取30 min,自然冷卻至室溫,60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,測得各黃酮總提取率分別為0.985%、0.993%、0.989%、0.952%、0.950%、0.946%,可知隨著料液比增加總提取率呈現(xiàn)先升后降的趨勢,在1∶50時(shí)達(dá)到最大值。因此,選擇1∶25、1∶50、1∶80進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化。

        2.5.2 甲醇體積分?jǐn)?shù) 取藥材粉末4份,每份約1 g,精密稱定,分別加入30%、60%、90%、100%甲醇各50 mL,超聲提取30 min,自然冷卻至室溫,相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,測得各黃酮總提取率分別為0.809%、0.982%、0.888%、0.519%,可知隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)增加,提取率呈現(xiàn)先升后降的趨勢,在60%時(shí)達(dá)到最大值。因此,選擇30%、60%、90%進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化。

        2.5.3 超聲時(shí)間 取藥材粉末5份,每份約1 g,精密稱定,加入60%甲醇50 mL,分別超聲提取20、25、30、35、40、45 min,自然冷卻至室溫,60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定,測得各黃酮總提取率分別為0.994%、0.995%、1.01%、0.995%、0.955%、0.915%,可知隨著超聲時(shí)間延長,提取率呈現(xiàn)先升后降的趨勢,在30 min時(shí)達(dá)到最大值。因此,選擇25、30、35 min進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化。

        2.6 Box-Behnken響應(yīng)面法

        在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選擇超聲時(shí)間(A)、料液比(B)、甲醇體積分?jǐn)?shù)(C)作為影響因素,每個(gè)因素3個(gè)水平,各黃酮總提取率(Y)作為評價(jià)指標(biāo),Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝,結(jié)果見表2。

        通過Design-Expert12.0軟件對表2數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得方程為Y=1.09+0.000 5A-0.001 9B+0.005 4C+0.006 7AB-0.000 9AC+0.004 5BC-0.010 1A2-0.014 7B2-0.105 5C2,方差分析見表3。由此可知,模型P<0.01,具有高度顯著性;失擬項(xiàng)P>0.05,表明結(jié)果基本不受未知因素的干擾,模型擬合度良好;決定系數(shù)R2為0.966 3,校正決定系數(shù)Radj2為0.922 9,表明模型表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,可用于響應(yīng)值預(yù)測;變異系數(shù)(CV)[16]為1.55%,表明模型方程置信度高,可用于分析響應(yīng)值變化[17];各因素影響程度依次為甲醇體積分?jǐn)?shù)>料液比>超聲時(shí)間。

        表2 因素水平、試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

        表3 方差分析

        響應(yīng)面分析見圖2~4,可知在超聲時(shí)間25~35 min,料液比1∶30~1∶70;或超聲時(shí)間25~35 min,甲醇體積分?jǐn)?shù)50%~70%;或料液比1∶30~1∶70,甲醇體積分?jǐn)?shù)50%~70%時(shí),各黃酮均可被最大程度地提取出來,即總提取率有相應(yīng)的最大值,與單因素試驗(yàn)結(jié)果一致,并且均不受其他因素的影響,表現(xiàn)為簡單非線性關(guān)系。

        2.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 通過Design-Expert 12.0軟件,得到最優(yōu)工藝為超聲時(shí)間30.038 min,料液比1∶48.193,甲醇體積分?jǐn)?shù)60.722%,各黃酮總提取率為1.086%,根據(jù)實(shí)際操作的可行性,將其修正為超聲時(shí)間30 min,料液比1∶50,甲醇體積分?jǐn)?shù)60%。在上述優(yōu)化工藝下進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn),測得總提取率分別為1.135%、1.135%、1.122%,平均值1.130%,與預(yù)測值1.086%接近,說明該工藝穩(wěn)定可行。

        3 討論與結(jié)論

        指標(biāo)成分的充分提取是保證中藥定量分析準(zhǔn)確性的重要前提,影響中藥成分提取率的因素較多,提取溶劑的種類及濃度、料液比、提取時(shí)間等。本實(shí)驗(yàn)對甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶劑進(jìn)行篩選,結(jié)果顯示甲醇提取液獲得的色譜峰更多、峰面積更大,故選擇甲醇作為提取溶劑。

        通過對照品比對發(fā)現(xiàn),保留時(shí)間為15 min的色譜峰為綠原酸,其分離度好,峰面積大,滿足色譜定量的要求,藥理作用確切。但料液比考察結(jié)果顯示,綠原酸提取率隨料液比的增加呈現(xiàn)明顯下降的趨勢,可能該成分是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯,其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚3個(gè)不穩(wěn)定部分,在提取過程中會因水解和分子內(nèi)酯基遷移而發(fā)生異構(gòu)化,其結(jié)構(gòu)極不穩(wěn)定。因此,為提高評價(jià)指標(biāo)的可信度,沒有將綠原酸作為定量指標(biāo)。

        綜上所述,本實(shí)驗(yàn)采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化山楂葉中4種黃酮提取工藝,避免了單一因素評價(jià)造成的局限性,也為該藥材質(zhì)量控制研究及功能成的開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。

        猜你喜歡
        黃酮
        不同桑品種黃酮含量測定
        桑黃黃酮的研究進(jìn)展
        一測多評法同時(shí)測定腦心清片中6種黃酮
        中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
        HPLC法同時(shí)測定固本補(bǔ)腎口服液中3種黃酮
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
        MIPs-HPLC法同時(shí)測定覆盆子中4種黃酮
        中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
        DAD-HPLC法同時(shí)測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
        正交法優(yōu)化王不留行中王不留行黃酮苷的超聲提取工藝
        黃酮抗癌作用研究進(jìn)展
        瓜馥木中一種黃酮的NMR表征
        UV法和HPLC法測定甘草總黃酮混懸液中總黃酮和查爾酮含量
        一本色道久久综合狠狠躁篇| 午夜精品一区二区三区av免费| 日本二区三区在线免费| 无码av天天av天天爽| 亚洲av无码精品色午夜在线观看| 国产精品第1页在线观看| 中文字幕精品人妻av在线| 成人大片免费视频播放一级| 国产又色又爽又高潮免费视频麻豆 | 久久久精品午夜免费不卡| 又爽又黄又无遮挡网站动态图| 亚洲欧洲国产日产国码无码| 精品少妇白浆一二三区| 精品亚洲天堂一区二区三区| 狠狠综合久久av一区二区| 日本国产视频| 亚洲黄色官网在线观看| 变态另类人妖一区二区三区| 熟女无套内射线观56| 99热精品国产三级在线观看 | 女同久久精品国产99国产精品| 中文字幕亚洲无线码a| 自拍偷拍韩国三级视频| 国产综合精品一区二区三区| 久久久久亚洲av无码a片软件| 国产在线观看免费一级| 蜜桃视频第一区免费观看| 777米奇色8888狠狠俺去啦| 99国产免费热播视频| 一区两区三区视频在线观看| 午夜人妻久久久久久久久| 亚洲国产韩国欧美在线| 色噜噜狠狠色综合欧洲| 亚洲不卡av一区二区三区四区| 高潮潮喷奶水飞溅视频无码| 三级网址在线| 久久综合久中文字幕青草| 色偷偷偷在线视频播放| 国产av无码专区亚洲av| 亚洲中文字幕黄色小视频| 黄片视频免费观看蜜桃|