董麗紅，羅牡康，張名位，張瑞芬，鄧 梅，陳燕霞，賈栩超

（廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部功能食品重點實驗室，廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣東 廣州 510610）

皮膚老化包括自然老化和光老化，研究表明，光老化占面部老化的80%以上，太陽紫外線輻射是造成皮膚光老化的主要原因[1]。紫外線分為長波紫外線（ultraviolet A，UVA）（波長320～400 nm），中波紫外線（ultraviolet B，UVB）（波長280～320 nm）和短波紫外線（波長100～280 nm）。UVB主要作用于皮膚最外層的表皮，是引起皮膚損傷的主要波段[2]。氧化損傷是UVB所致皮膚損傷的重要機制，其中活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）起著關鍵性的作用。UVB可以導致皮膚中的ROS過量產(chǎn)生，大量的ROS可直接或間接地氧化細胞膜上的脂質(zhì)產(chǎn)生過氧化物，進一步形成脂褐素，破壞表皮細胞內(nèi)酶性和非酶性抗氧化防御系統(tǒng)，造成細胞損傷，容易誘發(fā)皮膚出現(xiàn)局部紅斑、色素沉著異常、皺紋甚至皮膚癌等病理狀態(tài)[3]。因此，抗氧化是預防皮膚紫外損傷或延緩皮膚光老化的一個重要途徑。研究表明，一些天然的植物化學組分表現(xiàn)出較好的抑制紫外線致皮膚氧化損傷潛力[4-7]，鑒于其安全性更高、功能活性更突出等優(yōu)點受到學者們的極大關注，從天然植物化合物中開發(fā)皮膚光保護劑已成為該領域的研究熱點。細胞模型因其實驗條件可控、影響因素少且可模擬機體生理環(huán)境而被廣泛用于皮膚氧化損傷的體外研究，最常用的是人永生化角質(zhì)形成細胞（HaCaT）或人表皮成纖維細胞[8-9]。其中，角質(zhì)形成細胞是構成人表皮的主要細胞，而UVB作用于皮膚表皮會引起角質(zhì)形成細胞氧化損傷和細胞凋亡[10]，因此UVB誘導角質(zhì)形成細胞損傷更適合于構建皮膚氧化損傷細胞模型，且近年來，已有部分研究報道了天然多酚類物質(zhì)對UVB輻射HaCaT細胞氧化損傷的保護作用[9-11]。

原花青素是廣泛存在于自然界中的一大類多酚化合物，由表兒茶素和/或兒茶素為單元聚合而成，根據(jù)其單體聚合度（degree of polymerization，DP）分為單體（DP＝1）、寡聚體（DP＝2～5）和多聚體（DP＞5）；根據(jù)單體連接方式的不同，可分為A型（C2-O-C7或C2-O-C5連接）和B型（C4-C8或C4-C6連接）兩種[12]。大量研究已證實，原花青素因含有多個酚羥基而顯示出較強的抗氧化活性和自由基清除能力，同時還具有一些生理活性，如抗炎癥、抗衰老、抗腫瘤、抗心血管疾病等[13-15]。近年來研究表明，原花青素對紫外線有很強的吸收，可以有效抑制紫外線照射引起的皮膚損傷。李桂雙等[16]發(fā)現(xiàn)葡萄籽原花青素可通過增加細胞內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-Px）活力，減少丙二醛（malondialdehyde，MDA）生成量，從而對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷發(fā)揮防護作用。史云容等[17]研究發(fā)現(xiàn)，葡萄籽原花青素具有抗紫外線所致光老化早期血管生成的作用，能夠修復紫外線照射誘導的皮膚屏障功能損傷。王剛等[18]發(fā)現(xiàn)黑果枸杞原花青素能減輕D-半乳糖皮下注射聯(lián)合紫外線（UVA＋UVB）輻射后小鼠頸背部皮膚氧化損傷及炎癥反應，延緩皮膚衰老。以上研究中原花青素提取物均以B型原花青素為主，而對于A型原花青素的抗紫外線損傷鮮有報道。

荔枝果殼作為荔枝加工的主要副產(chǎn)物，富含原花青素類化合物等多種活性成分，其中以自然界少見的A型原花青素為主，具有很高的藥用價值。Sui Yong等[19]利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術分析荔枝果殼原花青素組成，發(fā)現(xiàn)其含有兒茶素、表兒茶素、12 種原花青素二聚體和6 種原花青素三聚體，并指出其中A型原花青素的含量遠高于B型原花青素，且最主要的單體和低聚原花青素是表兒茶素、A型原花青素二聚體（A1和A2）。目前，荔枝果殼原花青素的生物活性研究已被廣泛報道，具有良好的抗氧化[20]、抗動脈粥樣硬化[21]、改善高血糖癥[15]、抑制血管緊張素I轉化酶[22]等多種有益的生物活性，在食品、藥品以及化妝品領域具有潛在的應用價值。也有研究表明荔枝果殼提取物具有良好的亮膚增白和抗光老化效果[23]，但其對UVB誘導皮膚細胞氧化損傷是否具有保護作用尚不清楚。此外，先前研究均以原花青素粗提物為試材，其中發(fā)揮活性作用的主要活性物質(zhì)是否為A型原花青素仍不明確。因此，本實驗通過構建UVB輻射誘導HaCaT細胞氧化損傷模型，評價荔枝果殼低聚原花青素（litchi pericarp oligomolymeric procyanidins，LPOPC）及其單體組分對UVB輻射誘導HaCaT細胞氧化損傷的保護作用，考察A型原花青素用于防護皮膚紫外損傷領域的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

‘妃子笑’荔枝 廣州水果批發(fā)市場；對氨基苯甲酸（para-aminobenzoic acid，PABA）（純度≥99.9%） 美國Sigma公司；HaCaT細胞 美國模式培養(yǎng)物集存庫。

Dulbecco’s改良Eagle培養(yǎng)基（Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM）培養(yǎng)基、胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、雙抗（青霉素-鏈霉素）溶液、0.25%（質(zhì)量分數(shù)）胰酶、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（0.01 mol/L、pH 7.2，下同） 美國Gibco公司；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA） 美國Sigma公司；細胞計數(shù)試劑盒（cell counting kit-8，CCK-8） 上海碧云天生物技術有限公司；ROS、SOD、過氧化氫酶（catalase，CAT）、GSH-Px、還原型谷胱甘肽（glutathion，GSH）、MDA、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白質(zhì)量濃度測定試劑盒南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

SW-CJ-2G超凈實驗臺 蘇州凈化設備有限公司；HeraCell 240i二氧化碳培養(yǎng)箱 美國Thermo Fisher Scientific公司；DMI 4000B熒光倒置顯微鏡 德國Leica公司；Infinite M200pro熒光酶標儀 瑞士Tecan公司；5702RH低速冷凍離心機 德國Eppendorf公司；HOPE-MED 8140紫外輻照燈 天津開發(fā)區(qū)合浦工貿(mào)有限公司；WB20恒溫水浴鍋 瑞士Salvis公司。

1.3 方法

1.3.1 LPOPC及其單體化合物的制備及分離純化

取荔枝去殼后參考文獻[24]的方法由新鮮荔枝果殼制備LPOPC。采用香草醛法測定LPOPC原花青素含量為96.38 g/100 g（以兒茶素計），純度為96.38%。

2 g LPOPC經(jīng)反相中壓柱層析分離，依次以1.5 L不同體積分數(shù)（10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）甲醇溶液以及無水甲醇進行洗脫，流速為10 mL/min，分別得到組分1～10。組分5（203.2 mg）經(jīng)過葡聚糖凝膠LH-20柱分離，流動相為無水甲醇，流速5 mL/min，收集洗脫液得到化合物1（7.0 mg）和化合物2（155.2 mg）。組分6（316.4 mg）經(jīng)過葡聚糖凝膠LH-20柱分離，流動相為無水甲醇，流速5 mL/min，收集洗脫液得到化合物3（87.8 mg）和化合物4（13.4 mg）。組分7（53.6 mg）經(jīng)過葡聚糖凝膠LH-20柱分離，流動相為無水甲醇，流速5 mL/min，收集洗脫液得到化合物5（16.7 mg）。組分8（18.8 mg）經(jīng)高效液相色譜分析，流動相為65%（體積分數(shù)）甲醇水溶液，流速5 mL/min，收集洗脫液得到化合物6（5.5 mg）。綜上，由LPOPC制備得到6 種單體化合物1～6，經(jīng)鑒定（相關研究尚未發(fā)表）這6 種單體化合物分別為木脂素（meliasendanin B）、表兒茶素、原花青素A2、原花青素A1、槲皮素-3-O-蕓香糖苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷，純度均在99.0%以上。

1.3.2 HaCaT細胞培養(yǎng)

將1 mL凍存的HaCaT細胞接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，加入6 mL完全培養(yǎng)基（含10%（體積分數(shù)，下同）FBS和1%雙抗溶液的DMEM）后放入培養(yǎng)箱（37 ℃、5%（體積分數(shù)）CO2，下同）內(nèi)培養(yǎng)。待細胞融合度達到80%～90%時，用1 mL 0.25%胰酶消化細胞，離心（4 000 r/min、5 min）后用完全培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細胞進行后續(xù)實驗。

1.3.3 藥物安全劑量和UVB輻照劑量的確定

取對數(shù)生長期HaCaT細胞以5 000 個/孔接種于96 孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)12 h后，棄去培養(yǎng)液后用100 μL PBS洗滌2 次，分別加入100 μL含不同質(zhì)量濃度（0（即對照組）、50、100、150、200 μg/mL）LPOPC或含不同濃度（0、12.5、25、50、100 μmol/L）PABA、6 種單體化合物的1%（質(zhì)量分數(shù)，下同）BSA DMEM，繼續(xù)培養(yǎng)12 h。采用CCK-8分析細胞活力，以確定PABA、LPOPC及6 種單體化合物對正常細胞不產(chǎn)生毒性作用的安全劑量范圍。

取對數(shù)生長期HaCaT細胞以5 000 個/孔接種于96 孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)液后用100 μL PBS洗滌2 次，然后加入100 μL PBS覆蓋細胞，用紫外輻照裝置對細胞進行UVB照射，照射劑量分別為0、50、100、150、200、250 mJ/cm2。照射后用PBS洗滌細胞，采用CCK-8分析細胞活力以確定合適的輻射劑量。

1.3.4 抑制UVB輻照損傷實驗分組

參考文獻[25]的方法并略有改動，實驗分為對照（Con）組、UVB照射組、8 個藥物組（LPOPC、PABA及6 種單體化合物）。HaCaT細胞（106個/mL）以2 mL/孔接種于6 孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)12 h后，棄去培養(yǎng)液后加入1 mL PBS洗滌2 次，然后對照組和UVB照射組分別加入2 mL 1% BSA DMEM；LPOPC、PABA、單體化合物組加入2 mL含相應藥物的1% BSA DMEM，其中LPOPC質(zhì)量濃度分別為12.5、25、50、100 μg/mL，PABA和6 種單體化合物濃度分別為6.25、12.5、25、50 μmol/L。繼續(xù)培養(yǎng)12 h后，用PBS洗滌細胞2 次，然后加入1 mL PBS覆蓋細胞，除對照組外，其余各組經(jīng)142 mJ/cm2UVB照射，用PBS洗滌細胞。收集各組細胞進行相關指標測定，考察藥物對UVB誘導HaCaT細胞損傷的抑制作用。

1.3.5 細胞活力的測定

參照CCK-8說明書測定1.3.4節(jié)中各組細胞活力（以細胞存活率表征）。

1.3.6 細胞內(nèi)ROS相對含量的測定

HaCaT細胞（106個/mL）以2 mL/孔接種于6 孔培養(yǎng)板，細胞分組及處理方法參考1.3.4節(jié)。用2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯（2’,7’-dichlorofuorescin diacetate，DCFH-DA）熒光探針檢測細胞內(nèi)的ROS相對含量，參照試劑盒說明書原位裝載探針，用DMEM將DCFH-DA稀釋至10 μmol/L，每孔加入1 mL DCFH-DA溶液，將6 孔板置于培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育30 min。PBS洗滌細胞3 次，用熒光酶標儀在500 nm激發(fā)波長和525 nm發(fā)射波長下測定DCFH-DA熒光強度，按下式計算各組細胞內(nèi)ROS相對含量。

1.3.7 細胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px活力和GSH、MDA含量的測定

HaCaT細胞（106個/mL）以2 mL/孔接種于6 孔培養(yǎng)板，細胞分組及處理方法同1.3.4節(jié)，待細胞貼壁后進行加藥處理，對照組和UVB照射組更換為1% BSA DMEM；LPOPC組和PABA組及6 種單體化合物組分別更換為含100 μg/mL LPOPC和50 μmol/L PABA及6 種單體化合物的1% BSA DMEM。參考相應試劑盒說明書測定SOD、CAT和GSH-Px活力以及GSH、MDA含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實驗數(shù)據(jù)至少3 次重復，結果以平均值±標準差表示。采用Excel 2007軟件處理數(shù)據(jù)和作圖。采用SPSS 24.0軟件進行單因素方差分析，采用Duncan檢驗進行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 LPOPC及其單體化合物對HaCaT細胞活力的影響

由圖1可知，隨著藥物劑量的增大，HaCaT細胞活力逐漸降低。與對照組相比，50 μg/mL LPOPC對細胞活力無顯著影響（P＞0.05），當LPOPC質(zhì)量濃度增加至100 μg/mL時，細胞活力為（84.12±7.03）%，而當質(zhì)量濃度繼續(xù)增加至150 μg/mL時，細胞活力顯著下降至（53.47±4.40）%（P＜0.05）。0～50 μmol/L PABA和6 種單體化合物處理細胞活力均大于80%，而當處理濃度增加至100 μmol/L時，僅表兒茶素處理細胞活力仍大于80%，其余化合物處理細胞活力均小于80%。一般細胞活力大于80%可視為藥物對細胞無毒性，因此，選擇12.5、25、50、100 μg/mL LPOPC和6.25、12.5、25、50 μmol/L PABA及6 種單體化合物進行后續(xù)實驗。

圖1 不同劑量的LPOPC（A）、PABA和6 種單體化合物（B）對HaCaT細胞活力的影響Fig. 1 Effect of LPOPC (A), PABA and six monomeric compounds (B)at different concentrations on HaCaT cell viability

2.2 UVB輻照對HaCaT細胞活力的影響

由圖2可知，本實驗所選UVB照射劑量對HaCaT細胞活力有顯著影響，細胞活力隨著UVB照射劑量的增大而顯著降低（P＜0.05），當照射劑量達到250 mJ/cm2時，細胞活力僅為（20.95±9.88）%。通過SPSS 24.0軟件對細胞活力和照射劑量進行擬合分析，結果表明細胞活力為50%時的照射劑量為142 mJ/cm2，后續(xù)研究采用該劑量建立UVB輻照損傷細胞模型。

圖2 UVB輻射強度對HaCaT細胞活力的影響Fig. 2 Effect of UVB intensity on HaCaT cell viability

2.3 LPOPC及其單體化合物對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷的影響

由圖3可知，LPOPC及6 種單體化合物對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷均有一定的保護作用。與對照組相比，UVB照射組細胞活力顯著降低至（48.74±1.26）%（P＜0.05）；與UVB照射組相比，12.5 μg/mL LPOPC處理細胞活力無顯著變化（P＞0.05），25、50、100 μg/mL LPOPC處理可顯著提高細胞活力（P＜0.05），100 μg/mL時細胞活力達到（84.26±10.32）%。經(jīng)6.25～50 μmol/L的6 種單體化合物處理后，HaCaT細胞活力均顯著高于UVB照射組（P＜0.05）；50 μmol/L時，meliasendanin B、表兒茶素、原花青素A2、原花青素A1、槲皮素-3-O-蕓香糖苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷處理組細胞活力分別達到（75.22±14.94）%、（96.96±1.61）%、（96.19±10.14）%、（93.10±10.02）%、（82.28±5.15）%和（69.31±1.84）%；經(jīng)相同濃度的3 種原花青素單體（表兒茶素、原花青素A2和原花青素A1）處理后，細胞活力均高于其他類單體組分（meliasendanin B、槲皮素-3-O-蕓香糖苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷），且相同濃度的原花青素A2和陽性藥物PABA處理后細胞活力相當，提示荔枝果殼A型原花青素對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷具有良好的保護作用。此外，隨著各化合物劑量的增加，細胞活力逐漸升高，呈現(xiàn)劑量-效應關系。因此選取最高作用劑量，即100 μg/mL LPOPC和50 μmol/L PABA及6 種單體化合物進行后續(xù)實驗。

圖3 不同濃度的LPOPC、PABA和6 種單體化合物對UVB誘導HaCaT細胞活力的影響Fig. 3 Effects of LPOPC, PABA and six monomeric compounds at different concentrations on cell viability of HaCaT cells induced by UVB

2.4 LPOPC及其單體化合物對UVB誘導氧化損傷的HaCaT細胞內(nèi)ROS相對含量的影響

ROS是細胞氧化損傷的重要標志因子，通過檢測DCFH-DA被細胞內(nèi)ROS氧化的DCF熒光強度來分析細胞內(nèi)ROS相對含量變化，從而反映出細胞氧化損傷的程度[26]。如圖4所示，UVB照射誘導HaCaT細胞內(nèi)ROS相對含量顯著升高至對照組的2.94 倍（P＜0.05）。而LPOPC及6 種單體化合物的干預處理對UVB誘導細胞內(nèi)ROS相對含量的升高均有顯著抑制作用（P＜0.05），其中表兒茶素、原花青素A2和原花青素A1的干預作用較強，且原花青素A2對UVB誘導ROS生成的抑制作用優(yōu)于陽性藥物PABA組，其干預后細胞內(nèi)ROS相對含量趨于對照組。以上結果表明，荔枝果殼原花青素類化合物，尤其是原花青素A2，能顯著降低UVB誘導氧化損傷的HaCaT細胞內(nèi)ROS相對含量（P＜0.05），有效減輕細胞氧化應激，從而保護細胞。

圖4 LPOPC、PABA和6 種單體化合物處理對UVB誘導HaCaT細胞內(nèi)ROS相對含量的影響Fig. 4 Effects of LPOPC, PABA and six monomeric compounds on intracellular ROS relative content of HaCaT induced by UVB

2.5 LPOPC及其單體化合物對HaCaT細胞內(nèi)抗氧化酶活力、GSH含量和MDA含量的影響

細胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶和非酶類抗氧化物GSH是細胞氧化應激防御系統(tǒng)的重要組成部分，能有效清除自由基，阻止脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA產(chǎn)生，這些物質(zhì)水平均可以間接反映細胞氧化應激損傷的程度[27]。由圖5可知，與對照組相比，經(jīng)UVB照射后HaCaT細胞內(nèi)的SOD、CAT、GSH-Px活力和GSH含量均顯著降低（P＜0.05），MDA含量顯著增加（P＜0.05），表明UVB照射會打破HaCaT細胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)平衡，對細胞造成氧化損傷。LPOPC及6 種單體化合物的干預處理對受損細胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px、GSH、MDA水平的變化均有不同程度的改善作用?？傮w來看，表兒茶素、原花青素A2和原花青素A1的作用強于meliasendanin B、槲皮素-3-O-蕓香糖苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷，且與對照組相比，原花青素A2干預后細胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活力和GSH含量無顯著差異（P＞0.05），與陽性藥物PABA作用效果相當。上述結果表明，荔枝果殼原花青素能顯著增強UVB誘導HaCaT細胞的抗氧化能力，保護細胞免受氧化應激損傷，且6 種單體化合物中原花青素A2的保護作用最強。

圖5 LPOPC、PABA和6 種單體化合物處理對UVB誘導HaCaT細胞內(nèi)SOD活力（A）、CAT活力（B）、GSH-Px活力（C）、GSH含量（D）和MDA含量（E）的影響Fig. 5 Effects of LPOPC, PABA and six monomeric compounds on the activity of SOD (A), CAT (B), and GSH-Px (C), and the contents of GSH (D) and MDA (E) in HaCaT cells induced by UVB

3 討 論

皮膚是人體抵御不良環(huán)境或有害物質(zhì)的第一道物理屏障，UVB是造成皮膚光老化的主要波段，UVB輻射會引起角質(zhì)形成細胞氧化應激，造成細胞損傷甚至死亡[28]。目前，關于UVB輻射誘導HaCaT細胞氧化損傷已有較多研究報道[9-11,16,26]，但很少有研究涉及不同輻射劑量與細胞活力的關系。本研究首先探究了不同輻照劑量UVB對HaCaT細胞活力的影響，發(fā)現(xiàn)隨著輻照劑量的增加，HaCaT細胞活力逐漸降低，這與李辰等[29]研究得到的趨勢一致，然而，李辰等研究發(fā)現(xiàn)當照射劑量達到80 mJ/cm2時，細胞活力已降至30%左右，而本研究中照射劑量達到200 mJ/cm2時，細胞活力降至34.06%；He Yong等[30]測定了經(jīng)100～400 mJ/cm2UVB照射的HaCaT細胞活力，發(fā)現(xiàn)100 mJ/cm2UVB照射對HaCaT細胞活力無顯著影響，當照射劑量達到400 mJ/cm2時，細胞活力仍然可達到77.59%，這些差異可能與輻照設備和處理方式不同有關。為方便后續(xù)研究，本研究選擇UVB照射后細胞活力為50%時的照射劑量（142 mJ/cm2）建立紫外線損傷HaCaT細胞模型，評價荔枝果殼原花青素對UVB誘導的皮膚細胞損傷的保護作用。結果表明，25、50、100 μg/mL LPOPC處理后HaCaT細胞活力相比UVB組均顯著升高（P＜0.05），且呈劑量-效應關系，與陽性對照天然防曬藥物PABA的作用趨勢相近。由此推測荔枝果殼原花青素對UVB誘導的皮膚損傷具有良好的保護作用。

紫外線輻射引起皮膚損傷的主要原因是產(chǎn)生過多的ROS和自由基。經(jīng)UVB照射后，HaCaT細胞會產(chǎn)生大量ROS，破壞抗氧化防御系統(tǒng)，使抗氧化酶活力下降，產(chǎn)生大量的自由基并攻擊細胞，導致脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量增加，引起細胞氧化損傷[31]。SOD、CAT和GSH-Px是機體中重要的抗氧化酶，這些酶能夠通過多種內(nèi)源性細胞防御系統(tǒng)消除ROS，并對細胞氧化損傷有一定的保護作用[8]。多項研究證實，多羥基化合物具有清除ROS和抗脂質(zhì)過氧化的作用，可以有效延緩皮膚光老化[4-11]。本研究發(fā)現(xiàn)，LPOPC能有效降低經(jīng)UVB輻射后的HaCaT細胞內(nèi)的ROS相對含量，顯著增加受損細胞的SOD、CAT、GSH-Px活力和GSH含量，減少氧化應激產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，從而提升角質(zhì)細胞抵抗氧化應激的能力，抑制UVB輻射所致的皮膚損傷。有研究表明，柿子低聚原花青素能增強UVB輻射誘導的HaCaT細胞抗氧化酶系統(tǒng)的活性，抑制ROS的產(chǎn)生[32]，與本研究結果一致。

目前關于原花青素的抗紫外線致皮膚氧化損傷及光老化的研究已有不少報道，但以針對葡萄籽、黑果枸杞等來源的B型原花青素的研究居多[33-36]，而對于A型原花青素的抗光老化效果鮮有報道。荔枝果殼中富含以A型結構為主的原花青素類化合物，LPOPC緩解皮膚氧化損傷的主要活性組分尚不清楚。因此本實驗測定并比較LPOPC及各單體化合物（meliasendanin B、表兒茶素、原花青素A2、原花青素A1、槲皮素-3-O-蕓香糖苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷）對UVB誘導HaCaT細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化相關酶SOD、CAT、GSH-Px的活力和非酶類抗氧化物GSH以及過氧化產(chǎn)物ROS、MDA的水平，研究發(fā)現(xiàn)表兒茶素、原花青素A2和原花青素A1的抗氧化損傷能力明顯強于meliasendanin B、槲皮素-3-O-蕓香糖苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷，這可能與原花青素類化合物相比于黃酮苷類化合物因含有更多的活性羥基而具有更強的自由基清除能力有關[37-38]。且有研究報道，表兒茶素和原花青素A2是荔枝果殼中最主要的原花青素類化合物[19-20]，提示表兒茶素和原花青素A2是荔枝果殼原花青素中對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷具有防護作用的主要活性組分。此外，原花青素A2對UVB誘導HaCaT細胞氧化損傷的保護作用最強，與陽性藥物PABA相當，提示原花青素A2具有作為天然防曬物質(zhì)代替PABA的可能性。

綜上所述，荔枝果殼原花青素對UVB誘導氧化應激損傷的HaCaT細胞具有保護作用，其中原花青素A2是保護作用最強的活性組分。本實驗結果可為荔枝果殼A型原花青素及其主要活性組分原花青素A2在防護皮膚紫外損傷領域中的應用提供參考，但仍需進一步研究以闡明其保護途徑和調(diào)控機制。