陳東亮，鐘楚，簡少芬，李林軒，韋坤華*，繆劍華*

1.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心，廣西 南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 經(jīng)濟(jì)作物研究所，廣西 南寧 530007

八角蓮Dysosma versipellis（Hance）M.Cheng ex Ying別名山荷葉、金魁蓮、旱八角、荷葉蓮、江邊一碗水、獨(dú)角蓮等，為小檗科（Berberidaceae）鬼臼屬（Dysosma）多年生宿根草本藥用植物[1]。八角蓮始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，以“鬼臼”之名列為下品，“主殺蠱毒鬼注，精物，辟惡氣不祥，逐邪，解百毒”[2]。據(jù)《本草綱目》[3]、《證類本草》[4]、《植物名實(shí)圖考》[5]和《全國中草藥匯編》[1]等文獻(xiàn)記載，八角蓮以根莖入藥，能夠清熱解毒、祛瘀消腫、化痰散結(jié)，治療癰腫、跌打損傷、咽喉腫痛等[6]。現(xiàn)代藥理研究表明，其根狀莖中鬼臼毒素（podophyllotoxin）含量極高，具有較好的抗腫瘤、抗病毒及抗菌等生物活性[7]。近年來，八角蓮的開發(fā)利用備受關(guān)注。然而，據(jù)野外調(diào)查顯示，1960 年以前八角蓮在比較偏僻山區(qū)較為常見，1975 年后主要分布于自然保護(hù)區(qū)或以農(nóng)家栽培形式生存。隨著人類對自然的不斷索取，八角蓮的適生環(huán)境正在縮小，資源急劇減少[8]。這說明人們對其植物資源的開發(fā)和利用缺乏科學(xué)的指導(dǎo)且保育意識(shí)淡薄。目前，八角蓮已被列為國家Ⅱ級(jí)保護(hù)瀕危植物[9]。因此，加強(qiáng)其保育研究對實(shí)現(xiàn)八角蓮資源的可持續(xù)利用具有重要意義。

1 資源現(xiàn)狀

八角蓮是我國特有的瀕危植物[10]。其大多為零星分布，種群數(shù)量小，主要分布于湖北、貴州、廣西、四川、江西、重慶、陜西、湖南、云南、安徽、廣東、浙江等地，陜西南部大巴山北坡為其分布的最北界[11]。王萬海等[12]通過查閱文獻(xiàn)、走訪市場等方式對湖北恩施地區(qū)的15 個(gè)樣地（N29°22′11.3″～30°50′10.2″，E110°18′50.0″～108°55′57.8″）的八角蓮野生資源進(jìn)行了實(shí)地調(diào)查，并對樣地八角蓮的蘊(yùn)藏量進(jìn)行了估算，認(rèn)為恩施產(chǎn)區(qū)的八角蓮蘊(yùn)藏總量約為832.91 kg，年允收量僅為138.8 kg，且調(diào)查發(fā)現(xiàn)很多分布區(qū)的八角蓮已幾近滅絕。韋蓉靜等[13]對貴州省黔南州三都縣八角蓮群落進(jìn)行生態(tài)學(xué)調(diào)查及生態(tài)位分析，認(rèn)為該地區(qū)八角蓮生態(tài)位寬度較小且種間競爭激烈，自然條件下生長狀態(tài)與其他常見物種比較處于劣勢。管畢財(cái)[8]在2006 年對湖北神農(nóng)架、重慶金佛山、四川峨眉山等10 個(gè)八角蓮群體進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)八角蓮適宜生境正在縮小，資源急劇減少，各群體之間呈明顯間斷的“島嶼狀”分布，且大群體越來越小，小群體逐漸消失，棲息地退縮到了人類日?；顒?dòng)不曾觸及的森林，甚至自然保護(hù)區(qū)內(nèi)的群體也被偷采，導(dǎo)致其棲息地不斷縮小。

2 瀕危成因

2.1 內(nèi)部致瀕因子

2.1.1 自交不親和障礙 Bawa[14]認(rèn)為，當(dāng)大多數(shù)自花授粉植株不結(jié)實(shí)時(shí)，這個(gè)種就應(yīng)被認(rèn)為具有自交不親和的繁育系統(tǒng)。管畢財(cái)[8]對八角蓮進(jìn)行了套袋實(shí)驗(yàn)、自花傳粉實(shí)驗(yàn)和同株異花實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)同株同花和同株異花授粉均不結(jié)實(shí)或結(jié)實(shí)量極少，而異株異花結(jié)實(shí)率極高，表明八角蓮繁育系統(tǒng)存在較高程度的自交不親和障礙；通過對八角蓮繁殖系統(tǒng)的進(jìn)一步研究，認(rèn)為八角蓮屬于自交不親和的專性異花授粉植物，授粉主要依賴傳粉昆蟲，且通過觀察發(fā)現(xiàn)有效傳粉昆蟲長角甲蟲（long hornbeetle）的飛行距離不超過2 m，訪花頻率很低，造成八角蓮群體間缺乏有效的花粉傳播。這是其結(jié)實(shí)率低的主要原因，也是造成八角蓮瀕危的重要內(nèi)部因子。

2.1.2 遺傳多樣性低 周新聞[15]利用等位酶技術(shù)和簡單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性（ISSR）分析技術(shù)研究了八角蓮5 個(gè)居群和六角蓮1 個(gè)居群遺傳變異情況，認(rèn)為八角蓮居群的遺傳多樣性水平低于六角蓮。李忠超[16]研究認(rèn)為，由于八角蓮生境片段化、異質(zhì)化，地理空間隔離和繁育機(jī)制障礙，其種群間基因流小，種群內(nèi)遺傳多樣性水平較低，種群間遺傳分化較大，小種群效應(yīng)明顯。以上研究結(jié)果均表明，八角蓮的遺傳多樣性低、進(jìn)化潛力和適應(yīng)性較弱。

2.1.3 自然繁殖率低 八角蓮自然狀態(tài)下靠種子繁殖后代，但劉燕琴等[17]研究發(fā)現(xiàn)，其種子具有休眠的特點(diǎn)，休眠期從8月到次年的3月。種子休眠期越長，種子活力就越容易喪失[18]，致使自然繁殖率較低，這可能是野外很難觀察到八角蓮種子苗的主要原因。

2.2 外部致瀕因子

2.2.1 野生資源的過度采挖 由金文等[19]在湖北神農(nóng)架地區(qū)走訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2004 年有人從巴東沿渡河一次性挖走八角蓮根莖超過150 kg，神農(nóng)架林區(qū)附近林叢中八角蓮已近枯竭。由于無節(jié)制、掠奪性采挖，八角蓮野生資源及其生境受到了嚴(yán)重破壞，原分布地區(qū)資源已臨近枯竭，全國的野生資源分布呈縮小的趨勢。

2.2.2 生長環(huán)境的破壞 2006年管畢財(cái)[8]對全國10個(gè)八角蓮主要分布區(qū)的生境調(diào)查顯示，除湖南天平山自然保護(hù)區(qū)、安徽天堂寨自然保護(hù)區(qū)及江西九江海行鄉(xiāng)3 個(gè)分布區(qū)的生境仍適宜八角蓮繁殖外，湖北神農(nóng)架、重慶南川、四川峨眉山、陜西嵐皋南宮山、湖北九宮山和重慶縉云山的八角蓮生境均受到不同程度的破壞。近年來，由于違反自然規(guī)律的墾殖、旅游開發(fā)和生態(tài)環(huán)境惡化等原因，八角蓮喪失了適宜的生存環(huán)境，造成其野生資源日益減少，瀕臨枯竭[20]。

以上內(nèi)因和外因的共同作用加劇了藥用植物八角蓮的瀕危程度。因此，研究八角蓮的就地保育、遷地保育和回歸保育對瀕危藥用植物八角蓮的可持續(xù)利用具有重要意義。

3 就地保育

就地保育主要通過封禁、輪采、人工授粉、人工補(bǔ)種及人工管理等方式對藥用植物實(shí)現(xiàn)有效保護(hù)。劉燕琴等[21]通過人工授粉和人工補(bǔ)種方法，對分布于重慶市南川區(qū)的廟壩石人山、松豐對窩山、槐坪山的野生八角蓮資源進(jìn)行了人工撫育研究，分別統(tǒng)計(jì)人工授粉的結(jié)實(shí)率和人工補(bǔ)種的成活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過人工授粉處理，廟壩石人山、松豐對窩山、槐坪山的八角蓮結(jié)實(shí)率分別由原來的8.1%、5.0%、2.5%提高到73.4%、91.6%、30.0%；人工補(bǔ)種八角蓮栽培苗、種子苗、組培定植苗、組培苗，成活率依次為96.7%、93.3%、50.0%、15.0%；定植1年，根部增質(zhì)量依次為80.0%、86.2%、103%、120%。人工授粉有效提高了野生八角蓮的結(jié)實(shí)率，人工補(bǔ)種方式能夠有效增加八角蓮的種群數(shù)量及種群內(nèi)個(gè)體數(shù)。

4 遷地保育

植物遷地保育指把植物活體、器官和組織等轉(zhuǎn)移到自然生境之外來繁育生長的一種保育方式，是植物多樣性保護(hù)的重要補(bǔ)充手段[22]。對于以殘存種群或由于自然、人為因素造成生境條件已經(jīng)發(fā)生改變的瀕危物種而言，遷地保育是必要且最為有效的措施。藥用植物園、藥用專類園、藥用植物種質(zhì)圃等是目前開展藥用植物遷地保育的主要單位。將自然生境的藥用植物物種轉(zhuǎn)移到可控條件的地區(qū)保存，能方便研究藥用植物的遺傳、繁殖、生長發(fā)育規(guī)律，提取藥用植物有效成分，研究藥用植物藥效形成與維持規(guī)律。這些規(guī)律對藥用植物保育起基礎(chǔ)支持的作用。

4.1 引種馴化

4.1.1 人工栽培 近年來，八角蓮各種內(nèi)部和外部致瀕因子的共同作用使其瀕臨滅絕。實(shí)踐證明，野生變家種是實(shí)現(xiàn)野生藥用植物資源有效保護(hù)和可持續(xù)利用的有效途徑。早在20 世紀(jì)80 年代，人們就開始了八角蓮野生轉(zhuǎn)家種的栽培研究[23]。經(jīng)過30 余年的研究積累，對于八角蓮的引種栽培技術(shù)已經(jīng)取得了初步成果。甘國菊等[24]在前人研究基礎(chǔ)上，總結(jié)了八角蓮的人工栽培技術(shù)，主要包括選地整地、育苗、定植、搭設(shè)蔭棚、中耕除草、肥水管理、病蟲害防治等內(nèi)容，為廣大藥農(nóng)提供了技術(shù)指導(dǎo)。劉少軒等[25]選用3 年生八角蓮苗，在半楓荷林不同郁閉度及空地種植，進(jìn)行了栽培試驗(yàn)，研究認(rèn)為，適宜種植八角蓮的半楓荷林分最佳郁閉度為0.5～0.7，在這個(gè)郁閉度之間八角蓮的成活率、保存率及生長量都較好。陸煒強(qiáng)[26]研究了八角蓮規(guī)范化生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)，依照我國中藥材產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，制定了適用于浙江省磐安縣八角蓮生產(chǎn)基地及其毗鄰地區(qū)的八角蓮規(guī)范化生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。為了進(jìn)一步規(guī)范中藥八角蓮栽培技術(shù)，原國家林業(yè)局發(fā)布了《八角蓮栽培技術(shù)規(guī)程》（LY/T 2952—2018）[27]。該標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施有效規(guī)范了中藥材八角蓮的生產(chǎn)過程，在一定程度上保證了藥材質(zhì)量。為了保護(hù)野生資源及滿足市場需求，四川省自然資源科學(xué)研究院秦小波等[28]通過對峨眉山特有八角蓮，特別是發(fā)現(xiàn)的新變種峨眉八角蓮進(jìn)行了多年資源圃保育及繁殖，基本馴化了峨眉八角蓮，并將其應(yīng)用于當(dāng)?shù)厝斯ぴ耘嗍痉丁Ｔ搱F(tuán)隊(duì)從2012 年起連續(xù)在峨眉山進(jìn)行最小3.33 hm2的試種，與當(dāng)?shù)仄髽I(yè)合作栽培八角蓮2.67 hm2，此后面積增加達(dá)百畝（1畝≈666.67 m2），畝產(chǎn)鮮質(zhì)量達(dá)1000 kg。

4.1.2 引種材料 中藥材八角蓮的基原植物為八角蓮。此外，還有云南八角蓮D.aurantiocaulis（Hand.?Mazz.）Hu、小八角蓮D.difformis（Hemsl.et Wils.）T.H.Wang ex Ying、貴州八角蓮D.majorensis（Gagnepain）M.Hiroe、六角蓮D.pleiantha（Hance）Woodson、西藏八角蓮D.tsayuensisYing 等變種[10]，引種時(shí)要加以區(qū)分。內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2（ITS2）序列作為DNA 條形碼可準(zhǔn)確鑒別八角蓮藥材的基原植物及其混偽品，為八角蓮物種鑒定及藥材真?zhèn)舞b別提供依據(jù)[29?30]。因其野外自然狀態(tài)下產(chǎn)種量極少，農(nóng)家引種時(shí)多采挖根莖用來繁殖種苗。

4.1.3 生態(tài)適應(yīng)性 適應(yīng)性評(píng)價(jià)是衡量植物遷地保育成功與否的關(guān)鍵。藥用植物引種馴化不僅需要保證種源可靠，還需要注意生態(tài)環(huán)境在馴化過程中扮演的角色。溫度和光照是影響植物生長的重要生態(tài)因子。Karuppaiya 等[31]研究表明，低溫下調(diào)控八角蓮鬼臼毒素合成的基因表達(dá)量上調(diào)，促進(jìn)了鬼臼毒素在根莖的積累。在低溫（4～6 ℃）條件下生長的八角蓮的生物量和葉綠素、類胡蘿卜素、鬼臼毒素含量均高于在25～30 ℃溫室大棚生長的八角蓮。Zhao 等[32]研究不同光照強(qiáng)度（10%、30%、50%、100%自然光）對八角蓮形態(tài)性狀、物質(zhì)分配、光合作用及其活性成分積累的影響發(fā)現(xiàn)，隨著光照強(qiáng)度的增加，植株變矮，葉片變小，而在盛夏（7 月）日照充足（100%自然光）的情況下葉片受損嚴(yán)重；在過度光照導(dǎo)致葉片死亡后，8 月會(huì)長出新葉，而在其他3 種光照下生長的植株則表現(xiàn)出旺盛的綠葉；在30%自然光照射下，葉片為暗綠色；光照強(qiáng)度對八角蓮總生物量無顯著影響，且4 種光照強(qiáng)度梯度下的物質(zhì)分配模式相似，生物量平均有85%分配給了地下器官（根莖），其余15%分配給了地上植物部分；30%自然光光照強(qiáng)度下，八角蓮表現(xiàn)出最佳的營養(yǎng)生長和光合作用能力，鬼臼毒素積累量較高。因此，八角蓮是一種能夠很好地適應(yīng)光照變化的耐陰植物。在八角蓮的引種栽培和回歸保育實(shí)踐時(shí)，建議將光照強(qiáng)度設(shè)置為10%～50%自然光，尤其是30%自然光。

4.2 種苗繁育

八角蓮的種苗繁育方式通常有種子繁育、根莖繁育和組織培養(yǎng)繁育3種方式。

4.2.1 種子繁育 種子繁殖是八角蓮最原始的繁殖方式。其種子在自然條件下具有休眠期長的生理特性。劉燕琴等[17]認(rèn)為，種皮和胚乳制約、種子生理后熟是引起八角蓮種子休眠的主要原因，用400 mg·L-1赤霉素（GA3）溶液浸種24 h 或6～7 ℃低溫層積均能在一定程度上解除休眠，促進(jìn)萌發(fā)。其中，以6～7 ℃低溫層積150 d 效果較好，發(fā)芽率和發(fā)芽勢分別達(dá)到88.5%和30.4%。貯藏條件和方式也是影響種子活力的重要因素。研究表明，對種子進(jìn)行砂藏可以提高種子的發(fā)芽率[33]。雖然，通過激素處理和低溫層積可以在一定程度上解除休眠、促進(jìn)萌發(fā)，但據(jù)八角蓮有性繁殖的初步研究發(fā)現(xiàn)，自然情況下八角蓮坐果率低于8%，而成熟的八角蓮果實(shí)在5%以下，果實(shí)內(nèi)僅含有效種子4～6 粒[33]。由于八角蓮存在自交不親和障礙，自然狀態(tài)下結(jié)實(shí)率低下，可用于育苗的種子量有限成為八角蓮種子育苗的瓶頸問題。對于異花授粉植物，人工授粉是提高其結(jié)實(shí)率的重要途徑。劉燕琴等[34]經(jīng)過多年的研究，認(rèn)為采用人工授粉方法可以提高八角蓮種子結(jié)實(shí)率。但人工授粉費(fèi)時(shí)費(fèi)工、效率低下，依然無法滿足規(guī)?；绲男枨蟆?/p>

4.2.2 根莖繁育 根莖繁殖是部分根莖類植物的繁殖方式，具有出苗率高、不容易發(fā)生徒長、生長勢和抗逆性較強(qiáng)、可較好保持品種種性等優(yōu)點(diǎn)。八角蓮根狀莖先端結(jié)節(jié)每年可形成1 個(gè)幼芽，第2～3節(jié)上有芽苞，當(dāng)受外界創(chuàng)傷或人為切割時(shí)，可促使其節(jié)上芽苞萌發(fā)，長出新苗，而其后的結(jié)節(jié)則逐漸老化，再生能力很弱。因此，可利用八角蓮先端的1～3 節(jié)進(jìn)行無性繁殖。我國華中地區(qū)一般在7 月下旬至8 月上旬（西南地區(qū)一般2—3 月[35]）采挖八角蓮根莖，切下其第1～3 個(gè)結(jié)節(jié)作繁殖材料，隨采隨栽。可在畦面上橫向開溝條播，行距20 cm，播幅10 cm，溝深3～4 cm，在溝內(nèi)按每隔8～10 cm種上1 個(gè)芽苞，用火土灰蓋種，充分澆水后覆草保溫保濕[24]。但由于目前八角蓮資源量稀少，加之其根莖只有長在前端的2 個(gè)圓盤節(jié)具有分生能力，后面的圓盤節(jié)木質(zhì)化嚴(yán)重，無再生能力，利用其根莖進(jìn)行規(guī)模化育苗困難很大。此外，八角蓮的藥用部分主要是根莖，為了不浪費(fèi)其藥用部分，須要考慮利用其他非藥用部位來代替根莖進(jìn)行育苗。韋蓉靜等[36]嘗試用根莖根代替根莖繁殖，但經(jīng)對比，根莖根的成苗率僅為38%，比根莖育苗法成苗率低64%。劉燕琴等[37]開展了莖節(jié)育苗不同播種時(shí)間、不同生長年限莖節(jié)出苗特點(diǎn)的研究，對多年生莖節(jié)采用藥劑處理法，篩選合適的激素組合、濃度，促進(jìn)了多年生莖節(jié)的出苗率；同時(shí)，對多年生莖節(jié)采用藥劑處理合并室內(nèi)砂藏處理能較好地促進(jìn)其萌芽，提高了莖節(jié)的出苗率。該研究組在對須根播種方法、材料規(guī)格、播種時(shí)間等研究的基礎(chǔ)上，對須根藥劑處理的激素組合進(jìn)行了篩選，并采用合適的藥劑處理、室內(nèi)河沙低溫層積等方法有效促進(jìn)了須根苗的分化、出苗。徐銘澤等[38]采用正交法，對根狀莖結(jié)節(jié)進(jìn)行浸泡之后，將根狀莖栽入培養(yǎng)土中，再用對應(yīng)的激素水溶液代替自來水進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，選取根狀莖第1 節(jié)結(jié)節(jié)，1.0 mg·L-16?芐氨基腺嘌呤（6?BA）+0.2 mg·L-1苯基噻二唑基脲（TDZ）激素水溶液中浸泡24 h，不定芽誘導(dǎo)效果最好，每個(gè)根狀莖誘導(dǎo)的不定芽數(shù)可達(dá)5～7 個(gè)，表明用激素水溶液對八角蓮根狀莖進(jìn)行浸泡預(yù)處理和澆灌，能顯著提高八角蓮不定芽的產(chǎn)量。

4.2.3 組織培養(yǎng)繁育 Jiang 等[39]于2012 年成功建立了八角蓮的高效組織離體快繁技術(shù)體系。該方法以八角蓮的根莖上的嫩芽為外植體，接種在MS+1.0 mg·L-16?BA+0.5 mg·L-1GA3+0.5 mg·L-1玉米素（Zea）培養(yǎng)基上6 周后，可直接分化出多個(gè)不定芽而不經(jīng)過愈傷組織階段；以葉片為外植體，接種在MS+0.5 mg·L-1萘乙酸（2,4?D）+0.2 mg·L-16?BA培養(yǎng)基上4 周內(nèi)即可誘導(dǎo)出愈傷組織，愈傷組織在MS+1.0 mg·L-16?BA+0.2 mg·L-1TDZ 培養(yǎng)基上6周內(nèi)可分化出不定芽；且從根莖的嫩芽和愈傷組織分化獲得的不定芽在1/2 MS+0.5 mg·L-1吲哚丁酸（IBA）+0.5 g·L-1活性炭（AC）培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周，生根率可達(dá)100%；在蛭石?土壤（1∶1）的基質(zhì)中煉苗后移植到田間，成活率達(dá)85%。八角蓮離體組織培養(yǎng)體系的建立為瀕危植物八角蓮開辟了新的繁育途徑。該方法外植體用量少、短時(shí)間內(nèi)可繁殖大量種苗且對母體植株無損傷，彌補(bǔ)了種子繁殖和根莖繁殖的缺點(diǎn)，對瀕危植物八角蓮的遷地保護(hù)意義深遠(yuǎn)。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所廣西分所科研人員總結(jié)了八角蓮的組織培養(yǎng)繁殖方法，并制定了適用于廣西境內(nèi)八角蓮種苗規(guī)范化生產(chǎn)的八角蓮組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程[40]。利用此組織培養(yǎng)方法，組培苗種子誘導(dǎo)率為85.2%，組培苗生根率達(dá)85%以上，但有少量組培苗出現(xiàn)褐化，需進(jìn)一步對其進(jìn)行防褐化試驗(yàn)研究。在對藥用植物的遷地保護(hù)過程中，活性成分的變化仍是備受關(guān)注的問題。比較八角蓮愈傷組織和組織培養(yǎng)品及野生品中鬼臼毒素含量，發(fā)現(xiàn)八角蓮的組織培養(yǎng)品與野生品所含化學(xué)成分類型基本相同，但有效成分鬼臼毒素含量遠(yuǎn)低于野生品[41?43]。八角蓮為多年生藥用植物，主要以地下根莖入藥，但其根莖呈結(jié)節(jié)狀，每年長1 節(jié)，數(shù)年才能入藥用。育苗移植的八角蓮要8 年以上才能收獲，生產(chǎn)周期較長[22]。鑒于此，八角蓮組培苗移栽到野外生長數(shù)年后藥用成分含量是否能恢復(fù)到原野生品的水平還需要進(jìn)一步深入全面的研究。

4.3 種質(zhì)資源保存

目前，八角蓮種質(zhì)資源保存主要有活體植株保存、種子保存及離體組織器官保存3 種方式?；铙w保存主要以種質(zhì)圃栽培保存為主。四川省自然資源科學(xué)研究院熊鐵一等[44]收集了150余份野生八角蓮居群材料，建立了獨(dú)立的研究用八角蓮種質(zhì)資源圃。在種子保存方面，劉燕琴等[33]研究發(fā)現(xiàn)，從9月開始進(jìn)行4 ℃冰箱低溫貯藏，到次年2 月，八角蓮種子發(fā)芽率為0，說明八角蓮種子低溫貯藏技術(shù)還有待進(jìn)一步研究。因未進(jìn)行種子濕度管理，種子室內(nèi)砂藏法出苗率低于50%。而室內(nèi)砂藏保濕法的溫度、濕度能得到較好的控制，促進(jìn)了種子后熟，有效保持了種子活力，種子發(fā)芽率較高，出苗率可達(dá)90%。隨著八角蓮植物組織培養(yǎng)技術(shù)的日漸成熟，也可通過離體組織培養(yǎng)技術(shù)保存種質(zhì)資源。離體材料每隔一段時(shí)間（常規(guī)時(shí)間為1～2 個(gè)月）進(jìn)行繼代培養(yǎng)以保存種質(zhì)資源，但組織培養(yǎng)保存法存在遺傳材料變異的風(fēng)險(xiǎn)[45]。

5 回歸保育

回歸保育也稱再引入，是將人工繁殖體重新放回適合其生存的野生環(huán)境中去，重建較為完善的生態(tài)系統(tǒng)，提高生態(tài)系統(tǒng)生物多樣性及群落穩(wěn)定性，建立可自我維持的種群的保育方式[46]。八角蓮的回歸保育需根據(jù)其生長發(fā)育規(guī)律、野生原種適生環(huán)境及瀕危原因制定適宜的回歸保育方案。

5.1 回歸保育的類型

回歸保育主要有增強(qiáng)回歸、重建回歸和引種回歸3種類型[47]。增強(qiáng)回歸是在原有種群的基礎(chǔ)上，通過回歸增加物種數(shù)量；重建回歸即在生境中原有分布，但已經(jīng)消失了，其目的是通過種群的釋放與管理，擴(kuò)大物種的分布范圍；引種回歸是把物種回歸到合適的生境中，而不清楚該生境原來是否有回歸物種的分布[48]。由于八角蓮地理分布較廣，遍及我國16 個(gè)省、自治區(qū)和直轄市[49]，只是有些分布區(qū)原有種群數(shù)量減少或整個(gè)種群已消失。因此，可通過增強(qiáng)回歸在原有種群的基礎(chǔ)上增加八角蓮種群數(shù)量；通過重建回歸重新釋放一些八角蓮群體，回歸到原種群已消失的分布區(qū)，恢復(fù)原有八角蓮分布范圍?？紤]到資金和人力投入，對于主要分布區(qū)的八角蓮種質(zhì)資源只需要限制亂采亂挖現(xiàn)象、保證現(xiàn)有資源正常更新和繁殖即可。

5.2 回歸適宜區(qū)域的選擇

長期的自然馴化使八角蓮形成了喜陰濕環(huán)境、忌強(qiáng)光和干旱的生長特性，其生長在山谷、山坡常綠闊葉林、落葉闊葉林或竹林下陰濕處，透射光強(qiáng)度10%～50%，以30%的透光率下生長為最優(yōu)[39]。由于八角蓮的自交不親和特性，在野外自然狀態(tài)下主要通過昆蟲傳粉受精進(jìn)行后代繁殖。因此，在充分考慮八角蓮適生環(huán)境的前提下，應(yīng)盡量選擇傳粉昆蟲活動(dòng)頻繁的區(qū)域，或在該生境下通過放養(yǎng)傳粉昆蟲。為了便于八角蓮回歸保育的實(shí)施及后期的管理和監(jiān)控，最好選在國家或各地方自然保護(hù)區(qū)、國有林場等區(qū)域內(nèi)。

5.3 種苗繁育及要求

藥用植物在回歸保育時(shí)要盡量保留其野生原種的生物學(xué)特性及其藥效遺傳特性。雖然，通過種子繁殖、根莖繁殖和組織培養(yǎng)繁殖3 種繁殖方式都可以獲得八角蓮實(shí)生苗，但由于回歸野外除種苗用量大外還要求能較好地保持其遺傳特性。八角蓮本身產(chǎn)生種子數(shù)量有限，且種子存在休眠期，繁殖多代后會(huì)發(fā)生種性退化和種質(zhì)變異現(xiàn)象，不能完全保證其野生原種的生物學(xué)特性及其藥效特性。根莖繁殖對母體植株有一定損傷性，且不能滿足生產(chǎn)大量種苗的要求。因此，建議通過離體組織培養(yǎng)的方式來獲得八角蓮回歸種苗。種源須為野生原種，苗木須健壯無病蟲害，以保證種苗具備一定的野外條件生長能力，同時(shí)也可避免對回歸生境的危害。組培苗的繼代次數(shù)不能太多，若在人工條件下已經(jīng)繁殖多代則有可能導(dǎo)致其繁殖和自衛(wèi)能力降低，從而難以適應(yīng)野外惡劣的環(huán)境而無法生存?；貧w所用組培苗按《八角蓮組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》（DB45/T 1031—2014）[40]的要求生產(chǎn)。組培苗煉苗15 d 后，移栽于泥炭土?珍珠巖（1∶1）混合的苗缽中，在遮陰棚下生長30 d后即可移栽回歸至野外[26]。

5.4 移栽回歸

移栽時(shí)間在春、夏、秋季均可，以春季為最佳。具體可按參考文獻(xiàn)[26]和《八角蓮栽培技術(shù)規(guī)程》（LY/T 2952—2018）[27]進(jìn)行。

5.5 后期管護(hù)與監(jiān)測

定植后如無降雨，可進(jìn)行人工澆水。要保持土壤濕潤透氣。同時(shí)，注意排水，以防根系外露和爛根現(xiàn)象的出現(xiàn)。此外，也要意適時(shí)培土。為了滿足其生長發(fā)育的需要，在定植后，還要適時(shí)摘蕾、追肥[27]。待植株健壯生長后每隔半年或1年須去實(shí)地查看，及時(shí)清除纏繞在植株上的枝蔓及其他威脅八角蓮生長的不利因素。

6 討論

一系列內(nèi)因（自交不親和現(xiàn)象、遺傳多樣性低、自然狀態(tài)下結(jié)實(shí)率低）和外因（野生資源的過度采挖、生長環(huán)境的破壞）的共同作用加劇了藥用植物八角蓮的瀕危程度。為實(shí)現(xiàn)對其資源的可持續(xù)利用，對藥用植物八角蓮的保育學(xué)研究與實(shí)踐勢在必行。

藥用植物的保育不同于一般植物的保育，不僅要保護(hù)其野生原種免于瀕?；驕缃^，還要注意保持其藥效不喪失。保護(hù)物種需要研究種群的生活條件和干擾對其生存能力的影響，保護(hù)藥效需要研究藥效成分動(dòng)態(tài)積累及各種環(huán)境和遺傳因子對成分積累的影響[50]。通過就地保育可實(shí)現(xiàn)對八角蓮原始種群及生境的有效保護(hù)，從而為遷地保育的原始材料來源提供保障，為回歸保育的生境選擇提供實(shí)體參考。通過遷地保育能方便研究八角蓮的遺傳、繁殖、生長發(fā)育規(guī)律，提取其有效成分，研究其藥效的形成與維持規(guī)律。這些規(guī)律對八角蓮的藥效保護(hù)起基礎(chǔ)支持作用。藥用植物需要在特定環(huán)境下才能合成或積累藥用活性成分，有些藥用植物離開原生境其藥效也會(huì)下降或消失。所以，還需通過回歸保育將人工繁殖體重新放回適合其生存的野生環(huán)境中去，增加八角蓮野生種群的數(shù)量，擴(kuò)大野生資源分布范圍，重建較為完善的生態(tài)系統(tǒng)，提高生態(tài)系統(tǒng)生物多樣性及群落穩(wěn)定性，使其“源于自然，歸于自然”。此外，為保護(hù)八角蓮現(xiàn)有種群和將來回歸種群的生長和正常繁殖，地方政府和國家相關(guān)部門應(yīng)加大對其分布區(qū)的監(jiān)管力度，鞏固八角蓮保育成果，最終實(shí)現(xiàn)對八角蓮資源的可持續(xù)利用。最后，還需關(guān)注八角蓮保育效果，如所制訂保育策略實(shí)施一段時(shí)間后，對其分布區(qū)域、蘊(yùn)藏量、年允采量、市場供應(yīng)量等是否增加，是否能保持其原有的遺傳特征、化學(xué)特征和藥效特征等進(jìn)行評(píng)價(jià)和反饋。