景 添,王天星,陳 曦,陳鳳強(qiáng),馮 皓,李 佳,馬文濤*,陳德坤*
(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊凌 712100;2.陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,陜西西安 710119)
羊布病是對(duì)人和動(dòng)物威脅最大的布病之一[1],世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將布病列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病,我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。羊布病的傳染性極強(qiáng),主要引起母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎,導(dǎo)致患畜繁殖能力和生產(chǎn)性能下降,并影響畜產(chǎn)品質(zhì)量和安全。羊布病病原感染人后,能引起人發(fā)熱(波狀熱)、關(guān)節(jié)炎、睪丸腫痛,孕婦流產(chǎn)等,嚴(yán)重者可導(dǎo)致不孕不育或喪失勞動(dòng)能力。我國(guó)自1950年便開(kāi)始進(jìn)行布病的防控和凈化研究,1990年前后控制效果顯著,進(jìn)入21世紀(jì)之后,隨著人民生活水平的提高,我國(guó)羊存欄量也在不斷擴(kuò)大,布病疫情也達(dá)到了高峰。為了能更好地控制和凈化羊布病,作者歸納總結(jié)了近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)防控策略,并對(duì)我國(guó)羊布病的控制與凈化提出了相應(yīng)的建議。
羊布魯氏菌(馬耳他布魯氏菌,B.melitensis)和綿羊附睪布魯氏菌是羊布病的病原,屬于革蘭氏陰性包內(nèi)寄生菌。羊布魯氏菌最為常見(jiàn),可以感染山羊或綿羊;綿羊附睪布魯氏菌則主要感染綿羊。布病病原可分布于羊全身的各組織器官,長(zhǎng)期存在于羊群中難以清除,并且也可對(duì)人致病,可以通過(guò)空氣、飲食和受傷的皮膚、黏膜直接傳染人類。布魯氏菌對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng),60℃ 30 min即可被殺死,但對(duì)干燥環(huán)境抵抗力較強(qiáng),在干燥土壤中可生存2個(gè)月以上。許多消毒劑都可以將其殺死,有研究表明,復(fù)合季銨鹽類表面消毒劑在低使用劑量的情況下仍能保持良好的滅菌能力,建議作為布病的常用消毒劑[2]。
非懷孕羊感染布病后主要呈隱性經(jīng)過(guò),無(wú)明顯的臨床癥狀和病理變化,會(huì)表現(xiàn)輕微的結(jié)膜炎[3]。懷孕羊的主要癥狀是流產(chǎn),多發(fā)生在妊娠后期(第3~4個(gè)月),嚴(yán)重時(shí)綿羊的流產(chǎn)率可達(dá)40%,而山羊則高達(dá)50%~90%[4]?;佳蛄鳟a(chǎn)前2 d~3 d會(huì)出現(xiàn)體溫升高、食欲下降、精神沉郁,口渴,產(chǎn)道流出黃色的黏液或膿液等臨床癥狀。流產(chǎn)的母羊大多胎衣不下,流產(chǎn)胎兒大多數(shù)死亡,產(chǎn)后母羊仍可持續(xù)排出黏液或膿液,繼發(fā)慢性子宮炎,導(dǎo)致病羊不孕。慢性感染時(shí)則表現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛、跛行、乳房炎、睪丸炎或附睪炎等癥狀,公羊前期一側(cè)睪丸腫大,后期睪丸萎縮,有熱痛感,食欲減少,消瘦。
羊布病一年四季均可發(fā)生,產(chǎn)仔季節(jié)發(fā)病最多。其傳染源主要是受感染的羊,健康羊接觸其分泌物、流產(chǎn)后的胎盤(pán)、胎液和陰道分泌物以及乳汁[5]、精液等感染布病。此外,尿路也被認(rèn)為是羊布魯氏菌傳播的重要途徑[6]。羊布魯氏菌可通過(guò)呼吸道、消化道、生殖道黏膜以及損傷的皮膚等侵入機(jī)體,在動(dòng)物之間水平傳播,一般不發(fā)生人傳人現(xiàn)象。布病的潛伏期為14 d~180 d,病原菌能從處于潛伏期或隱性感染羊的乳汁、精液、唾液、排泄物等和呼出的氣體中排出并傳染給同群的其他羊,羊被感染后可以終生攜帶病原菌成為移動(dòng)的傳染源[3]。
針對(duì)羊布病目前尚無(wú)特效療法,消滅傳染源和切斷傳播途徑是凈化該病的關(guān)鍵,同時(shí)還要注意保護(hù)易感羊群,因此,羊布病最終還是要依靠檢疫、撲殺、隔離等措施凈化。由于目前我國(guó)布病使用的強(qiáng)制性疫苗都是光滑型弱毒疫苗,其缺點(diǎn)之一是會(huì)干擾血清學(xué)檢測(cè),且只要使用疫苗,同群其他未接種疫苗的羊血清學(xué)檢測(cè)都會(huì)呈現(xiàn)陽(yáng)性,因此控制和凈化布病的后期應(yīng)實(shí)行“不免疫+監(jiān)測(cè)撲殺”的措施。
根據(jù)布病防控的基本原則,首先應(yīng)該確定流行病區(qū)域,然后通過(guò)病原學(xué)診斷和血清學(xué)檢測(cè)掌握羊群的養(yǎng)殖方式、數(shù)量、個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)群陽(yáng)性率等基本情況,明確羊布病流行情況,并以縣(市、區(qū))為單位劃分未控制區(qū)、控制區(qū)、穩(wěn)定控制區(qū)和凈化區(qū),從而實(shí)施不同的防控策略。在全國(guó)范圍內(nèi),截至2018年已有29個(gè)省(直轄市或自治區(qū))發(fā)現(xiàn)羊布魯氏菌種[7],且2017年-2019年流產(chǎn)羊群布病個(gè)體陽(yáng)性率分別為19.08%、36.29%和39.51%,群體陽(yáng)性率分別為54.72%、84%和86.36%[8],處于不斷上升趨勢(shì)。在這種情況下,要加大防疫力度和資金投入,阻止感染進(jìn)一步擴(kuò)大。
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部根據(jù)我國(guó)布病的發(fā)生和流行程度,將全國(guó)的省份劃分為3個(gè)類型的區(qū)域。一類地區(qū)的羊群需要強(qiáng)制免疫,二類地區(qū)個(gè)體檢測(cè)陽(yáng)性率≥0.5%時(shí)可采取免疫措施,三類地區(qū)禁止免疫。并規(guī)定每年春秋兩季對(duì)羊群進(jìn)行免疫,秋季免疫(交配前1個(gè)月)時(shí),對(duì)新生羔羊(3月齡以上)首免以及免疫期到的羊進(jìn)行接種,首免的羊一般在初免后1個(gè)月左右加強(qiáng)免疫一次,免疫時(shí)盡量避免同時(shí)服用抗生素。免疫后的羊群,要進(jìn)行定期檢測(cè),掌握羊群免疫抗體水平,水平較低時(shí)要及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。
我國(guó)常用的疫苗有牛種A19、羊種M5和豬種S2疫苗,這些弱毒疫苗可以有效地刺激細(xì)胞介導(dǎo)免疫對(duì)布病的反應(yīng),但同時(shí)也存在使孕羊流產(chǎn),干擾血清學(xué)診斷,引起人類感染等不足之處。羊群免疫大部分地區(qū)首選性能良好且安全性高的S2疫苗[9],雖然M5疫苗的轉(zhuǎn)陽(yáng)率高于S2疫苗,但容易引起流產(chǎn),且口服免疫時(shí)S2疫苗比M5疫苗效果好[10]。最新有研究發(fā)現(xiàn),干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3 (IFITM3)是一種高效的抗細(xì)胞內(nèi)病原體蛋白,而M5疫苗株可以刺激巨噬細(xì)胞分泌富含IFITM3的外泌體[11],讓人們對(duì)含IFITM3的外泌體抗布魯氏菌的作用機(jī)制和疫苗的研制有了新的認(rèn)識(shí)和方向。此外,一些基因工程疫苗和外膜囊泡疫苗、菌殼疫苗等新型疫苗也陸續(xù)被研究,如研究發(fā)現(xiàn),16MΔvjbR被發(fā)現(xiàn)其比Rev.1對(duì)懷孕母羊的保護(hù)力度更大[12],且用于非懷孕羊時(shí)未見(jiàn)排毒和表現(xiàn)與疫苗接種相關(guān)的臨床癥狀[13];還有將布魯氏菌FLIC蛋白與作為載體的糖基化殼聚糖納米粒子結(jié)合,可以刺激接種動(dòng)物產(chǎn)生較高水平的IgG抗體,是一種潛在的新型布病疫苗[14]。
當(dāng)一類地區(qū)布病個(gè)體陽(yáng)性率小于2%或群體陽(yáng)性率小于5%時(shí),則采取非免疫的監(jiān)測(cè)凈化措施。我國(guó)凈化措施一般采取“檢測(cè)-撲殺-監(jiān)測(cè)-凈化”的方法,每年至少兩次根據(jù)估計(jì)的最大預(yù)期流行率,95%的置信區(qū)間,10%可接受誤差的條件下計(jì)算樣本數(shù)量進(jìn)行抽樣監(jiān)測(cè)(至少檢測(cè)30份),重點(diǎn)監(jiān)測(cè)從外地調(diào)入的羊以及發(fā)生流產(chǎn)、睪丸炎等具有疑似布病臨床癥狀的羊。
具體樣品采集量不能太少,要預(yù)留出后續(xù)復(fù)核的量。所采集的樣品一定要保存完好,盡快送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)容易影響檢測(cè)效率和結(jié)果。常用的檢測(cè)方法有試管凝集試驗(yàn)(SAT)、虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和膠體金等。初篩常用RBT,陽(yáng)性樣品用SAT或ELISA進(jìn)行復(fù)核,陽(yáng)性即為確診。但是RBT只能在第15天檢測(cè)到血清陽(yáng)性的山羊[3],無(wú)法用于早期感染的檢測(cè),且敏感性較低,假陰性比例較高[15]。早期檢測(cè)可以用分子生物學(xué)方法,如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP),但需要養(yǎng)殖人員具備相應(yīng)的判斷能力。膠體金的特異性略低,但操作便捷,可以在調(diào)運(yùn)過(guò)程中用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),類似的快速檢測(cè)還有側(cè)流免疫層析法(LFA)[16]。其他檢測(cè)技術(shù)如多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)分析(MLVA),此方法鑒別親緣關(guān)系密切菌株的能力強(qiáng),可用于感染的追蹤[17],其結(jié)果和通過(guò)全基因組測(cè)序的分型基本一致[18],而且它的低成本和快速檢驗(yàn),可以考慮作為常規(guī)一線檢測(cè)方法[19]。
若某羊場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)陽(yáng)性,則全群和周圍3 km以內(nèi)的牛羊場(chǎng)應(yīng)進(jìn)行逐頭檢測(cè)。若陽(yáng)性率≥40%,則全群撲殺(電擊);若陽(yáng)性率≥10%,應(yīng)將病羊和密切接觸的羊撲殺;若陽(yáng)性率<10%,則將病羊撲殺并進(jìn)行嚴(yán)格的檢驗(yàn)檢疫和密切的跟蹤監(jiān)測(cè),直至凈化到無(wú)陽(yáng)性羊。此后每月檢測(cè)1次,連續(xù)3次為陰性則判定為假定陰性場(chǎng),進(jìn)入常規(guī)監(jiān)測(cè)。若羊或羊奶要進(jìn)行銷售,則應(yīng)反復(fù)進(jìn)行檢測(cè),如每月1次、連續(xù)6個(gè)月為陰性方可銷售。常規(guī)檢測(cè)一般每半年抽樣檢測(cè)1次,一類地區(qū)可增加檢測(cè)次數(shù)。其中一次的檢測(cè)時(shí)間可以選在羔羊斷奶后的4~5月,連同羔羊一起檢測(cè)。若連續(xù)兩年血清學(xué)檢測(cè)呈陰性且無(wú)新發(fā)人畜間布病,則該場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。但需建立一個(gè)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)程序,以避免布病的再次暴發(fā)和流行。
引種和調(diào)運(yùn)是羊布病的防控關(guān)鍵點(diǎn),有研究分析,引種時(shí)不申報(bào)檢疫傳播布病的風(fēng)險(xiǎn)是檢疫后引入的1.86倍[15]。而且引種時(shí)不可以從布病一類地區(qū)引入羊群,調(diào)入的羊應(yīng)采取全群檢測(cè),結(jié)果為陰性方可調(diào)入,調(diào)入后隔離飼養(yǎng)45 d再次進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果為陰性方可混群。對(duì)于布病新發(fā)地區(qū),則更應(yīng)該嚴(yán)格控制感染動(dòng)物的跨省流動(dòng),布病檢測(cè)呈陽(yáng)性或疑似陽(yáng)性的羊,應(yīng)在遷移前至少30 d血清學(xué)檢測(cè)陰性時(shí)才允許遷移。
20世紀(jì)50年代到60年代中期,我國(guó)衛(wèi)生部與農(nóng)業(yè)部聯(lián)合成立了布病專業(yè)防治機(jī)構(gòu)和布病研究室,開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查和防治試點(diǎn),實(shí)行健康家畜接種A19疫苗的綜合性預(yù)防措施,還舉辦了全國(guó)布病培訓(xùn)班。1965年-1976年,確立了以菌苗預(yù)防為主的防治措施。在內(nèi)蒙進(jìn)行的兩個(gè)防治試點(diǎn)均取得了明顯成效,其中一個(gè)不經(jīng)檢疫全群免疫的方法更簡(jiǎn)單省力,得到了推廣。1977年到20世紀(jì)末,S2疫苗飲水免疫和M5疫苗噴霧免疫被廣泛應(yīng)用,制定了全國(guó)布病防治規(guī)劃,并提出了畜間免疫為主,采取檢疫、淘汰病畜的防治措施,控制效果顯著,在1990年達(dá)到控制標(biāo)準(zhǔn)的疫區(qū)縣占72.6%。這20年間,我國(guó)畜間布病疫情雖有起伏,但整體水平較低,處于穩(wěn)定控制期。但進(jìn)入21世紀(jì)后,由于動(dòng)物飼養(yǎng)量增加,市場(chǎng)流通頻繁,布病疫情迅速上升。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部先后制定《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)》和《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃(2016-2020年)》,期間建立了多個(gè)國(guó)家布病綜合防控試點(diǎn),但是到目前為止完全達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)的地區(qū)不多,其中成效顯著的是山東省煙臺(tái)市蓬萊區(qū),該地區(qū)2020年10月27日通過(guò)了專家組現(xiàn)場(chǎng)考核驗(yàn)收,成為山東省首家牛羊布病凈化縣。
目前,國(guó)際上已有挪威、芬蘭、瑞典、加拿大等17個(gè)國(guó)家和地區(qū)宣布消滅布病。國(guó)外控制家畜布病的策略和我國(guó)大同小異,也是采取全群免疫和長(zhǎng)期監(jiān)測(cè),即先控制,再根除,但也存在不同之處。首先,疫苗選擇不同,國(guó)外常用Rev.1疫苗進(jìn)行結(jié)膜免疫。在免疫程序方面,國(guó)外堅(jiān)持免疫至少維持一代,并且發(fā)病率非常低(群流行率在2%以下)時(shí),才轉(zhuǎn)向根除計(jì)劃。在停止大規(guī)模疫苗接種后,對(duì)血清陽(yáng)性動(dòng)物使用半抗原凝膠沉淀法來(lái)區(qū)分自然感染和疫苗抗體,從而撲殺自然感染的動(dòng)物?;蛘咄V菇臃N疫苗后兩年內(nèi)不對(duì)家畜進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè),100%控制家畜移動(dòng),當(dāng)兩年后預(yù)計(jì)感染羊群會(huì)因?yàn)樽匀桓娑?,此時(shí)再進(jìn)行血清學(xué)測(cè)試。無(wú)論是哪種方法,均需要維持至少8年~10年后,才有可能達(dá)到凈化。
成功凈化布病的國(guó)家,其控制策略的共同點(diǎn)如下:資金投入大、分類管理精確、監(jiān)測(cè)頻繁且維持時(shí)間長(zhǎng)等。相比國(guó)外,我國(guó)羊養(yǎng)殖密度大、養(yǎng)殖方式復(fù)雜多樣、專業(yè)人員稀缺等特點(diǎn)難以改變,但是我們可以借鑒國(guó)外成功控制的經(jīng)驗(yàn),延長(zhǎng)強(qiáng)制免疫時(shí)間、提高凈化標(biāo)準(zhǔn)、細(xì)化等級(jí)管理[20]、監(jiān)測(cè)技術(shù)電子化等,與我國(guó)養(yǎng)殖場(chǎng)特色進(jìn)行結(jié)合,建立具有地方特色的控制和凈化方案。例如,當(dāng)羊布病個(gè)體陽(yáng)性率達(dá)0.5%或群體陽(yáng)性率達(dá)2%且維持兩年時(shí)才開(kāi)始凈化措施,處于控制階段的地區(qū)重點(diǎn)放在免疫程序和抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)方面,處于凈化階段的地區(qū)要嚴(yán)格控制羊群流動(dòng),重點(diǎn)放在在生物安全和診斷監(jiān)測(cè)方面。
20世紀(jì)80年代末期,我國(guó)經(jīng)濟(jì)體制改革,撤銷了原本專門(mén)負(fù)責(zé)布病防控的領(lǐng)導(dǎo)小組,導(dǎo)致90年代布病有反彈趨勢(shì)[21]。隨著科技的發(fā)展,在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)關(guān)系和飼養(yǎng)方式發(fā)生改變,越來(lái)越多新興企業(yè)的出現(xiàn)的情況下,政府、半政府組織、私營(yíng)企業(yè)和農(nóng)民的合作方式也需要得到重視[22]。近幾年,南方作為布病新發(fā)地區(qū),人和動(dòng)物疫情均處于不斷上升趨勢(shì)[7,23-24]。此外,還有許多偷運(yùn)偷賣陽(yáng)性畜、環(huán)境衛(wèi)生不達(dá)標(biāo)、不進(jìn)行無(wú)害化處理等管理問(wèn)題的存在。
因此,羊布病的凈化不能單純依賴獸醫(yī)人員,相應(yīng)的法律法規(guī)、財(cái)政資金、人民安全、畜主利益、獸醫(yī)人才培養(yǎng)等方方面面都要考慮到,這需要一個(gè)專項(xiàng)組來(lái)領(lǐng)導(dǎo)防控布病,橫向聯(lián)合交通、財(cái)政、市場(chǎng)監(jiān)督、公共衛(wèi)生和公安等部門(mén),縱向建立由國(guó)家、省、市、縣、區(qū)、鄉(xiāng)鎮(zhèn)、村等多級(jí)防控鏈,明確工作內(nèi)容,形成問(wèn)責(zé)制度。另外,除了財(cái)政方面,政府還應(yīng)該加大科普力度,深入人民群眾,調(diào)動(dòng)其積極性[25],使其認(rèn)識(shí)到其中的利害關(guān)系,從根本上解決偷運(yùn)偷賣不撲殺等問(wèn)題[26]。
獸醫(yī)一線方面存在早期預(yù)警系統(tǒng)不完善,各場(chǎng)區(qū)防控工作缺乏特異性,人員短缺和操作技術(shù)不規(guī)范、生物安全不重視等問(wèn)題。在特異性方面,布病防控從流行病學(xué)調(diào)查、免疫接種、診斷監(jiān)測(cè)等各方面制定和實(shí)施都要根據(jù)流行病學(xué)單位內(nèi)的實(shí)際情況如流行率、羊的品種、用途、體質(zhì)、配種時(shí)間等而制定,不能直接應(yīng)用省、市級(jí)監(jiān)測(cè)方案,同時(shí)也包括診斷,檢測(cè)等操作。如在免疫程序方面,甘肅酒泉瓜州縣將羊布病疫苗與羊口蹄疫雙價(jià)苗同時(shí)使用,不僅對(duì)口蹄疫免疫抗體影響不大,還縮短了防疫時(shí)限,加快了秋防免疫進(jìn)程[27]?;蛟诒O(jiān)測(cè)診斷時(shí),可以考慮不進(jìn)行復(fù)診,因?yàn)閺?fù)診也需要時(shí)間,還要投入更多的人力去尋找需要復(fù)診的動(dòng)物,且復(fù)診的準(zhǔn)確率也不是100%,因此可以綜合考慮是否需要進(jìn)行復(fù)診。
除此之外,科研人員也要多結(jié)合其他動(dòng)物布病研究進(jìn)展和生產(chǎn)一線的需求進(jìn)行研究,16MΔvjbR疫苗和納米顆粒疫苗等新型疫苗的同時(shí),既要考慮毒性和保護(hù)效力,也要考慮成本。還有近期的通過(guò)構(gòu)建針對(duì)兩種抗原表位的二價(jià)重組亞單位疫苗的免疫效果顯著優(yōu)于單價(jià)疫苗[28]相關(guān)的研究、巨噬細(xì)胞影響羊布魯氏菌在細(xì)胞內(nèi)的生長(zhǎng)[29]等機(jī)制的研究,可以借此研究新的布病防控方法。
有研究表明,規(guī)模養(yǎng)殖模式布病感染率比散養(yǎng)模式更為嚴(yán)重,農(nóng)區(qū)比牧區(qū)更嚴(yán)重[30]。還有用數(shù)學(xué)模型監(jiān)測(cè)巴西牛布病發(fā)現(xiàn),要根除這種疾病,隔離感染動(dòng)物和減少種群規(guī)模等方法是必不可少的[31]。但是就我國(guó)國(guó)情來(lái)看,規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)是必要的,那么就需要畜主做好生物安全防控措施,保持場(chǎng)區(qū)內(nèi)的衛(wèi)生清潔和通風(fēng)良好,做好隔離措施,將生活區(qū)、隔離區(qū)和生產(chǎn)區(qū)相分離,堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、封閉式管理等措施。定期組織工人進(jìn)行技術(shù)和理論方面的培訓(xùn),如免疫接種技術(shù)、無(wú)害化處理技術(shù)等,杜絕由于操作不當(dāng)引起感染的傳播。
綜上來(lái)看,羊布病的凈化雖然要由政府帶領(lǐng),獸醫(yī)技術(shù)支撐,但最終成功的關(guān)鍵還是要看養(yǎng)殖場(chǎng)的執(zhí)行能力。我們不能一味地強(qiáng)制執(zhí)行,而是要讓畜主明白,羊患布病后已經(jīng)失去了經(jīng)濟(jì)價(jià)值,如果不撲殺反而會(huì)造成更大的經(jīng)濟(jì)損失。獸醫(yī)專家在制定防控方案時(shí)也要考慮到經(jīng)濟(jì)方面,如考慮復(fù)檢和直接撲殺疑似病例的經(jīng)濟(jì)投入??傊?,布病的凈化是一項(xiàng)長(zhǎng)久的“戰(zhàn)役”,不可一蹴而就,在政府、獸醫(yī)組織和養(yǎng)殖場(chǎng)的密切配合下,我國(guó)的布病定能夠得到有效凈化。