劉建成

（射陽(yáng)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，江蘇鹽城 224300）

農(nóng)藥殘留是影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的關(guān)鍵因素，因此國(guó)家制定了一系列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行規(guī)范控制。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）是目前我國(guó)統(tǒng)一規(guī)定的食品中農(nóng)藥最大殘留限量的現(xiàn)行強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)我國(guó)科學(xué)、規(guī)范、合理使用農(nóng)藥和提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管能力具有重要的意義。本文將對(duì)蔬果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的步驟以及當(dāng)前國(guó)家農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中列出的方法進(jìn)行分析和闡述。

1 蔬果農(nóng)藥殘留檢測(cè)步驟

檢測(cè)步驟大致可分為樣品前處理，目標(biāo)物的提取、凈化、濃縮，定性、定量分析，質(zhì)量控制等。

（1）樣品前處理。樣品前處理實(shí)際是對(duì)蔬果樣品進(jìn)行處理，使之成為待檢測(cè)試樣的過(guò)程，一般標(biāo)準(zhǔn)中會(huì)對(duì)抽取樣品的取樣部位有要求，因此必須按標(biāo)準(zhǔn)要求去除分析時(shí)不需要的部分，如黏附的土壤、果核或者葉子等，然后利用均質(zhì)器、搗碎機(jī)等前處理設(shè)備對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行處理，從而得到具有代表性的試樣供后續(xù)檢測(cè)分析。

（2）目標(biāo)物的提取。目標(biāo)物的提取主要是運(yùn)用振蕩器、超聲波設(shè)備、固相萃取儀等，從試樣中分離殘留農(nóng)藥的過(guò)程，一般是將農(nóng)藥成分提取到有機(jī)溶劑或水中，在此過(guò)程中，很多非目標(biāo)物也會(huì)同時(shí)進(jìn)入提取液中。

（3）凈化。凈化是指采用固相萃取、液液分配、柱層析和凝膠滲透色譜等去除提取液中的色素、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)以及干擾目標(biāo)物測(cè)定的雜質(zhì)，得到只含所需化合物的試液。

（4）濃縮。濃縮是對(duì)凈化后的液體進(jìn)行濃縮，農(nóng)藥殘留大多是微量或者痕量級(jí)別的，只有通過(guò)濃縮才能提高目標(biāo)物的響應(yīng)值。常用濃縮設(shè)備有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、氮?dú)鉂饪s器等。

（5）定性。定性是對(duì)特定目標(biāo)物進(jìn)行識(shí)別，與該物質(zhì)的理化性質(zhì)和檢測(cè)技術(shù)有關(guān)。一般通過(guò)化合物在色譜上的保留時(shí)間、特定光波的吸收強(qiáng)度和質(zhì)量數(shù)等進(jìn)行識(shí)別。

（6）定量。定量是指將待測(cè)樣品上機(jī)分析測(cè)定后，利用外標(biāo)法或者內(nèi)標(biāo)法的標(biāo)曲計(jì)算出目標(biāo)物的含量，從而對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定量。

（7）質(zhì)量控制。①通過(guò)空白分析、空白加標(biāo)、基質(zhì)加標(biāo)和基質(zhì)加標(biāo)平行分析等方式保證儀器的穩(wěn)定性和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。②要對(duì)儀器性能進(jìn)行確認(rèn)，通過(guò)儀器的檢定校準(zhǔn)或者利用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)儀器進(jìn)行期間核查確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

2 蔬果農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)和方法

目前蔬果的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)很多，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中9種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-柱后衍生法》（GB 23200.112-2018）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113-2018）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中90種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定氣相色譜法》（GB 23200.116-2019）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.121-2021）、《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量快速檢測(cè)》（GB/T 5009.199-2003）、《蔬菜中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡(jiǎn)易檢驗(yàn)方法 酶抑制法》（GB/T 18630-2002）和《蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法》（NY/T 448-2001）等。綜合以上標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，有高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和酶抑制法。

2.1 高效液相色譜法

液相色譜儀一般由以下5個(gè)部分組成：①泵，主要將液體流動(dòng)相穩(wěn)定、連續(xù)地注入分析系統(tǒng)；②進(jìn)樣器，將液體試樣抽入分析系統(tǒng)；③色譜柱，用于分離樣品中的物質(zhì)；④檢測(cè)器，用來(lái)檢測(cè)經(jīng)過(guò)色譜柱分離后的樣品，常見(jiàn)的液相檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；⑤分析工作站，用于光譜與色譜圖的顯示、數(shù)據(jù)顯示與處理，以及分析過(guò)程的控制。

高效液相色譜儀可以有效檢測(cè)沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定差、分子量較大和極性強(qiáng)的農(nóng)藥。常用于對(duì)蔬菜、水果中9種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的測(cè)定，這9種農(nóng)藥名稱(chēng)分別為涕滅威、甲萘威、克百威、仲丁威、異丙威、滅多威、速滅威、殘殺威和混滅威。不同種類(lèi)的農(nóng)藥，其保留時(shí)間也不相同，因此可以通過(guò)不同的保留時(shí)間對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行定性。蔬果樣品用乙腈提取，提取液經(jīng)固相萃取柱進(jìn)行萃取凈化，上機(jī)外標(biāo)法測(cè)定，需液相色譜儀配有熒光檢測(cè)器和柱后衍生系統(tǒng)。柱后衍生是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，需配制相應(yīng)的衍生試劑，調(diào)節(jié)衍生試劑的流速，控制衍生溫度和水解溫度，從而保證衍生反應(yīng)的正常運(yùn)行，進(jìn)而準(zhǔn)確分析待測(cè)樣品中的目標(biāo)物含量。被測(cè)樣品中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)與混合標(biāo)液中相應(yīng)目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間接近。將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液先后注入進(jìn)樣瓶，進(jìn)行上機(jī)分析。用保留時(shí)間定性，測(cè)得目標(biāo)物色譜峰面積，從而用公式計(jì)算出各目標(biāo)物組分的含量。待測(cè)液中的農(nóng)藥響應(yīng)值應(yīng)該在儀器的定量測(cè)定曲線范圍內(nèi)，如果超過(guò)曲線范圍，需要對(duì)測(cè)定液的濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋?zhuān)龠M(jìn)行上機(jī)檢測(cè)分析。另外，液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器，可以檢測(cè)吡蟲(chóng)啉、滅蠅胺和阿維菌素等農(nóng)藥。

2.2 氣相色譜法

氣相色譜儀大體由以下6個(gè)部分組成。①氣路部分，是一個(gè)使載氣連續(xù)運(yùn)行的密閉系統(tǒng)，讓機(jī)器獲得純凈、穩(wěn)定流速的載氣。氣相色譜中常用載氣有氮?dú)狻鍤夂蜌錃?，有純度要求；②進(jìn)樣系統(tǒng)，包含進(jìn)樣器、氣化室和加熱系統(tǒng)，它使樣品在進(jìn)入色譜柱之前瞬間氣化，而后快速定量地轉(zhuǎn)入色譜柱；③色譜柱系統(tǒng)，其作用是把樣品中的各組分分離開(kāi)來(lái)；④檢測(cè)系統(tǒng)，將經(jīng)過(guò)色譜柱分離出的各組分的濃度或者含量轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)過(guò)放大，形成色譜圖；⑤溫控系統(tǒng)，有恒溫和程序升溫兩種控溫方式，對(duì)于多組分的復(fù)雜樣品，不同組分的沸點(diǎn)不同，通過(guò)程序升溫可以使各組分在其最佳的柱溫條件下流出，有效分離各組分，縮短分析時(shí)間；⑥數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，對(duì)由檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)化而來(lái)氣相色譜圖進(jìn)行積分，定量數(shù)據(jù)處理。

農(nóng)殘檢測(cè)的氣相色譜是用氮?dú)?、氫氣等氣體作為流動(dòng)相，將經(jīng)過(guò)提取、凈化、濃縮后的農(nóng)藥樣品注入氣相色譜柱，經(jīng)過(guò)升溫程序，利用混合物中不同組分的沸點(diǎn)差異、極性和吸附能力的差異來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的分離，檢測(cè)器將樣品的不同組分轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，顯示氣相色譜圖，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間和峰面積大小或者峰高度，對(duì)照農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)定性和定量分析試樣中的各種農(nóng)藥組分。氣相色譜儀具有樣品用量少、分析速度快、響應(yīng)值高等特點(diǎn)，常用于檢測(cè)蔬果中有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥。常見(jiàn)的有機(jī)磷農(nóng)藥有敵敵畏、氧樂(lè)果、毒死蜱、甲基毒死蜱、甲胺磷、乙酰甲胺磷、辛硫磷和馬拉硫磷等，此類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)通常使用火焰光度檢測(cè)器；常見(jiàn)的有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥有六六六、滴滴涕、百菌清、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯等，此類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)通常使用電子捕獲檢測(cè)器。

2.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥都是有機(jī)化合物，化合物經(jīng)液相系統(tǒng)分離后，進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)，經(jīng)離子源將被分析物由液態(tài)轉(zhuǎn)化為帶電離子，通過(guò)質(zhì)量分析器識(shí)別特定的離子質(zhì)荷，檢測(cè)器將離子信號(hào)轉(zhuǎn)化為電流信號(hào)，數(shù)據(jù)處理模塊將電流信號(hào)轉(zhuǎn)換成圖譜。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀可用來(lái)分析那些分子量較大、不易揮發(fā)、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥組分。通常情況下，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的檢測(cè)靈敏度更高、定性更加準(zhǔn)確、抗干擾能力更強(qiáng)。

2.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用既可以發(fā)揮氣相色譜分離效果好、單次進(jìn)樣分離100多種農(nóng)藥的特點(diǎn)，又可以發(fā)揮質(zhì)譜定性精準(zhǔn)、靈敏度高、高效分析復(fù)雜基質(zhì)中農(nóng)藥殘留的特點(diǎn)。該技術(shù)常用離子源有電子轟擊離子源、化學(xué)電離源、快原子轟擊離子源、大氣壓化學(xué)電離源等。母艷萍等[1]使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)番茄中氟樂(lè)靈、乙草胺、異丙甲草胺、二甲戊靈等10種除草劑、殺菌劑、殺蟲(chóng)劑農(nóng)殘進(jìn)行檢測(cè)分析，均有較好的檢出限和回收率。

2.5 酶抑制法

酶抑制法是目前對(duì)蔬果農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速檢測(cè)的主要方法，主要檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥[2-3]。該方法適合對(duì)蔬果農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)，快速篩選出陽(yáng)性樣品，供后續(xù)使用色譜類(lèi)儀器進(jìn)行精確檢測(cè)農(nóng)殘含量。農(nóng)產(chǎn)品快檢可以有效保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、提升農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管能力和提高執(zhí)法效率。酶抑制法可分為速測(cè)卡法（紙片法）和酶抑制率法（分光光度法）[4-5]。

2.5.1 速測(cè)卡法

速測(cè)卡法的原理是膽堿酯酶能催化紅色的靛酚乙酸酯水解為乙酸和藍(lán)色的靛酚，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制膽堿酯酶的活性，從而改變催化、水解和變色等過(guò)程，通過(guò)這些反應(yīng)判斷出樣品中是否含有高含量的有機(jī)磷或者氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥。速測(cè)卡法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快和無(wú)需專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)等特點(diǎn)，是農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市和學(xué)校等場(chǎng)所進(jìn)行大批量蔬果樣品農(nóng)殘快速檢測(cè)的首選方法。

2.5.2 酶抑制率法

酶抑制率法的原理是在特定情況下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥會(huì)抑制乙酰膽堿酯酶的性能，抑制率與農(nóng)藥的濃度呈線性關(guān)系。乙酰膽堿酯酶催化乙酰膽堿水解，水解產(chǎn)物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)后產(chǎn)生黃色物質(zhì)，通過(guò)使用分光光度計(jì)在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值隨時(shí)間變化的量計(jì)算抑制率，從而判斷出樣品中有機(jī)磷或者氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的含量。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著生活水平的提高，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全。農(nóng)藥殘留是衡量農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量的重要因素，因此準(zhǔn)確檢測(cè)出農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥的含量尤為重要。只有充分掌握相關(guān)檢測(cè)分析技術(shù)，才能精確地分析樣品，從而得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于從事農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的技術(shù)人員而言，需要重視從抽樣到檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)，認(rèn)真錘煉技術(shù)，樹(shù)立嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)，保證檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)，從而為人們的生命健康和社會(huì)的健康發(fā)展提供保障。