張曉曉，黃午陽，於 虹，曾其龍，柴 智

（1 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所 南京 210014 2 江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院 江蘇鎮(zhèn)江 212013 3 江蘇省中國科學(xué)院植物研究所 南京 210014）

藍(lán)莓（Vaccinium spp.）是杜鵑花科越橘屬一種高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的特色小漿果，被聯(lián)合國糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。藍(lán)莓果實(shí)中除了含有豐富的維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分外，還含有多酚、黃酮、花青素等生物活性物質(zhì)，有“漿果之王”的美譽(yù)[1-2]。據(jù)報(bào)道，藍(lán)莓具有改善記憶力和認(rèn)知能力，防止氧化應(yīng)激損傷，抑制炎癥及改善心血管健康等功能[3]。藍(lán)莓的保健功能主要源于其花青素類活性物質(zhì)。美國人類營養(yǎng)學(xué)機(jī)構(gòu)USDA 研究人員發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓花青素含量在各類果蔬中排名第一，開發(fā)潛力巨大[4]。藍(lán)莓花青素包括矢車菊素（Cy）、飛燕草素（Dp）、芍藥素（Pn）、牽?；ㄋ兀≒t）和錦葵色素（Mv），自然狀態(tài)下，花青素主要以半乳糖苷、葡萄糖苷、阿拉伯糖苷等花色苷形式存在[5]。

隨著人們對(duì)藍(lán)莓保健功能的認(rèn)可，藍(lán)莓的市場(chǎng)需求逐步擴(kuò)大，種植效益也逐漸顯現(xiàn)出來，截止2020年底，全國藍(lán)莓栽培面積已達(dá)到6.64 萬hm2，其中種植面積較大的省份有貴州（15 000 hm2）、遼寧（7 800 hm2）、山東（7 333 hm2）、四川（6 667 hm2）、云南（5 000 hm2）等[6]。經(jīng)過多年優(yōu)化，北方地區(qū)藍(lán)莓品種已基本穩(wěn)定，南方地區(qū)呈現(xiàn)多品種化。結(jié)合藍(lán)莓品種的自然特點(diǎn)及我國各地的氣候特征，經(jīng)引種試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)長江流域產(chǎn)區(qū)和云貴高原產(chǎn)區(qū)適宜發(fā)展兔眼藍(lán)莓[7]，其中品名為“燦爛”的兔眼藍(lán)莓采摘期長，有較高的商業(yè)價(jià)值[8]。研究表明不同產(chǎn)地及氣候條件對(duì)藍(lán)莓花色苷的含量具有一定的影響，花青素濃度隨緯度和地理位置改變而顯著變化[9]。與海拔梯度相關(guān)的環(huán)境因素也能對(duì)藍(lán)莓花青素的積累產(chǎn)生微調(diào)作用[10]。目前，國內(nèi)外有關(guān)藍(lán)莓品質(zhì)的研究多集中在不同藍(lán)莓品種之間，而有關(guān)不同產(chǎn)地同一品種藍(lán)莓品質(zhì)的特性差異鮮有報(bào)道。本文以兔眼藍(lán)莓“燦爛”為研究對(duì)象，選擇長江流域產(chǎn)區(qū)和云貴高原產(chǎn)區(qū)不同海拔高度、緯度和種植規(guī)模的10 個(gè)產(chǎn)地，測(cè)定藍(lán)莓果中花色苷的組成與含量，分析各種植地區(qū)的地理環(huán)境條件對(duì)同一品種藍(lán)莓果實(shí)中花色苷分布的影響，以更加深入了解不同產(chǎn)地藍(lán)莓品質(zhì)的差異，對(duì)藍(lán)莓的引種栽培和生產(chǎn)加工提供參考。

1 材料與方法

1.1 原料及試劑

品名為“燦爛”的兔眼藍(lán)莓樣品，采摘自湖北省黃岡市黃梅縣獨(dú)山鎮(zhèn)、浙江省紹興市諸暨市草塔鎮(zhèn)、江蘇省南京市溧水區(qū)白馬鎮(zhèn)、貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣宣威鎮(zhèn)、貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣賢昌鄉(xiāng)營山村、云南省麗江市玉龍納西族自治縣石鼓鎮(zhèn)、云南省大理白族自治州大理市銀橋鎮(zhèn)、云南省玉溪市澄江縣右所鎮(zhèn)、云南省玉溪市澄江縣?？阪?zhèn)、云南省紅河哈尼族彝族自治州石屏縣已沖村，以下簡稱湖北獨(dú)山、浙江草塔、江蘇白馬、貴州宣威、貴州賢昌、云南石鼓、云南銀橋、云南右所、云南?？?、云南龍朋。于2017年7月采樣，每個(gè)園區(qū)隨機(jī)選擇5 株藍(lán)莓為一個(gè)樣本，每株隨機(jī)采樣120 g 左右。每個(gè)產(chǎn)地采摘9 個(gè)樣本，共計(jì)90 個(gè)樣本。

采樣的10 個(gè)地區(qū)均屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，具體地區(qū)名稱、經(jīng)緯度、海拔高度、年平均氣溫及氣壓條件如表1所示。

表1 10 個(gè)地區(qū)主要地理環(huán)境Table 1 Key geographical environment conditions in ten regions

標(biāo)準(zhǔn)品錦葵色素-3-O-半乳糖苷、錦葵色素-3-O-葡萄糖苷，美國Sigma-Aldrich 公司；飛燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矮牽牛素-3-O-半乳糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷，北京索萊寶科技有限公司；飛燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、矮牽牛素-3-O-阿拉伯糖苷，上海吉至生化有限公司；飛燕草素-3-O-半乳糖苷、芍藥素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，法國中草藥（Extrasynthese）公司；錦葵色素-3-O-阿拉伯糖苷，上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司。乙腈（色譜純），TEDIA 天地試劑（美國）有限公司；磷酸（色譜純），阿拉丁試劑（上海）有限公司。其它試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀Agilent-1200（配置G1311A二元泵和G1315D 二極管陣列檢測(cè)器）、液-質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent-1100 HPLC 【配備有UV 檢測(cè)器、LCQ 離子阱質(zhì)譜儀（MS）和電噴霧電離接口（ESI）】、XDB-C18 色譜柱、Zorbax SB-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），美國安捷倫科技有限公司；數(shù)控超聲波處理設(shè)備KH7200DB，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000A，濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司；勻漿機(jī)JYL-C91T，杭州九陽股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 藍(lán)莓果實(shí)花青素的提取 稱取2.0 g 藍(lán)莓，研磨勻漿后加入85%甲醇和0.5%甲酸的混合提取溶劑，經(jīng)超聲、離心后取上清液，得到藍(lán)莓花青素提取液。提取步驟重復(fù)3 次，提取溶劑體積加入量分別為20，20，10 mL。超聲條件：20 ℃，20 min，100 W。離心條件：5 000 r/min，10 min。3 次提取液合并，于-20 ℃冰箱保存，用于后續(xù)檢測(cè)分析[11]。

1.3.2 HPLC 測(cè)定花青素含量 取10 mL 藍(lán)莓花青素提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60 ℃下蒸干，加入1 mL 甲醇甲酸提取溶劑溶解，將復(fù)溶液用0.22 μm聚偏二氟乙烯膜 （Polyvinylidene fluoride，PVDF）過濾后，經(jīng)Agilent-1200 高效液相色譜儀對(duì)各藍(lán)莓花青素提取物及13 種花色苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定[12]，采用XDB-C18 色譜柱進(jìn)行分離。以1.0%的磷酸緩沖液為流動(dòng)相A，100%的乙腈為流動(dòng)相B。流速設(shè)置0.6 mL/min，運(yùn)行柱溫25 ℃，波長520 nm。梯度洗脫：0～5 min，5%B；15～25 min，10%B；25～35 min，12%B；35～50 min，15%B；50～60 min，18%B；60～80 min，25%B；80～90 min，30%B。

1.3.3 HPLC-ESI-MS 鑒定藍(lán)莓果實(shí)花青素 采用Agilent-1100 HPLC 系統(tǒng)，分析柱為Zorbax SB-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相A 為溶于超純水中的6%甲酸，流動(dòng)相B 為溶于乙腈的6%甲酸。洗脫梯度同1.3.2 節(jié)。在陽離子模式下，ESI 毛細(xì)管電壓為3.0 kV，毛細(xì)管溫度為350 ℃。使用1.5 L/min 的霧化氣體和10 L/min 的干燥氣體進(jìn)行氮離子化。ESI 的掃描范圍在m/z 100～1 200[13]。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)應(yīng)用Excel 2016 處理，所有數(shù)據(jù)均平行測(cè)定3 次，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。Pearson法對(duì)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行分析，雙尾法檢驗(yàn)顯著性。采用GraphPad Prism 5.0 軟件作圖，使用JMP10 進(jìn)行聚類分析。P ＜0.05 即為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 種植地區(qū)對(duì)藍(lán)莓果實(shí)中花色苷含量的影響

通過HPLC 和LC-ESI-MS 分析，根據(jù)保留時(shí)間和MS 光譜數(shù)據(jù)，結(jié)合標(biāo)品測(cè)定和文獻(xiàn)[14]和[15]對(duì)照，鑒定了10 個(gè)種植地區(qū)的藍(lán)莓果實(shí)中的花色苷，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)中花色苷的分布存在差異（表2）。藍(lán)莓果實(shí)中含有5 種花青素苷元，共檢測(cè)到13 種不同的花色苷，其中錦葵色素、矢車菊素、飛燕草素、矮牽牛素均以半乳糖苷、葡萄糖苷和阿拉伯糖苷形式存在，而芍藥素僅檢測(cè)到半乳糖苷。

錦葵色素-3-O-半乳糖苷和矢車菊素-3-O-半乳糖苷為各地區(qū)的藍(lán)莓果中含量最高的花色苷，大部分地區(qū)的這2 種花色苷含量在100 μg/g以上，其中云南龍朋的矢車菊素-3-O-半乳糖苷含量最高，達(dá)到（343.22±59.61）μg/g。云南右所及石鼓、貴州宣威、湖北獨(dú)山、浙江草塔的藍(lán)莓果中均以錦葵色素-3-O-半乳糖苷含量最多，分別為（236.93±37.79），（223.93±82.46），（213.01±49.95），（174.27±57.16）μg/g 及（58.19±14.96）μg/g。云南龍朋、銀橋、?？诤唾F州賢昌、江蘇白馬所產(chǎn)的藍(lán)莓果中以矢車菊素-3-O-半乳糖苷為所有花色苷中含量之最，分別為 （343.22±59.61），（214.75±29.28），（195.74±30.61），（109.25±16.66）μg/g 及（92.31±22.29）μg/g。錦葵色素-3-O-阿拉伯糖苷也是藍(lán)莓果中的優(yōu)勢(shì)花色苷，貴州宣威和云南石鼓中含量也超過100 μg/g。飛燕草素-3-O-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷含量低，有的地區(qū)藍(lán)莓果中未檢測(cè)出，可能因本身缺失或含量低，儀器靈敏度不夠造成的。除貴州賢昌外其它地區(qū)藍(lán)莓果中均檢測(cè)到矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷，而含量均不超過2 μg/g。飛燕草素-3-O-葡萄糖苷僅在貴州宣威、云南石鼓、云南銀橋和云南龍朋所產(chǎn)藍(lán)莓果中檢測(cè)到，含量在（0.61±0.65）～（1.51±0.67）μg/g 之間。矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的含量稍高于飛燕草素-3-O-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷，范圍在（1.09±1.09）～（8.14±1.61）μg/g 之間，也明顯低于其它10 個(gè)糖苷的含量。云南龍朋花色苷總含量最高，為（1 342.57±271.56）μg/g，各花色苷含量差異也最大，最高的錦葵色素-3-O-半乳糖苷含量是最低飛燕草素-3-O-葡萄糖苷的227 余倍。浙江草塔的花色苷總含量最小，僅為（260.93±71.17）μg/g，不到云南龍朋的五分之一，除貴州賢昌未檢測(cè)到矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷外，各花色苷含量均以浙江草塔樣品最低。

2.2 種植地區(qū)對(duì)藍(lán)莓果實(shí)中5 類花青素苷元含量的影響

由圖1可知，不同地區(qū)所產(chǎn)藍(lán)莓中，均含有飛燕草素、矢車菊素、矮牽牛素、錦葵色素和芍藥素，然而這5 類花青素苷元的分布情況存在差異。10個(gè)地區(qū)的藍(lán)莓果實(shí)中花青素，除云南龍朋外，其它地區(qū)所產(chǎn)藍(lán)莓均為錦葵色素含量最高，依次為矢車菊素、飛燕草素、矮牽牛素、芍藥素；而云南龍朋所產(chǎn)藍(lán)莓中，矢車菊素的含量最高，其次為錦葵色素。云南龍朋的藍(lán)莓果中，除錦葵色素含量與貴州宣威、云南石鼓、云南銀橋、云南右所相似外，其它花青素含量均顯著高于其它地區(qū)（P＜0.05）。

結(jié)合表2與圖1可知，在長江流域產(chǎn)區(qū)（湖北獨(dú)山、浙江草塔及江蘇白馬）種植的藍(lán)莓果中，以湖北獨(dú)山的各類花青素含量最高，均顯著高于浙江草塔（P＜0.05）；除錦葵色素含量顯著高于江蘇白馬以外，其它花青素的含量均無顯著性差異。浙江草塔的藍(lán)莓果中各花青素含量稍低于江蘇白馬，而差異并不顯著。貴州宣威和賢昌同屬于貴州麻江縣，兩地的藍(lán)莓果中除了矢車菊素含量相似外，宣威的飛燕草素、矮牽牛素、芍藥素含量均高于賢昌（P＜0.05），錦葵色素更遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于賢昌的藍(lán)莓果中的含量（P＜0.01），造成含量差異的原因主要是宣威位于東部地區(qū)氣溫高，賢昌位于西部地區(qū)氣溫低，花色苷含量與溫度呈正相關(guān)[16]。云南各地區(qū)的藍(lán)莓中花青素含量稍高于其它地區(qū)，這是由于云南地區(qū)海拔較高，海拔高度對(duì)土壤的pH值和有效養(yǎng)分存在較大影響[17]，進(jìn)而影響藍(lán)莓的品質(zhì)和花色苷的積累[18]。有研究表明，高海拔地區(qū)生長的釀酒葡萄中多酚類物質(zhì)含量更多[19]；海拔高度的增加也能促使紫薯表皮的花青素含量增多[20]。表1與表2結(jié)合來看，10 個(gè)地區(qū)中湖北獨(dú)山、浙江草塔以及江蘇白馬的緯度居于前3 位，海拔高度居于后3 位，而這3 個(gè)地區(qū)所產(chǎn)藍(lán)莓的總花青素含量較低，這表明高緯度、低海拔的平原地區(qū)對(duì)藍(lán)莓花青素的合成存在一定影響，不利于花青素的積累；云南產(chǎn)區(qū)（石鼓、銀橋、右所、?？凇埮螅┑木暥容^低且海拔高度較高，其所產(chǎn)藍(lán)莓的花青素含量也相對(duì)較高，即低緯度、高海拔的高原地區(qū)有利于藍(lán)莓花青素的產(chǎn)生，在低氣壓環(huán)境下能夠促進(jìn)藍(lán)莓花青素的積累，并且云南龍朋所產(chǎn)藍(lán)莓的總花青素含量最高，該地區(qū)在10 個(gè)地區(qū)中緯度最低，海拔也偏高，其年平均氣溫也可能更適合藍(lán)莓花青素的積累。

圖1 不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)中5 類花青素及總花色苷含量Fig.1 Contents of five anthocyanins and total anthocyanins in blueberry fruits from different regions

2.3 種植地區(qū)對(duì)藍(lán)莓果實(shí)中糖苷含量的影響

在藍(lán)莓果實(shí)中花青素以花色苷的形式存在，主要是半乳糖苷、葡萄糖苷和阿拉伯糖苷。具體分布情況如圖2。其中，每種花色苷中均為半乳糖苷占比最高，均超過總花色苷含量的66%；其次為阿拉伯糖苷，約占總花色苷含量的26%～32%；葡萄糖苷類花色苷的含量較低，僅占總花色苷含量的1%～8%，可見在藍(lán)莓花色苷中，以半乳糖苷類化合物為主。芍藥素由于缺少或未檢測(cè)到葡萄糖苷和阿拉伯糖苷類化合物而導(dǎo)致其含量最低。

圖2 不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)5 類花青素中糖苷分布Fig.2 Glycosides in five anthocyanins in blueberry fruits from different regions

如圖3所示，不同種植地區(qū)的藍(lán)莓果實(shí)中各花色苷占比相似。各地藍(lán)莓果實(shí)中含量最高的花色苷占比均在22%以上，矢車菊素-3-O-半乳糖苷及錦葵色素-3-O-半乳糖苷是含量較高的2 種花色苷，范圍分別為15.3%～26.6%和18.8%～28.5%。各地藍(lán)莓果實(shí)中以葡萄糖苷和阿拉伯糖苷形式存在的花色苷占比在4%～13.4%之間，飛燕草素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矮牽牛素-3-O-半乳糖苷、錦葵色素-3-O-阿拉伯糖苷占比為10%左右，飛燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、矮牽牛素-3-O-阿拉伯糖苷、芍藥素-3-O-半乳糖苷占比在5%左右。以葡萄糖苷形式存在的花色苷占比最低，其中錦葵色素-3-O-葡萄糖苷占比在2.2%～3.1%之間，飛燕草素-3-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷占比均在1%以下。

圖3 不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)中各花色苷占比Fig.3 The proportion of anthocyanins in blueberry fruits from different regions

2.4 種植地區(qū)環(huán)境條件對(duì)藍(lán)莓果實(shí)中花色苷分布的影響

花色苷的合成是遺傳基因和外界環(huán)境共同作用的結(jié)果?；ㄉ丈锖铣上嚓P(guān)基因決定了花色苷的種類，而環(huán)境因子既可以影響花色苷生物合成的速率，還可以對(duì)其積累量和穩(wěn)定性產(chǎn)生影響[9]。本研究對(duì)花色苷分布與種植地區(qū)的不同地理環(huán)境進(jìn)行相關(guān)性分析（表3），探究環(huán)境因子對(duì)花色苷分布的影響。結(jié)果表明花色苷含量與種植地區(qū)的海拔高度、年日照時(shí)數(shù)呈正相關(guān)，與經(jīng)緯度、氣壓、7月平均氣溫呈負(fù)相關(guān)，與年均氣溫、年降水量無顯著相關(guān)性。

結(jié)合表1和表2，在海拔37～2 010 m 高度范圍內(nèi)，海拔越高，藍(lán)莓果的花色苷含量越高。這可能是植物在有更強(qiáng)的太陽輻射和紫外線的高海拔地區(qū)的一種自我保護(hù)機(jī)制[20]，這種強(qiáng)輻射和紫外線會(huì)增加如活性氧（ROS）等自由基，激活類黃酮的生物合成，特別是花青素[21]，以保護(hù)植物器官。何濤等[22]研究表明，因?yàn)楦吆０蔚貐^(qū)有著較強(qiáng)的光照和輻射，溫度較低，有利于花色苷合成。海拔高度的影響與花色苷苷元的種類相關(guān)，Zoratti 等[23]研究表明，飛燕草素和錦葵色素類花色苷隨海拔高度的增加而增加，而矢車菊素和芍藥素類花色苷沒有明顯變化。結(jié)合表1和表2可看出，云南各種植地區(qū)海拔較高，花色苷含量較其它地區(qū)高。莊維兵等[24]認(rèn)為糖類物質(zhì)能影響花色苷的合成，花色苷的積累受糖的誘導(dǎo)，激活或抑制一些基因的表達(dá)。Zeng 等[25]研究表明高海拔地區(qū)的“燦爛”藍(lán)莓果中甜度更高，為花色苷的合成積累了大量的底物，更利于花色苷的積累。隨著海拔的升高，氣壓逐漸降低，由表3可看出氣壓與花色苷含量成負(fù)相關(guān)，即低氣壓地區(qū)更利于花色苷的積累。

緯度的變化會(huì)導(dǎo)致氣候條件的相應(yīng)變化，例如光強(qiáng)和溫度。這些因素影響著植物的代謝和代謝物的濃度。由表1和表2可知，長江流域地區(qū)的江蘇白馬、浙江草塔等地緯度高于云貴高原地區(qū)，藍(lán)莓果中花色苷含量顯著低于云貴高原地區(qū)。Andreas 等[9]研究了不同緯度和地理來源的歐洲越橘果實(shí)中花色苷含量，結(jié)果表明花青素濃度隨緯度和地理位置的改變發(fā)生顯著變化，北緯地區(qū)的花青素含量較高，而母本產(chǎn)地偏北的花青素含量較高。Zheng 等[16]研究表明生長在高緯度的黑加侖果實(shí)中的花色苷含量高于生長在低緯度的，這與本研究結(jié)果相反。這可能是由于漿果品種及生長環(huán)境不同所致，緯度對(duì)漿果果實(shí)組成的影響既可以解釋為環(huán)境因素對(duì)植物代謝的短期影響，也可以解釋為植物長期適應(yīng)環(huán)境所導(dǎo)致的基因進(jìn)化。為進(jìn)一步了解緯度對(duì)藍(lán)莓果實(shí)花色苷含量的影響，有必要進(jìn)一步研究天氣條件與藍(lán)莓果花色苷分布的關(guān)系。

光照和溫度是影響花色苷合成的重要的環(huán)境因素，Albert 等[26]發(fā)現(xiàn)大多數(shù)植物花色苷的積累與光照強(qiáng)度成正相關(guān)，光照越強(qiáng)，越容易誘導(dǎo)花色苷合成的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，矮牽?；ㄉ刂挥性诟吖庹諚l件下生長才會(huì)有強(qiáng)烈的著色，說明存在一種光誘導(dǎo)調(diào)控因子，負(fù)責(zé)激活花青素途徑。Zoratti 等[23]對(duì)野越桔和高叢藍(lán)莓的花青素組成進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)溫度和光照通過影響類黃酮3'，5' 羥化酶（F3'5'H）基因來影響受測(cè)野越桔花青素含量。高溫和低溫都會(huì)影響植物次生代謝產(chǎn)物酶的活性，低溫更有利于植物類黃酮的生成[26]。表3顯示日照時(shí)數(shù)長且溫度低的地區(qū)花色苷含量較高，可能是各環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。采收月7月的平均氣溫與花色苷含量成負(fù)相關(guān)，而年平均溫度與花色苷含量沒有顯著相關(guān)性，這一結(jié)果表明果實(shí)成熟階段的環(huán)境溫度對(duì)花色苷的積累影響較大。目前未發(fā)現(xiàn)探究經(jīng)度對(duì)花色苷含量的影響，結(jié)合表1和表2，推測(cè)西部地區(qū)的環(huán)境更適于花色苷的積累，其相關(guān)性有待進(jìn)一步探究。

表3 總花色苷含量與藍(lán)莓種植地區(qū)地理環(huán)境的相關(guān)性Table 3 Correlation between total anthocyanins content and geographical environment of blueberry planting regions

云南省5 個(gè)種植地區(qū)處于低緯度、高海拔、低氣壓地區(qū)，這5 個(gè)地區(qū)的藍(lán)莓果總花色苷分布由高到低為：龍朋＞右所＞銀橋＞石鼓＞海口。云南?？阪?zhèn)西瀕撫仙湖，除?？谛∪侵尥饩巧絽^(qū)，境內(nèi)山峰起伏、溝壑縱橫，階梯狀地貌東低北高，形成了冷涼山區(qū)和溫?zé)岷庸鹊牧Ⅲw氣候，全鎮(zhèn)氣候及自然條件差異較大，當(dāng)?shù)氐乩憝h(huán)境的特殊性導(dǎo)致了該地藍(lán)莓果中花色苷含量與云南其它地區(qū)的差異?？傊?，云南省內(nèi)村鎮(zhèn)的緯度較低且海拔高度較高，日照時(shí)數(shù)長，溫度相對(duì)低，其所產(chǎn)藍(lán)莓的花色苷含量也相對(duì)較高，表明低緯度、高海拔的高原地區(qū)有利于花色苷的產(chǎn)生，在低溫、低氣壓環(huán)境下能夠促進(jìn)藍(lán)莓酚類化合物的積累。

2.5 不同種植地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)中各花色苷含量及環(huán)境因子聚類分析

以不同種植地區(qū)的藍(lán)莓果實(shí)中13 種花色苷含量及經(jīng)緯度、海拔高度、氣溫、日照等環(huán)境因子進(jìn)行聚類分析，將藍(lán)莓果實(shí)按種植地區(qū)聚合為兩大類。一類是長江流域產(chǎn)區(qū)的湖北獨(dú)山、浙江草塔、江蘇白馬和云貴高原產(chǎn)區(qū)的貴州賢昌，總花色苷含量顯著低于云貴高原產(chǎn)區(qū)的貴州宣威及云南各地區(qū)（P＜0.05）。這與表2及圖1中的結(jié)論一致。湖北獨(dú)山的藍(lán)莓果品質(zhì)優(yōu)于浙江草塔和江蘇白馬。貴州賢昌地區(qū)比同屬于貴州高原的宣威地區(qū)的藍(lán)莓果中花色苷含量低（P＜0.01），可能是由于宣威和賢昌分別位于低海拔、高氣溫的東部地區(qū)和高海拔、低氣溫的西部地區(qū)，在氣壓、緯度等條件相似的情況下，海拔高度影響了花色苷的積累。

另一類是貴州宣威和云南各地區(qū)，屬云貴高原產(chǎn)區(qū)。云南各種植地區(qū)均屬于低緯度、高海拔、低氣壓地區(qū)，這種環(huán)境下更利于花色苷的產(chǎn)生，云南龍朋地區(qū)種植的藍(lán)莓果中除錦葵色素-3-O-阿拉伯糖苷外其它花色苷含量均高于或等于其它地區(qū)，可能其溫度更適于花色苷的積累。貴州宣威處于亞熱帶季風(fēng)濕潤地帶，當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件比賢昌更適于藍(lán)莓果中酚類化合物的積累，環(huán)境的特殊性使其總花色苷含量與云南石鼓、銀橋、右所和?？谙嗨啤?/p>

3 結(jié)論

本研究選擇長江流域產(chǎn)區(qū)和云貴高原產(chǎn)區(qū)的品名為“燦爛”的兔眼藍(lán)莓果為研究對(duì)象，探究不同地區(qū)藍(lán)莓果中花色苷的分布，除芍藥素僅檢測(cè)到半乳糖苷外，錦葵色素、矢車菊素、飛燕草素、矮牽牛素均以半乳糖苷、葡萄糖苷和阿拉伯糖苷形式存在，共13 種。通過對(duì)比不同的藍(lán)莓果實(shí)花色苷分布可知，大多數(shù)藍(lán)莓果實(shí)中錦葵色素和矢車菊素含量最高，各類花青素以半乳糖苷形式存在的最多，其次是阿拉伯糖苷、葡萄糖苷。各地區(qū)的藍(lán)莓果中含量最高的花色苷為錦葵色素-3-O-半乳糖苷和矢車菊素-3-O-半乳糖苷，飛燕草素-3-O-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷是含量最低的花色苷。在不同地區(qū)中，云南龍朋總花色苷含量最高，浙江草塔的最低。

圖4 不同地區(qū)藍(lán)莓果實(shí)中花色苷分布與地理環(huán)境條件聚類分析Fig.4 Cluster analysis of anthocyanin distribution in blueberry fruits and geographical environment in different regions

不同地域環(huán)境對(duì)藍(lán)莓花青素的積累有較大影響，低緯度、高海拔的高原地區(qū)在低氣壓環(huán)境下更能促進(jìn)藍(lán)莓花青素的積累。日照和溫度也影響花色苷的合成和積累。光照強(qiáng)度與花色苷的形成呈正相關(guān)，低溫更利于花色苷的合成。在長江流域產(chǎn)區(qū)（湖北獨(dú)山、浙江草塔及江蘇白馬）種植的藍(lán)莓中，以湖北獨(dú)山的果實(shí)中花色苷含量最高，可能當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件更適于藍(lán)莓的生長及花色苷的累積。貴州麻江縣的宣威鎮(zhèn)和賢昌鎮(zhèn)同屬于亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候區(qū)，兩地的氣壓、緯度等其它環(huán)境條件相似的情況下，海拔高度和年均氣溫的差異是影響兩地藍(lán)莓果實(shí)中花色苷含量的主要環(huán)境因素。由于高原山地地區(qū)環(huán)境復(fù)雜，氣候和自然條件差異大，云南省內(nèi)村鎮(zhèn)（石鼓、銀橋、右所、?？诤妄埮螅┓N植的藍(lán)莓果花色苷含量受經(jīng)緯度、海拔高度等影響更為復(fù)雜，是多種環(huán)境因素綜合作用的結(jié)果。今后可選取更多地區(qū)樣本，深入了解藍(lán)莓種植地區(qū)地理環(huán)境，進(jìn)一步探究種植地區(qū)環(huán)境條件與藍(lán)莓果中花色苷積累的關(guān)系。