李小偉 王燕文 何小強(qiáng) 譚雄 羅志昊

（四川省龍日種畜場 624401）

人工授精是現(xiàn)代生物技術(shù)的重要手段之一。由于它能最大限度地發(fā)揮優(yōu)秀公畜種用價(jià)值[1]，防止近親繁殖，加快繁育與生產(chǎn)應(yīng)用進(jìn)程，提高種業(yè)水平，常被用于動(dòng)物育種生產(chǎn)實(shí)踐中，愈來愈受到世界各國的普遍重視。目前動(dòng)物采精常用方法主要有假陰道法和筒握法，并在牛、羊、豬等家畜上普遍應(yīng)用。但對于一些野性強(qiáng)、馴化難、性情暴烈、膽小易驚的動(dòng)物，采用這些方法采精比較困難，不易成功。電刺激采精法獲得成功后，彌補(bǔ)了常規(guī)方法的局限，被廣泛用于其他野生和經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的人工采精中，對野生動(dòng)物遺傳資源的保護(hù)和利用具有重要意義。

1 電刺激采精技術(shù)的原理

電刺激采精是利用低電壓小電流交流電刺激動(dòng)物薦椎部低級(jí)神經(jīng)中樞，引起動(dòng)物性興奮并不自覺的射精來達(dá)到采精目的。

2 電刺激采精技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

電刺激采精技術(shù)在假陰道采精技術(shù)基礎(chǔ)上又具有更多方面的優(yōu)越性[2]。一是牦牛為季節(jié)性發(fā)情動(dòng)物，假陰道采精法僅能在牦牛發(fā)情季節(jié) （一般為6～9月）采精，而電刺激采精法不受牦牛季節(jié)性發(fā)情的影響，不需要臺(tái)牛 （發(fā)情母牛），可實(shí)現(xiàn)全年采精。二是假陰道采精必須對牦牛進(jìn)行調(diào)教，由于牦牛野性強(qiáng)，調(diào)教牦牛耗時(shí)、費(fèi)力，同時(shí)易對調(diào)教人員造成傷害，而電刺激采精不需要調(diào)教牦牛，省時(shí)、省力。三是假陰道采精時(shí)公牛未被保定，而電刺激采精時(shí)公牛被保定，不易對采精人員造成傷害。

3 采精前的準(zhǔn)備

3.1 場地準(zhǔn)備

牦牛電刺激采精一般在巷道圈或配種架進(jìn)行，以便保定公牛，要求場地寬敞、平坦、清潔、遮陽、通電。

3.2 公牛準(zhǔn)備

挑選優(yōu)質(zhì)、健康、無遺傳疾病、無生殖缺陷的成年公牛，年齡一般4～9歲。將公牛保定在巷道圈或采精平臺(tái)，用繩索將牦牛的頭和兩后腿腳踝拴牢保定在固定鋼管柱欄上，用牛毛剪剪掉牦牛的腹毛，并用蒸餾水清洗干凈公牛的陰囊及其周圍，同時(shí)清洗干凈陰囊內(nèi)部，擦干水。

3.3 器材準(zhǔn)備

主要有電刺激采精器1臺(tái) （包括電刺激器和刺激電極棒兩個(gè)部分，儀器供電：交流220V，電刺激輸出電流：≤2A），車載恒溫冰箱1臺(tái)，500ml optidyl稀釋液1瓶，蒸餾水，接精杯20個(gè)，50ml螺口尖底離心管30個(gè)，洗瓶2個(gè)，100ml量筒1個(gè)，凡士林1瓶，牛毛剪1把，250ml螺口玻璃試劑瓶1個(gè)，酒精溫度計(jì)2支等。

3.4 其他準(zhǔn)備

清洗：用蒸餾水將量筒、試劑瓶、離心管清洗3遍，并甩干水分，有條件的可用烘箱將水分烘干。配置精液稀釋液：用量筒量取100ml optidyl稀釋液注入試劑瓶，再用量筒量取150mL蒸餾水注入試劑瓶內(nèi)，搖勻后放入34℃的水浴鍋中或恒溫箱中加熱恒溫15min左右，用溫度計(jì)測量稀釋液溫度，使之達(dá)到 34～36℃。

4 電刺激采精操作流程

（1）將電源線一端插入儀器面板插座上，另一端接220V交流電源，將刺激電極棒連線兩插頭插入 “輸出”孔。

（2）在開啟 “電源”開關(guān)前，應(yīng)先將右下角控制開關(guān)處于中間 “關(guān)閉”狀態(tài)，模式選擇為 “手動(dòng)”，電壓檔位選擇“50V”。

（3）通過電壓調(diào)節(jié)旋鈕將起始電壓調(diào)至10V。

（4）將涂抹有凡士林或肥皂水的刺激電極棒通過牦牛肛門插入直腸后，打開 “電源輸入”開關(guān)，撥動(dòng) “點(diǎn)動(dòng)”開關(guān)，以刺激牦牛薦椎神經(jīng)。

（5）通過撥動(dòng) “點(diǎn)動(dòng)”開關(guān)控制電刺激時(shí)間，旋轉(zhuǎn) “電壓調(diào)節(jié)”按鈕控制輸出電壓，同時(shí)密切觀察牦牛身體反應(yīng)。一般電壓升高幅度為2V，在每檔電壓下持續(xù)輸出6～8s，停留4s左右，重復(fù)此過程2次，再逐步升高電壓。一般當(dāng)刺激電極棒插入直腸40～45cm，電壓在24～30V即可采出牦牛精液。

5 精液品質(zhì)檢查

5.1 外觀檢查

采精后先觀察精液顏色、體積，正常精液為乳白色液體。公牦牛正常射精量為4～8ml。

5.2 密度與活力檢查

精子密度也稱為精子濃度，指單位容積 （1ml）所含有的精子數(shù)目。精子活力指直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分率。在顯微鏡下觀察，原精中精子活力≥65%，密度≥6×108個(gè)/ml，畸形率小于≤15%時(shí)，采集出的新鮮精液才能被制成細(xì)管凍精。

6 精液稀釋與平衡

6.1 精液稀釋

將配置好的稀釋液沿杯壁緩慢注入接精杯內(nèi)，根據(jù)原精密度，讓稀釋后的混合液與原精成一定比例，確保精液稀釋后精子密度保持在適宜水平。一般牦牛精液稀釋倍數(shù)為4～8倍。

6.2 精液平衡

將稀釋后的精液沿螺口尖底離心管壁，緩慢注入離心管內(nèi)。擰緊蓋子，豎立放入塑料桶內(nèi)，蓋上毛巾和桶蓋，避光室溫靜置平衡15～30min后，放入4℃車載冰箱內(nèi)。

7 注意事項(xiàng)

（1）采精時(shí)必須密切觀察牦牛的射精動(dòng)作，有的牦牛在電壓12V左右就能射精，但也有電壓在40V左右才射精。電壓不宜超過46V，刺激頻率也不宜過快，否則會(huì)對牦牛造成身體傷害。

（2）采精頻率一般每周不超過2次，最好每周1次。采精前可對牦牛適當(dāng)補(bǔ)飼精料、微量元素等。

（3）接精時(shí)注意觀察牦牛陰莖排出的液體，一般最開始會(huì)排出一些前列腺液，應(yīng)棄之，當(dāng)排出的液體為乳白色時(shí)即為精液。

（4）牦牛電刺激采精時(shí)會(huì)表現(xiàn)出性情暴躁、身體抖動(dòng)，在接精時(shí)精液容易受污染，造成精液品質(zhì)下降，因此，要防止這種情況發(fā)生。