付國(guó)平，劉松雁，張 優(yōu)

（1. 石家莊市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì) 050000；2. 石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050041）

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人民群眾也越來(lái)越注重食品安全。其中畜產(chǎn)品由于養(yǎng)殖周期長(zhǎng)，價(jià)值高，經(jīng)常有不法養(yǎng)殖戶故意在投入品中添加違禁物質(zhì)，以達(dá)到賺取不法收入的目的。由于添加的抗生素、促生長(zhǎng)激素等物質(zhì)會(huì)殘留在動(dòng)物體內(nèi)，人類食用后會(huì)造成各種不良反應(yīng)，對(duì)人民群眾的健康造成了重要威脅。這就對(duì)畜產(chǎn)品安全檢測(cè)提出了更高的要求，不僅要對(duì)畜產(chǎn)品中的獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，還要對(duì)養(yǎng)殖投入品中的非法添加物進(jìn)行快速、高通量的檢測(cè)。在早期的快速高通量檢測(cè)方法中，包括膠體金法、酶聯(lián)免疫法等方法，其優(yōu)點(diǎn)是前處理簡(jiǎn)單，一次可以處理大量樣品，但是由于技術(shù)的限制，常常會(huì)造成假陽(yáng)性、假陰性，準(zhǔn)確率不高，且無(wú)法定量。大多數(shù)試劑盒只能針對(duì)單一品種藥物，通量低，如果大范圍篩查不同藥物，檢測(cè)成本會(huì)大幅上升。質(zhì)譜技術(shù)在近年來(lái)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用，不僅能夠定性，在定量方面也比較可靠。但是由于檢測(cè)方式的限制，如果使用串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行定量檢測(cè)，不能進(jìn)行多化合物同時(shí)檢測(cè)，且對(duì)未知物無(wú)法檢測(cè)；如果使用單極質(zhì)譜的全掃描模式，則靈敏度差，不能滿足定量檢測(cè)要求。

高分辨質(zhì)譜的出現(xiàn)較好地解決了高通量、快速、高靈敏度、高分辨率的兼容問(wèn)題，在檢測(cè)方式上，高分辨質(zhì)譜普遍采用全掃描方式，可以進(jìn)行多種化合物的高通量分析，尤其是對(duì)于未知化合物有著較好的檢測(cè)能力。由于高分辨質(zhì)譜不需要針對(duì)特定化合物進(jìn)行優(yōu)化設(shè)置，操作簡(jiǎn)單，技術(shù)人員通過(guò)較短時(shí)間的培訓(xùn)就能進(jìn)行儀器操作；在數(shù)據(jù)分析方面，由于各儀器生產(chǎn)廠家建立了較為全面的譜庫(kù)，使得數(shù)據(jù)分析也變得相對(duì)簡(jiǎn)單。目前，使用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜進(jìn)行分析檢測(cè)已經(jīng)成為了一種潛力巨大的方法，越來(lái)越多的分析人員使用高分辨質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，提高了分析效率，也更加容易發(fā)現(xiàn)問(wèn)題樣品，確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全。

1 超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜的分類及原理

在質(zhì)譜技術(shù)大規(guī)模應(yīng)用之前，檢測(cè)人員普遍使用色譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。而色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，克服了檢測(cè)單一的缺點(diǎn)，使得分析領(lǐng)域取得了長(zhǎng)足發(fā)展，尤其是超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，大大縮短了分析時(shí)間，并且可以發(fā)現(xiàn)隱藏在復(fù)雜基質(zhì)中的痕量殘留物質(zhì)。

常見的高分辨質(zhì)譜包括磁質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜和傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜等，其中磁質(zhì)譜價(jià)格昂貴，對(duì)操作人員要求較高，分析速度較慢，不適合于獸藥殘留的常規(guī)檢測(cè)。

1.1 飛行時(shí)間質(zhì)譜是當(dāng)前大多數(shù)質(zhì)譜生產(chǎn)廠家的技術(shù)方式，一般由四極桿和飛行時(shí)間兩個(gè)質(zhì)量分析器組成，具有較高的選擇性和分辨率，該技術(shù)已經(jīng)在分析領(lǐng)域得到了大量的應(yīng)用。

1.2 Orbitrap 是賽默飛世爾專有的質(zhì)譜技術(shù)，它一種離子阱質(zhì)量分析器，由兩個(gè)外部電極和一個(gè)中心電極組成，可以同時(shí)用作分析器和檢測(cè)器。由于其設(shè)置，Orbitrap 質(zhì)量分析器實(shí)際上是傅里葉變換質(zhì)量分析器，模擬FT 離子回旋共振技術(shù)。其具有超高的分辨率，可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高選擇性的定量定性分析。

2 超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜在動(dòng)物源食品藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 生鮮乳中獸藥殘留的檢測(cè)

我國(guó)消費(fèi)者對(duì)于牛奶的消費(fèi)量大增，奶牛的養(yǎng)殖也處于相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)期。但是由于前些年非法添加物、抗生素超標(biāo)等事件的影響，對(duì)于奶牛養(yǎng)殖的監(jiān)管一直都非常嚴(yán)格，市場(chǎng)、農(nóng)業(yè)等相關(guān)部門均加大了抽檢力度，因此建立一種高通量、快速的牛乳中多種非法添加及藥物殘留檢測(cè)技術(shù)也就成為了當(dāng)下檢測(cè)行業(yè)的研究重點(diǎn)。

霍路曼等建立了生乳中29 種獸藥殘留的快速檢測(cè)方法，生乳樣品采用0.2%甲酸乙腈溶液提取上清液,采用QuECHERS 凈化管凈化后測(cè)定，Mass Error 在±2.0mg/kg 之內(nèi)，滿足了快速定性的要求，提高篩查效率與準(zhǔn)確性。田懷香等建立了一種包括17 大類，共174 種獸藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜方法。樣品用乙腈和乙酸乙酯提取，冷凍凈化后，采用電噴霧正離子模式檢測(cè)，檢測(cè)限為1～10ng/g，99 種藥物回收率在70%～130%范圍內(nèi)，該方法檢測(cè)速度快，靈敏度高，大大提高了生鮮乳中獸藥篩查的效率。高馥蝶等建立了牛奶中42 種農(nóng)藥和獸藥殘留的快速檢測(cè)方法，包括13 種農(nóng)藥和29 種獸藥，采用QuEChERS 方法進(jìn)行樣品前處理，牛奶樣品經(jīng)含1%甲酸的乙腈溶液提取，同時(shí)加入無(wú)水硫酸鈉和氯化鉀鹽析，提取液經(jīng)C18 填料凈化后直接測(cè)定，定量限為1 ～100μg/kg。林天野等建立了一種對(duì)牛奶中21 種磺胺類藥物殘留進(jìn)行快速定性篩查及定量分析方法，稱取2g 牛奶樣品，用乙腈與水體積比為1:1 提取，均質(zhì)震蕩后，采用無(wú)水硫酸鎂脫水，離心后取乙腈層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸干，加入超純水溶解后，經(jīng)固相萃取柱凈化，濾膜過(guò)濾進(jìn)樣，21 種磺胺類藥物平均加標(biāo)回收率為60.0%～96.0%。

2.2 畜禽組織中獸藥殘留的檢測(cè)

肉類是人們蛋白質(zhì)的主要來(lái)源，畜禽養(yǎng)殖在我國(guó)取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，然而超量使用抗生素，濫用瘦肉精、蘇丹紅等違法添加物，使得我國(guó)飽受畜產(chǎn)品質(zhì)量安全困擾，因此建立快速、簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)方法，對(duì)于加強(qiáng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)能力具有重要意義。

劉鑫等利用四極桿-軌道阱高分辨質(zhì)譜儀建立了動(dòng)物源中81 種獸藥殘留同時(shí)篩查的快速分析方法，稱取2.5g 樣品，加入無(wú)水硫酸鈉和乙腈，超聲提取，離心取上清液氮?dú)獯蹈?，?fù)溶后檢測(cè)，定性、定量結(jié)果均滿意。孫清榮等利用高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜建立了雞肉中48 種獸藥殘留的快速篩查和檢測(cè)方法。樣品采用乙腈/水(7:3)提取，經(jīng)Oasis PRi ME HLB 固相萃取柱凈化，采用正離子全信息串聯(lián)質(zhì)譜模式掃描，外標(biāo)法定量。

2.3 水產(chǎn)動(dòng)物中獸藥殘留的檢測(cè)

水產(chǎn)動(dòng)物主要是淡水養(yǎng)殖魚、蝦等動(dòng)物，在人工養(yǎng)殖、運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程中，有不法分子為了經(jīng)濟(jì)利益鋌而走險(xiǎn)，違法添加各種抗生素、禁用藥物等物質(zhì)，加大了水產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)，造成食品安全問(wèn)題，由于水產(chǎn)品含水量大，檢測(cè)方法與畜禽肉不盡相同，建立快速、高通道的高分辨檢測(cè)方法，能夠有效威懾不法分子，確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全。

李詩(shī)言等建立了中華鱉中42 種獸藥殘留的液相色譜-四極桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜快速篩查方法。采用乙腈/水(6 ∶4,V/V)提取樣品，經(jīng)HLB 柱吸附凈化后上機(jī)。在5～50μg/kg 添加水平下的平均回收率為56.8%～103.8%，同時(shí)采用精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)和二級(jí)譜圖庫(kù)檢索的方式快速定性確證。歐陽(yáng)少倫等建立了快速篩查水產(chǎn)品中123 種獸藥殘留的在線凈化/液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法，獸藥涵蓋15 類藥物。樣品經(jīng)乙腈-水(8:2)提取,提取液經(jīng)在線凈化柱Cyclone P 凈化,富集后,將目標(biāo)物洗脫上機(jī)，定量限為0.1 ～50μg/kg。該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，靈敏，適用于批量水產(chǎn)品中多種獸藥殘留的快速篩查。

3 超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜在飼料中藥物殘留及非法添加檢測(cè)中的應(yīng)用

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告 第194 號(hào)公告了自2020 年1 月1 日起，退出除中藥外的所有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑品種，這宣布了我國(guó)抗生素減量計(jì)劃進(jìn)入了一個(gè)新的階段。然而，促生長(zhǎng)類抗生素所具有的經(jīng)濟(jì)價(jià)值十分誘人，不法廠家，不法養(yǎng)殖戶鋌而走險(xiǎn)，繼續(xù)在飼料中違法添加抗生素，對(duì)人民身體健康造成了十分嚴(yán)重的危害。因此，研究快速、高通量的檢測(cè)方法已經(jīng)迫在眉睫，傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法、液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法都有各自的局限性，液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用法由于自身的特點(diǎn)，解決了其他方法的局限性，具有十分廣闊的應(yīng)用前景。

王勇為等利用LTQ Orbitrap 組合式高分辨質(zhì)譜儀對(duì)飼料中同分異構(gòu)體除草劑殘留進(jìn)行鑒定，對(duì)于異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)類似物的鑒定提供了全面的數(shù)據(jù)，不僅定性更加準(zhǔn)確，檢出限也達(dá)到了1ppb。藍(lán)芳等使用液相色譜-四極桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)飼料中36 種違禁藥物進(jìn)行了快速篩查，建立了飼料中β-受體激動(dòng)劑、激素共36 種違禁藥物的快速篩查方法，樣品中加入乙腈和混合吸附劑，經(jīng)渦旋分散、振蕩提取、離心和濃縮步驟，質(zhì)量數(shù)誤差絕對(duì)值小于7.3 ppm，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.99，平均回收率為65%～120%，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確。

4 超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜在獸藥非法添加檢測(cè)中的應(yīng)用

部分獸藥生產(chǎn)廠家為了提高產(chǎn)品的功效，不執(zhí)行獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，非法添加其他藥物，尤其是中藥中添加西藥成分，表面上看其產(chǎn)品功效顯著，實(shí)際上由于成分不明，容易造成養(yǎng)殖戶誤用違禁藥品，生產(chǎn)出不合格的畜產(chǎn)品，一旦流入市場(chǎng)會(huì)對(duì)人民群眾健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。嚴(yán)厲打擊獸藥中非法添加其他藥物，是現(xiàn)階段執(zhí)法的重要組成部分。而建立快速、有效的檢測(cè)方法，能夠在最短時(shí)間內(nèi)震懾不法分子，確保畜禽生產(chǎn)用藥安全。傳統(tǒng)的獸藥非法添加檢測(cè)主要使用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法，受到液相色譜分離度、檢測(cè)器品中限制較多，且靈敏度有限，不能更好、更快的檢測(cè)。而使用液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，能夠更短時(shí)間、更高通量的對(duì)獸藥進(jìn)行檢測(cè)。

熊玥等采用超高效液相色譜-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜對(duì)農(nóng)業(yè)執(zhí)法案件中繳獲的未知粉末進(jìn)行分析研究，建立了未知物篩查的檢測(cè)方法，利用過(guò)靶向及非靶向篩查，為未知添加物的篩查、確證提供了思路和技術(shù)參考。

5 結(jié)論與展望

為了解決多種類藥物的大規(guī)模篩查問(wèn)題，并且兼具一定的定量檢測(cè)能力，針對(duì)畜產(chǎn)品、養(yǎng)殖投入品開發(fā)出合適的高分辨質(zhì)譜檢測(cè)方法，是十分必要的。高分辨質(zhì)譜具有參數(shù)設(shè)定簡(jiǎn)單，定性能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合超高效液相色譜連用技術(shù)，尤其是對(duì)于未知化合物以及非定向化合物具有很好的篩查能力。目前高分辨質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴，維護(hù)保養(yǎng)不變，使用成本較高，但是隨著應(yīng)用越來(lái)越廣，相信未來(lái)必定能成為藥物篩查的重要手段。