劉楠楠

遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)阜新礦總醫(yī)院消化內(nèi)科，遼寧阜新 123000

潰瘍性結(jié)腸炎是發(fā)生在結(jié)腸、直腸的與自身免疫有關(guān)的炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD），病理特征為結(jié)腸、直腸黏膜和黏膜下層炎癥，臨床表現(xiàn)為黏液膿血便、腹痛、腹瀉等[1]。由于各種因素的影響，該病的發(fā)病人數(shù)逐漸增加，涉及的發(fā)病因素包括機(jī)體免疫功能失調(diào)、遺傳易感性、腸道菌群紊亂等[2]。炎性小體是一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，其功能主要是識別不同的損傷信號NOD 樣受體蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）是炎癥小體的關(guān)鍵組成部分，目前研究比較多的為NLRP3[3]。NLRP3 的高表達(dá)可促進(jìn)炎癥因子的釋放，引起炎癥級聯(lián)反應(yīng)及組織損傷，在機(jī)體的腫瘤、炎癥、纖維化的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要作用[4]。潰瘍性結(jié)腸炎患者可伴隨有炎癥和凝血機(jī)制的異常，機(jī)體呈高凝狀態(tài)[5]。持續(xù)的高凝狀態(tài)可能與潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床進(jìn)展有關(guān)，也具有促進(jìn)炎癥發(fā)生發(fā)展的作用[6-7]。本文探討與分析了潰瘍性結(jié)腸炎患者NLRP3 表達(dá)水平與凝血功能的相關(guān)性，希望為闡明潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生機(jī)制提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年10月在遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)阜新礦總醫(yī)院診治的潰瘍性結(jié)腸炎患者95例作為病例組，選取同期進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查的健康人群95 例作為對照組。兩組患者的性別、年齡、體重指數(shù)、血小板、總膽固醇、血尿酸等比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。所有研究對象均對本研究知情同意；本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病例組患者均確診為潰瘍性結(jié)腸炎；②對照組結(jié)腸鏡檢查正常，其他體檢指標(biāo)正常；③所有納入患者知情同意；④年齡18～65 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①無法耐受結(jié)腸鏡檢查者；②合并嚴(yán)重心、腦、肝腎疾病者；③妊娠及哺乳期婦女；④合并自身免疫性疾病者；⑤克羅恩病、缺血性腸病等疾病者；⑥有癌變可能者；⑦巨結(jié)腸、腸梗阻、腸穿孔者。

表1 兩組一般資料的比較（±s）

表1 兩組一般資料的比較（±s）

組別 例數(shù) 性別（例，男/女）年齡（歲） 體重指數(shù)（kg/m2） 血小板（×109/L） 總膽固醇（mmol/L） 血尿酸（μmol/L）病例組對照組χ2/t 值P 值95 96 48/47 50/45 0.084 0.772 49.28±4.68 49.57±3.33 0.314 0.789 22.47±1.47 22.19±1.11 0.298 0.814 228.76±45.29 229.09±50.17 0.333 0.776 3.78±0.65 3.81±0.77 0.087 0.934 271.09±34.27 270.76±45.17 0.177 0.872

1.2 方法

1.2.1 NLRP3 表達(dá)水平檢測 收集病例組結(jié)腸黏膜正常及病灶組織，制成病理切片后，采用免疫組化法檢測NLRP3 表達(dá)水平，使用Image-pro plus 圖像分析軟件，測定積分吸光度，記錄平均值。兔抗人NLRP3 多克隆抗體購自Proteintech 公司，免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 凝血功能檢測 采集所有入選者的空腹靜脈血2 ml 左右，抗凝后利用血凝計(jì)檢測凝血功能相關(guān)指標(biāo)，包括凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）與纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB），檢測試劑盒都購自美國貝克曼庫爾特公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗(yàn)；采用多元線性回歸分析PT、APTT、FIB 對NLRP3 的影響。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NLRP3 表達(dá)水平的比較

病例組的NLRP3 表達(dá)水平為（27.15±2.17），高于對照組（15.63±3.33），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.646，P＜0.001）。

2.2 兩組凝血功能指標(biāo)的比較

病例組的PT、APTT 長于對照組，F(xiàn)IB 值低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 兩組凝血功能指標(biāo)的比較（±s）

表2 兩組凝血功能指標(biāo)的比較（±s）

注 PT：凝血酶原時(shí)間；APTT：活化部分凝血活酶時(shí)間；FIB：纖維蛋白原

組別 例數(shù) PT（s） APTT（s） FIB（g/L）病例組對照組t 值P 值95 96 10.33±1.47 12.98±0.37 6.844＜0.05 28.34±2.74 30.76±0.77 5.972＜0.05 4.58±0.77 3.08±0.71 7.183＜0.05

2.3 NLRP3 與凝血功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

Pearson 分析顯示，NLRP3 與FIB 呈正相關(guān)，與PT、APTT 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）（表3）。

表3 潰瘍性結(jié)腸炎患者NLRP3 表達(dá)水平與凝血功能的相關(guān)性（n=95）

2.4 凝血功能指標(biāo)對NLRP3 表達(dá)水平的影響

多元線性回歸分析顯示，PT、APTT、FIB 為影響患者NLRP3 表達(dá)水平的因素（P＜0.05）（表4）。

表4 凝血功能指標(biāo)對NLRP3 表達(dá)水平的影響

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，近年來該病發(fā)病率在亞洲人群中呈明顯增高趨勢，病情常遷延不愈，反復(fù)發(fā)作，可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[8]。該病的發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明，其不僅是具有遺傳易感性的個(gè)體，也是在各種內(nèi)外在環(huán)境的刺激下，可發(fā)生一系列異常的免疫反應(yīng)而引起的慢性腸道炎癥反應(yīng)，其中免疫功能失調(diào)在這個(gè)過程中發(fā)揮重要作用[9]。NLRP3 基因包含9 個(gè)外顯子編碼區(qū)，NLRP3 蛋白存在樹突狀細(xì)胞、T 和B 淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞中廣泛存在。本研究顯示病例組的NLRP3 表達(dá)水平高于對照組（P＜0.05）。從機(jī)制上分析，NLRP3 表達(dá)升高后可通過NF-κB 促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)，引起機(jī)體發(fā)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，最終促進(jìn)多種炎癥反應(yīng)性疾病的發(fā)生與發(fā)展[10]。同時(shí)結(jié)腸炎可導(dǎo)致機(jī)體溶酶體被破壞，可通過向胞質(zhì)釋放其內(nèi)容物以激活NLRP3 炎癥小體，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而形成惡性循環(huán)[11]。

潰瘍性結(jié)腸炎患者的血液多呈高凝狀態(tài)，僅表現(xiàn)為病變區(qū)腸黏膜下的血栓的出現(xiàn)，也有毛細(xì)血管微血栓的存在[12]。本研究顯示病例組的PT、APTT 值高于對照組，F(xiàn)IB 值低于對照組（P＜0.05）。從機(jī)制上分析，凝血功能異常可促使腸黏膜毛細(xì)血管微小血栓形成，機(jī)體血液的粘滯性增加，可使得腸黏膜血液血流緩慢，從而導(dǎo)致腸黏膜組織損傷，使腸黏膜組織缺血壞死潰瘍形成，誘發(fā)結(jié)腸炎的發(fā)生[13-14]。而結(jié)腸炎可促使機(jī)體釋放大量的炎癥因子，激活機(jī)體的凝血機(jī)制，增高了血液的黏滯度，引起血液纖維蛋白原的增加，加重了結(jié)腸炎患者的病情發(fā)展。當(dāng)前也有研究顯示活動期潰瘍性結(jié)腸炎患者存在著血漿纖維蛋白原和多種凝血因子的改變、血小板數(shù)量的增多和異常的血小板聚集，從而導(dǎo)致血液凝固機(jī)制的紊亂[15]。

作為炎癥反應(yīng)的核心，NLRP3 的初級活化可導(dǎo)致炎癥級聯(lián)反應(yīng)，可為組織損傷的發(fā)生提供適宜的條件。不過組織損傷到一定程度也會誘發(fā)NLRP3 的次級活化，進(jìn)而抑制相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展。已有研究顯示NLRP3 在結(jié)腸炎發(fā)病中具有促炎性反應(yīng)的作用，對機(jī)體的髓過氧化物酶釋放和腸道菌群構(gòu)成都有一定的影響[16]。Pearson 分析顯示NLRP3 與FIB 呈正相關(guān)，與PT、APTT 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；多元線性回歸分析顯示PT、APTT、FIB 為影響患者NLRP3 表達(dá)水平的重要因素（P＜0.05）。從機(jī)制上分析，NLRP3 可誘導(dǎo)Caspase-1 的自我剪切，調(diào)控機(jī)體的自身免疫應(yīng)答反應(yīng)，也能夠調(diào)控白介素-1β 的產(chǎn)生。并且NLRP3 的激活也與血小板活化存在相關(guān)性，NLRP3 炎癥小體的過度激活是導(dǎo)致機(jī)體凝血功能異常，而后者也可促進(jìn)NLRP3 的過量釋放。如果能進(jìn)一步研究NLRP3 與凝血功能指標(biāo)之間的具體作用方式，將有望成為潰瘍性結(jié)腸炎治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，潰瘍性結(jié)腸炎患者多表現(xiàn)為NLRP3高表達(dá)水平，伴隨有凝血功能異常，PT、APTT、FIB 為影響患者NLRP3 表達(dá)水平的重要因素。