張泳儀，莫偉平

（東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523200）

2 型 糖 尿 病(Type 2 diabetes mellitus, T2DM) 是一種臨床上常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝紊亂癥。內(nèi)皮功能障礙是T2DM 患者發(fā)生血管并發(fā)癥的重要原因之一。高血糖前內(nèi)皮功能受損也可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、NOS 表達(dá)和NO 產(chǎn)生的改變，從而增加血管收縮因子內(nèi)皮素-1(ET-1) 的產(chǎn)生[1]，并進(jìn)一步引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化。骨形態(tài)發(fā)生蛋白1- 表皮生長(zhǎng)樣結(jié)構(gòu)域蛋白2(signal peptide-CUB-EGF like containing protein 2,SCUBE2)是一種分泌蛋白，在血管內(nèi)皮中表達(dá)，可維持血管生成，參與血管相關(guān)疾病的病理生理過(guò)程[2]。研究表明，SCUBE2 在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)可能在血管功能變化中發(fā)揮重要作用[3]?；谶@些證據(jù)，本研究旨在探討SCUBE2 在2 型糖尿病中的表達(dá)，并探討SCUBE2與ET-1 的關(guān)系。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020 年6 月至2021 年6 月在我院接受治療的T2DM 患者，共35 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：1）所有患者均符合《中國(guó)2 型糖尿病防治指南（2017 年版）》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；2）年齡10 ～65 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并視網(wǎng)膜病變、腎病和心血管疾病的患者。選取35 例同時(shí)期在我院體檢中心進(jìn)行體檢的健康志愿者作為對(duì)照組。所有研究對(duì)象均簽署了知情同意書，并自愿參加本研究。本研究已通過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審批。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)

1）血清學(xué)檢測(cè)：采集所有研究對(duì)象的空腹肘靜脈血，以3000r/min 離心10min，分離血清并置于-80℃冰箱中長(zhǎng)期保存。采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清胰島素水平，采用生化分析儀檢測(cè)血脂四項(xiàng)，采用葡萄糖氧化酶- 過(guò)氧化物酶偶聯(lián)法檢測(cè)血糖。2）SCUBE2 與ET-1 表達(dá)水平檢測(cè)：用EDTA 抗凝管收集所有研究對(duì)象的血液標(biāo)本，使用Trizol 提取RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，-80℃保存待用。采用q-PCR 試劑盒檢測(cè)樣本中SCUBE2 與ET-1mRNA的表達(dá)水平。引物序列分別為：SCUBE2 ：Forward AGA CCC CAG AAG CTT GGA ATA，Reverse TCC CCT CCA CAT CTT CTG TTT ；ET-1 ： Forward GCC TTG GAG AAT TTA CTT CC，Reverse AAA TTC CAG CAC TTC TTG TC ；GAPDH：Forward ATG GGT GTG AAC CAT GAG AAG TA，Reverse GGC AGT GAT GGC ATG GAC。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用2-ΔΔCt公式計(jì)算T2DM 患者SCUBE2、ET-1的相對(duì)表達(dá)量，以均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 20.0 軟件對(duì)SCUBE2 與ET-1 進(jìn)行Pearson 相關(guān)性和顯著性分析，以P值＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血脂相關(guān)指標(biāo)比較

研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，T2DM 患者的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、總膽固醇/高密度脂蛋白、低密度脂蛋白/ 高密度脂蛋白水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。該結(jié)果提示T2DM 患者可能有冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

表1 血脂相關(guān)指標(biāo)（± s）

表1 血脂相關(guān)指標(biāo)（± s）

對(duì)照組（n=35）T2DM 組（n=35） P 值總膽固醇（mg/dL） 181.36±6.02 253.85±6.44 ＜0.001甘油三酯（mg/dL） 160.83±4.37 281.50±11.93 ＜0.001高密度脂蛋白（mg/dL）68.22±0.54 60.17±0.39 ＜0.001低密度脂蛋白（mg/dL）85.31±7.02 133.92±4.84 ＜0.001總膽固醇/高密度脂蛋白 3.04±0.13 4.39±0.12 ＜0.001低密度脂蛋白/高密度脂蛋白 1.36±0.08 2.30±0.14 ＜0.001

2.2 SCUBE2 與ET-1mRNA 表達(dá)水平比較

內(nèi)皮素-1 是介導(dǎo)血管功能障礙的關(guān)鍵因素，并可進(jìn)一步誘導(dǎo)靶器官的一些生化變化，從而導(dǎo)致疾病進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，T2DM 患者血清ET-1mRNA水平顯著增加（表2）。此外，我們還觀察了SCUBE2在T2DM 患者中的表達(dá)情況。SCUBE2 可在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)水平受促炎細(xì)胞因子影響。本研究顯示，在T2DM 患者中SCUBE2 表達(dá)上調(diào)（表2）。采用Pearson 相關(guān)性分析評(píng)價(jià)ET-1 和SCUBE2 在T2DM 中的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，在T2DM 患者中，SCUBE2的上調(diào)與ET-1 的高表達(dá)呈正相關(guān)，提示SCUBE2 參與了糖尿病血管功能障礙(r=0.824，P＜0.001)。

表2 SCUBE2 與ET-1 mRNA 表達(dá)水平比較

3 討論

內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cell, EC) 是慢性高血糖引起的最早發(fā)生功能改變和組織損傷的主要靶細(xì)胞[4-5]。ET-1 在高血糖時(shí)隨著血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF) 的表達(dá)增加，并引起血管通透性增加，這是糖尿病微血管疾病的一個(gè)特征[6]。ET-1 的產(chǎn)生和活性增加會(huì)促進(jìn)糖尿病早期血管收縮，增加糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。內(nèi)膜中的脂蛋白和甘油三酯可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和趨化因子可進(jìn)一步招募免疫細(xì)胞導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙[7]。高血糖前內(nèi)皮功能受損也可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、NOS 表達(dá)和NO 產(chǎn)生的改變，從而增加血管收縮因子內(nèi)皮素-1 (endothelin-1, ET-1) 的產(chǎn)生，并進(jìn)一步引發(fā)致動(dòng)脈粥樣硬化基因的表達(dá)[8]。此外，糖代謝改變引起的ET-1 水平升高也可刺激血小板聚集、血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell, VSMC) 增殖和遷移，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。因此，高血糖患者的血脂異常會(huì)進(jìn)一步加劇其內(nèi)皮功能障礙的嚴(yán)重程度，誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。本研究中首次證實(shí)了在T2DM 合并血脂異?；颊咧蠸CUBE2 的表達(dá)會(huì)顯著升高，SCUBE2 的表達(dá)與ET-1 呈正相關(guān)。T2DM 患者的血脂水平明顯高于對(duì)照組，而T2DM 患者的血脂異常與心血管疾病高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。高甘油三酯、高低密度脂蛋白可激活黏附分子和促炎途徑，導(dǎo)致血管功能改變，最終引起動(dòng)脈粥樣硬化[9]。因此，血脂異常是T2DM 患者動(dòng)脈粥樣硬化易感性的主要因素。

SCUBE2 是一種分泌蛋白，是膜固定蛋白的第二家族成員，由9 個(gè)EGF 樣重復(fù)序列、間隔區(qū)、3 個(gè)富含半胱氨酸的區(qū)域和羧基端1 個(gè)CUB 結(jié)構(gòu)域組成。在血管系統(tǒng)中，SCUBE2 可在內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞中檢測(cè)到。研究表明，SCUBE2 可直接結(jié)合由缺氧誘導(dǎo)因子-1