湯璐敏，車妙琳，鄒寒冰，楊海蕓，邵興華，李 鶴，牟 姍*

（1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院中醫(yī)科，上海 200127；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院腎內(nèi)科，上海 200127；3.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，上海 200127；4.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院老年科，上海 200127）

復(fù)發(fā)性尿路感染是指尿路感染6個(gè)月內(nèi)發(fā)作2次，或者1年內(nèi)發(fā)作3次。女性因尿道長度短，尿道靠近肛門，陰道細(xì)菌定植等生理因素更容易罹尿路感染。圍絕經(jīng)期女性卵巢功能漸進(jìn)性下降，雌激素缺乏，導(dǎo)致泌尿生殖器官萎縮，泌尿系統(tǒng)感染發(fā)生率及復(fù)發(fā)率更高。復(fù)發(fā)性尿路感染導(dǎo)致圍絕經(jīng)期女性身體不適、生活質(zhì)量下降和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重[1-3]。復(fù)發(fā)性尿路感染屬中醫(yī)“淋證”“勞淋”范疇。圍絕經(jīng)期女性處于“七七，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通”階段，氣血衰少，腎氣漸虛，勞淋反復(fù)發(fā)作，腎虛益甚，濕熱之邪久羈難清?！靶皻馑鶞?，其氣必虛”，腎藏精，腎氣不足，氣的衛(wèi)外功能下降，更易引發(fā)淋證反復(fù)發(fā)作，形成勞淋；淋證反復(fù)發(fā)作，濕熱之邪侵犯下焦，損耗氣血，氣血更虛，不能祛邪外出，導(dǎo)致淋證遷延不愈。故勞淋之為病，其本為氣血虧虛、腎氣不足，其標(biāo)為濕邪久留。本研究探討清炎方對圍絕經(jīng)期復(fù)發(fā)性尿路感染患者Th17/Treg的調(diào)節(jié)作用，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年2月－2020年10月在我院治療的圍絕經(jīng)期復(fù)發(fā)性尿路感染患者68例，按隨機(jī)數(shù)表法分為治療組與對照組，各34例。治療組，年齡（50.27±3.21）歲，病程（3.64±1.05）年；對照組，年齡（49.58±5.39）歲，病程（4.16±1.39）年。2組年齡、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《尿路感染診斷與治療中國專家共識（2015版）》[4]擬定：1）尿路感染6個(gè)月內(nèi)發(fā)作2次，或者1年內(nèi)發(fā)作3次診斷為復(fù)發(fā)性尿路感染，且屬于圍絕經(jīng)期。圍絕經(jīng)期定義參考《圍絕經(jīng)期的治療策略》[5]。2）簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）合并心腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病者；2）孕婦、哺乳期、精神疾病患者；3）對本研究所用藥物過敏者。

1.3 治療方法

對照組口服乳酸左氧氟沙星片（生產(chǎn)企業(yè)：浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，國藥準(zhǔn)字H20033922，規(guī)格：0.2 g），0.2 g，每日2次，連續(xù)2周。治療組在對照組基礎(chǔ)上加清炎方，方藥組成：地錦草30 g，鳳尾草30 g，石韋15 g，鴨跖草15 g，每日2次，早晚餐后各1次，溫水沖服，連續(xù)8周。

1.4 療效評價(jià)指標(biāo)

1.4.1 有效率和復(fù)發(fā)率評價(jià) 有效率：參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（第一輯）》擬定。治愈：臨床癥狀、體征消失，尿常規(guī)檢測2次正常，或尿細(xì)菌培養(yǎng)陰性；有效：臨床癥狀、體征減輕，尿常規(guī)白細(xì)胞顯著減少，或尿細(xì)菌培養(yǎng)偶有陽性；無效：臨床癥狀、體征改善不明顯，尿細(xì)菌培養(yǎng)仍陽性。復(fù)發(fā)率：統(tǒng)計(jì)6個(gè)月內(nèi)2組復(fù)發(fā)患者例數(shù)。

1.4.2 中醫(yī)證候積分 中醫(yī)證候積分參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（第一輯）》擬定。主癥：尿頻數(shù)，尿急迫感，尿道灼熱澀痛、小腹拘急疼痛；次癥：腰膝酸軟、五心煩熱、倦怠乏力、頭暈耳鳴、畏寒肢冷。均分為0、1、2三級積分，0分為無癥狀，1分為癥狀輕，2分為癥狀重。對比治療前后中醫(yī)證候積分情況，評估清炎方對中醫(yī)證候的影響。

1.5 外周血Th17/Treg細(xì)胞亞群檢測

采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測Th17/Treg細(xì)胞亞群。入組患者空腹采血，肝素鈉抗凝。Th17檢測：抗凝血50 μL 加入含10%胎牛血清/1% 雙抗的1 640淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育6 h，加入anti-HUMAN-CD3-APC、anti-HUMAN-CD8-FITC各6 μL 混勻避光15 min，加紅細(xì)胞裂解液1 mL，避光10 min，PBS 洗1 次，加破膜固定試劑盒AB液，避光15 min，PBS 洗1 次，加入anti-HUMAN-IL-17-PE，避光30 min，PBS洗1次，待測。Treg 檢測：抗凝血50 μL加入anti-HUMAN-CD4-FITC、anti-HUMAN-CD25-PE、anti-HUMAN-CD127-APC各6 μL，混勻避光15 min，加紅細(xì)胞裂解液1 mL，混勻避光室溫靜置10 min，PBS 洗1 次，待測。所有樣品均由BD FACSCaliburTMFLOW Cytometer檢測。

1.6 血清IL-10和IL-17檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測血清IL-10和IL-17水平。試劑盒購自R&D公司。具體操作流程按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件統(tǒng)計(jì)分析研究數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，符合正態(tài)分布使用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布使用非參數(shù)檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，使用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組臨床療效結(jié)果比較

見表1。

表1 2組臨床療效結(jié)果比較（n = 34） 例

2.2 2組治療前后中醫(yī)癥候積分變化比較

見表2。

表2 2組治療前后中醫(yī)癥候積分變化比較（±s，n = 34） 分

表2 2組治療前后中醫(yī)癥候積分變化比較（±s，n = 34） 分

注：與治療前比較，# P＜0.05；與對照組比較，△P＜0.05

組別 治療前 治療后治療組 8.51±3.67 2.29±1.68#△對照組 7.63±4.05 3.64±1.50#

2.3 2組治療前后外周血Th17/Treg細(xì)胞亞群水平比較

見表3。

表3 2組治療前后外周血Th17/Treg細(xì)胞亞群水平比較（±s，n = 34） %

表3 2組治療前后外周血Th17/Treg細(xì)胞亞群水平比較（±s，n = 34） %

注：與治療前比較，# P＜0.05；與對照組比較，△P＜0.05

組別 時(shí)間 Th17 Treg治療組 治療前 11.29±4.13 7.03±2.14治療后 7.04±2.57#△ 8.24±2.67#對照組 治療前 10.56±3.85 7.16±3.45治療后 8.62±2.90# 7.83±3.22

2.4 2組血清IL-17和IL-10水平變化比較

見表4。

表4 2組治療前后血清IL-17、IL-10水平變化比較（±s，n = 34） pg·mL-1

表4 2組治療前后血清IL-17、IL-10水平變化比較（±s，n = 34） pg·mL-1

注：與治療前比較，# P＜0.05；與對照組比較，△P＜0.05

組別 時(shí)間 IL-17 IL-10治療組 治療前 9.21±1.46 4.65±2.83治療后 3.73±1.34#△ 5.72±1.06#△對照組 治療前 8.96±1.52 4.92±2.59治療后 5.69±1.18# 4.84±1.67

3 討論

臨床治療復(fù)發(fā)性尿路感染使用抗生素是首選措施，但不良反應(yīng)多，耐藥性增加，復(fù)發(fā)較多。尿路感染反復(fù)發(fā)作可能與自身免疫功能失衡有關(guān)[6-8]。圍絕經(jīng)期女性卵巢功能退化，雌激素水平下降，泌尿生殖系統(tǒng)逐漸萎縮，局部免疫功能呈現(xiàn)下降態(tài)勢[9-11]。T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的重要參與者。Th17 細(xì)胞主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22，需要特定的細(xì)胞因子，如轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β），聯(lián)合IL-6或IL-21和轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt進(jìn)行分化，是促進(jìn)炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Treg細(xì)胞分泌IL-10和TGF-β需要特異性細(xì)胞因子TGF-β和轉(zhuǎn)錄因子FoxP3分化，起到抑制促炎效應(yīng)T細(xì)胞的增殖，維持免疫耐受、免疫穩(wěn)態(tài)，抑制炎癥反應(yīng)并保護(hù)組織免受感染性疾病損傷的作用。Th17和Treg是由T細(xì)胞在微環(huán)境中接受不同的信號刺激分化而來，兩者不平衡會導(dǎo)致炎癥的發(fā)生和持續(xù)[12-14]。多種慢性炎癥性疾病存在Th17/Treg失衡，如炎癥性腸炎、慢性阻塞性肺疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等[15-17]。多種中藥可以通過不同的信號通路調(diào)節(jié)Th17/Treg失衡改變炎癥性疾病的預(yù)后。白樺多糖通過調(diào)節(jié)結(jié)腸炎小鼠p-STAT1、p-STAT6、p-STAT3表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)Th1/Th2、Th17/Treg平衡，緩解腸道慢性炎癥[18]。中藥苦參提取物苦參堿顯著減少TNF-α和IL-17A的產(chǎn)生，上調(diào)FOXP3和下調(diào)RORγt，調(diào)節(jié)Treg/Th17，對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有保護(hù)作用[19]。

圍絕經(jīng)期復(fù)發(fā)性尿路感染患者處于“正虛邪戀”的病理狀態(tài)，正虛即免疫功能失調(diào)，邪戀即尿路反復(fù)感染，病邪久留不去。治療上，需以扶正固本，佐以祛邪，方能穩(wěn)定療效，減少復(fù)發(fā)。中藥清炎方可以抑制IL-17分泌，提高IL-10表達(dá)，調(diào)節(jié) Th17/Treg平衡，維持免疫穩(wěn)態(tài)，培補(bǔ)正氣，減少復(fù)發(fā)性尿路感染發(fā)作。