林廈菁 茅沈麗 范秋麗 林澤鈴 蔣守群* 陳達(dá)凱 李月俏 陳禹興 楊創(chuàng)欽 陳聰偉 鄧遠(yuǎn)倪

(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，畜禽育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部農(nóng)村部華南動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省畜禽育種與營(yíng)養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510640；2.廣州奇龍生物科技有限公司，廣州 510663)

隨著我國(guó)畜禽飼用產(chǎn)品禁用抗生素政策的頒布實(shí)施，開發(fā)有效替代抗生素的飼用產(chǎn)品已成為目前畜牧行業(yè)的研究熱點(diǎn)。溶菌酶作為生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一，廣泛存在于淚液、唾液、乳汁和蛋清等機(jī)體組織或分泌液當(dāng)中，能夠殺菌而對(duì)細(xì)胞無(wú)任何影響，是一種具有殺菌作用的天然抗感染物質(zhì)[1]，具有促進(jìn)機(jī)體腸道有益菌群的繁殖[2]、抑制病原菌[3]、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫[4]等功能。目前溶菌酶已經(jīng)在飼料產(chǎn)業(yè)、食品工業(yè)和醫(yī)藥業(yè)等方面廣泛應(yīng)用[5]。研究發(fā)現(xiàn)，溶菌酶具有提高肉雞生長(zhǎng)性能[6]、蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)[7]、肥育豬免疫功能[8]以及改善肉雞肉品質(zhì)[9]等作用。目前商品化成熟的溶菌酶為雞蛋清溶菌酶，對(duì)蛋源溶菌酶的研究居多，但人溶菌酶本身就是機(jī)體的蛋白質(zhì)，它有著比蛋清溶菌酶更好的活性和熱穩(wěn)定性，當(dāng)前重組人溶菌酶還未收錄在飼料添加劑目錄中，且關(guān)于重組人溶菌酶對(duì)于黃羽肉雞的作用尚未見研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)研究重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能和腸道健康的影響，探討重組人溶菌酶在黃羽肉雞應(yīng)用的可能性，以期為重組人溶菌酶在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供重要參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，選用1 440只健康、發(fā)育良好的1日齡黃羽肉雞(快速型麻黃雞)，按照體重一致原則隨機(jī)分為6個(gè)組，每組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只雞(公、母各占1/2)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，作為空白對(duì)照；抗生素組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加抗生素(200 mg/kg的4%恩拉霉素)的試驗(yàn)飼糧，作為陽(yáng)性對(duì)照；4個(gè)試驗(yàn)組分別飼喂添加1、2、3、4 g/kg重組人溶菌酶的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期共50 d，分為1～21日齡、22～42日齡、43～50日齡3個(gè)階段飼養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧(顆粒料)，參考《黃羽肉雞營(yíng)養(yǎng)需要量》(NY/T 3645—2020)標(biāo)準(zhǔn)中快速型黃羽肉雞的營(yíng)養(yǎng)需要量參數(shù)配制。基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加不同劑量的重組人溶菌酶或抗生素。試驗(yàn)飼糧重組人溶菌酶由廣州某公司生產(chǎn)提供，其中有效成分重組人溶菌酶活性≥10 000 U/g。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目Items含量Content1～21日齡1to21daysofage22～42日齡22to42daysofage43～50日齡43to50daysofage粗蛋白質(zhì)CP3)21.5419.7817.33鈣Ca3)0.960.880.85總磷TP3)0.730.680.63非植酸磷NNP2)0.460.450.36賴氨酸Lys2)1.081.000.85蛋氨酸Met2)0.470.360.31蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys2)0.840.690.61色氨酸Thr2)0.800.760.67

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用地面平養(yǎng)，墊料使用清潔衛(wèi)生的谷殼。1周齡期間室溫維持在32～34 ℃，從第2周起，每周下降2～3 ℃，第4周起，室溫保持27～28 ℃；前期雞舍相對(duì)濕度保持70%～80%，后期相對(duì)濕度保持在65%～75%；其他按照常規(guī)飼養(yǎng)操作規(guī)程飼養(yǎng)和常規(guī)免疫程序免疫。試驗(yàn)期間安排專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)，雞只自由采食和飲水，保持雞舍清潔衛(wèi)生。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

在試驗(yàn)雞21、42、50日齡前1天20：00斷料不斷水，于次日08:00以重復(fù)為單位稱重、結(jié)料，準(zhǔn)確記錄給料量和剩料量，計(jì)算試驗(yàn)期肉雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。每天觀察雞只健康情況和糞便情況，統(tǒng)計(jì)每個(gè)飼養(yǎng)階段各組試驗(yàn)雞的死亡率。

1.4.2 血液免疫指標(biāo)

在21、50日齡時(shí)，從每個(gè)重復(fù)選取1只試驗(yàn)雞(每組公、母各4只)，使用抗凝管翅靜脈采血3 mL，按照試劑盒(Solarbio，北京索萊寶科技有限公司)說(shuō)明書用淋巴細(xì)胞分離液從外周血樣品中分離外周血淋巴細(xì)胞。按照試劑盒(Southern Biotechnology Associates，美國(guó))說(shuō)明書加入小鼠抗雞CD3-FITC、小鼠抗雞CD4-APC或小鼠抗雞CD8a-PE在37 ℃孵育30 min，然后用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次以去除多余的抗體。采用流式細(xì)胞儀(BD Accuri C6 Plus，Becton, Dickinson and Company公司，美國(guó))測(cè)定和分析CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞亞群百分率并計(jì)算CD4+/CD8+比值。

1.4.3 腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)

在21、50日齡時(shí)，從每各重復(fù)選取1只試驗(yàn)雞(每組公、母各4只)，剪取空腸、回腸腸段中段樣，使用多聚甲醛對(duì)組織進(jìn)行固定，制作石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色，顯微鏡鏡檢，圖像采集分析，觀察腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)，測(cè)定空腸和回腸絨毛高度和隱窩深度，計(jì)算絨毛高度與隱窩深度的比值(絨隱比)。

1.4.4 盲腸菌群結(jié)構(gòu)

在21、50日齡時(shí)，從每各重復(fù)取1只試驗(yàn)雞(每組公、母各4只)，剪取盲腸，采用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)手提法提取盲腸樣本基因組DNA。以樣品基因組DNA為模板，采用細(xì)菌通用引物和518R擴(kuò)增樣品16S rDNA的V3區(qū)序列。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析。DGGE完畢后，采用銀染法染色。PCR產(chǎn)物采用OMEGA公司DNA Gel Extraction試劑盒純化回收。采用Quantity one分析軟件包對(duì)DGGE圖譜的電泳條帶數(shù)目、條帶密度進(jìn)行數(shù)字化分析。再將DGGE圖譜中優(yōu)勢(shì)條帶進(jìn)行回收，對(duì)總菌、大腸桿菌、乳酸菌、沙門氏菌和雙歧桿菌測(cè)序，將提取的DNA上PCR儀(TIB8600，泰普生物科學(xué)有限公司)檢測(cè)，根據(jù)樣品Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各樣品菌群數(shù)量，再換算成每克樣品中細(xì)菌拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值。

1.4.5 腸道黏膜細(xì)胞因子含量

在21日齡時(shí)，從每個(gè)重復(fù)取1只試驗(yàn)雞(每組公、母各4只)，刮取空腸和回腸黏膜，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法使用多功能酶標(biāo)儀(spectra max M-5，Molecular Devices公司，美國(guó))測(cè)定γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量。在50日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)取1只試驗(yàn)雞(每組公、母各4只)，刮取空腸黏膜，采用ELISA法使用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定IFN-γ、IL-10、IL-1β、IL-8、sIgA、IL-6、TNF-α和溶菌酶含量。試劑盒均采購(gòu)于北京厚澤鴻業(yè)科技有限公司，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8.0軟件的一般線性模型(GLM)程序進(jìn)行單因素方差分析，并對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，統(tǒng)計(jì)顯著水平為P<0.05，試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。

2 結(jié) 果

2.1 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，1～21日齡，2 g/kg重組人溶菌酶組試驗(yàn)雞平均日增重和平均日采食量最高，比對(duì)照組分別提高5.16%、3.22%，但與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)；22～42日齡，4 g/kg重組人溶菌酶組平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，比對(duì)照組提高6.61%；43～50日齡，2 g/kg重組人溶菌酶組平均日增重最高，但比對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。整個(gè)試驗(yàn)期(1～50日齡)，抗生素組的生長(zhǎng)性能與添加不同水平重組人溶菌酶的各試驗(yàn)組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of recombinant human lysozyme on growth performance of yellow-feathered broilers

續(xù)表2項(xiàng)目Items對(duì)照組Controlgroup抗生素組Antibioticsgroup重組人溶菌酶添加水平Recombinanthumanlysozymesupplementallevel/(g/kg)1234SEMP值P-value43～50日齡43to50daysofage平均日增重ADG/g43.4844.0842.7145.7143.0843.770.3520.1855平均日采食量ADFI/g117.25119.10117.67120.64117.66118.790.4850.3501料重比F/G2.702.702.772.652.732.720.0190.55171～50日齡1to50daysofage平均日增重ADG/g29.3129.9129.8330.4729.7630.450.1480.3354平均日采食量ADFI/g65.7166.4566.4067.4865.9967.310.2640.6476料重比F/G2.242.222.232.222.222.210.0050.8871

2.2 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞外周血淋巴細(xì)胞亞群百分率的影響

由表3可知，飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)21日齡黃羽肉雞外周血CD4+/CD8+比值有顯著影響(P<0.05)，其中3 g/kg重組人溶菌酶組外周血CD4+/CD8+比值顯著高于對(duì)照組。飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)50日齡黃羽肉雞外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群百分率均有顯著影響(P<0.05)，其中2 g/kg重組人溶菌酶組外周血CD3+淋巴細(xì)胞亞群百分率顯著高于抗生素組和1 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；2 g/kg重組人溶菌酶組外周血CD4+淋巴細(xì)胞亞群百分率顯著高于對(duì)照組、抗生素組和1 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；2 g/kg重組人溶菌酶組外周血CD8+淋巴細(xì)胞亞群百分率顯著高于抗生素組(P<0.05)。

表3 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞外周血淋巴細(xì)胞亞群百分率的影響Table 3 Effects of recombinant human lysozyme on percentages of lymphocyte subsets in peripheral blood of yellow-feathered broilers

2.3 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞腸道黏膜細(xì)胞因子含量的影響

由表4可知，飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)21日齡黃羽肉雞空腸黏膜細(xì)胞因子含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶顯著影響21日齡黃羽肉雞回腸黏膜IL-1β、IFN-γ含量(P<0.05)，其中1 g/kg重組人溶菌酶組回腸黏膜IL-1β含量顯著高于其他組(P<0.05)；1、2 g/kg重組人溶菌酶組回腸黏膜IFN-γ含量高于對(duì)照組和4 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)。飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)50日齡黃羽肉雞空腸黏膜IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、sIgA和溶菌酶含量均有顯著影響(P<0.05)，其中1 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜IL-1β含量顯著高于其他組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜IL-6含量顯著高于2 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜IL-8含量顯著高于4 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜IL-10含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜IFN-γ含量顯著高于1 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜sIgA含量顯著高于對(duì)照組和4 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；抗生素組和2、3、4 g/kg重組人溶菌酶組空腸黏膜溶菌酶含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表4 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞腸道黏膜細(xì)胞因子含量的影響Table 4 Effects of recombinant human lysozyme on intestinal mucosal cytokine contents of yellow-feathered broilers

2.4 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞盲腸菌群組成的影響

由表5可知，飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)21日齡黃羽肉雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量有顯著影響，其中3 g/kg重組人溶菌酶組和抗生素組盲腸乳酸桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。飼糧中添加不同水平重組人溶菌酶對(duì)50日齡黃羽肉雞盲腸大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌和總菌數(shù)量有顯著影響(P>0.05)，其中4 g/kg重組人溶菌酶組盲腸乳酸桿菌數(shù)量顯著高于其他組(P<0.05)，1和2 g/kg重組人溶菌酶組盲腸雙歧桿菌數(shù)量顯著高于抗生素組(P<0.05)；抗生素組盲腸總菌數(shù)量顯著低于其他組(P<0.05)。

表5 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞盲腸菌群組成的影響Table 5 Effects of recombinant human lysozyme on cecal microflora composition of yellow-feathered broilers

2.5 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞空腸和回腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表6可知，21日齡，抗生素組空腸隱窩深度顯著高于3 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；1 g/kg重組人溶菌酶組空腸絨隱比顯著高于抗生素組(P<0.05)；3 g/kg重組人溶菌酶組回腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組和1 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)，絨隱比顯著高于對(duì)照組、1 g/kg重組人溶菌酶組和抗生素組(P<0.05)。50日齡，2 g/kg重組人溶菌酶組空腸絨毛高度顯著高于3和4 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；對(duì)照組空腸隱窩深度顯著高于3和4 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)；4 g/kg重組人溶菌酶組回腸絨毛高度和絨隱比顯著高于1 g/kg重組人溶菌酶組(P<0.05)。黃羽肉雞空腸和回腸HE染色切片圖見圖1。

3 討 論

3.1 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能有改善作用，其中1～21日齡和43～50日齡階段飼糧添加2 g/kg重組人溶菌酶時(shí)生長(zhǎng)性能最佳，22～42日齡階段飼糧添加4 g/kg重組人溶菌酶時(shí)生長(zhǎng)性能最佳并且平均日增重顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明重組人溶菌酶在黃羽肉雞不同生長(zhǎng)階段適宜添加量存在差異，整個(gè)試驗(yàn)期抗生素組的生長(zhǎng)性能與添加不同水平重組人溶菌酶的各試驗(yàn)組無(wú)顯著差異。劉偉等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加蛋源溶菌酶能夠顯著提高黃羽肉雞的全期生長(zhǎng)性能，與抗生素組相比無(wú)顯著差異，這個(gè)結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果相似，也與Abdel-Latif等[11]和Liu等[12]在肉雞上的研究結(jié)果相近。姚遠(yuǎn)等[13]研究顯示，飼糧中添加天蠶素抗菌肽可以提高肉雞的生長(zhǎng)性能，其分析原因認(rèn)為是通過(guò)改善腸道功能和提高有益菌數(shù)量來(lái)間接實(shí)現(xiàn)的。本試驗(yàn)結(jié)果也顯示重組人溶菌酶可以改善黃羽肉雞腸道黏膜形態(tài)和提高腸道有益菌數(shù)量，推測(cè)這也是間接提高其生長(zhǎng)性能的原因。

表6 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞空腸和回腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table 6 Effects of recombinant human lysozyme on mucosal morphology of jejunum and ileum of yellow-feathered broilers

3.2 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞免疫功能的影響

溶菌酶是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一，它參與機(jī)體多種免疫反應(yīng)，能夠激發(fā)T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生，提高機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫水平[14]。研究發(fā)現(xiàn)，溶菌酶可以使肉雞淋巴細(xì)胞在刀豆蛋白A(ConA)刺激下，增強(qiáng)血液中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率[15]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加重組人溶菌酶可以提高黃羽肉雞外周血CD3+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+比值，說(shuō)明重組人溶菌酶有促進(jìn)體細(xì)胞免疫的作用。

細(xì)胞因子是免疫調(diào)節(jié)蛋白，它在先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中具有重要的作用，同時(shí)它也是腸道屏障健康的重要影響因素。IL-10是Th2細(xì)胞因子，主要參與體液免疫，能夠抑制炎癥細(xì)胞的增殖[16]。IL-1β、IFN-γ等炎癥細(xì)胞因子在機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)中具有重要作用，其中IL-1β可以誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的分化增殖，刺激抗體產(chǎn)生[17]；IFN-γ是Th1細(xì)胞因子，具有抗炎和促進(jìn)細(xì)胞免疫的作用[18]。sIgA是腸道免疫重要防御屏障，以它為主的體液免疫在腸道黏膜免疫中起到重要作用[19]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在黃羽肉雞飼糧中添加適量重組人溶菌酶可以提高腸道黏膜中IL-1β、IL-10、IFN-γ、sIgA含量。研究報(bào)道，肉雞飼糧中添加溶菌酶可以顯著提高腸道中IFN-γ和IL-10的表達(dá)水平[11]。也有研究發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加溶菌酶對(duì)血清中IL-6、IL-10的含量無(wú)顯著影響，可顯著提高sIgA的含量[10]，降低血清中IFN-γ的含量[20]。不同研究所得結(jié)果不一致，可能是由于雖然IL-1β、IFN-γ一般認(rèn)為是炎癥因子，但這些炎癥因子的作用是雙向的。在炎癥初期，抗炎物質(zhì)會(huì)抑制炎癥因子過(guò)多產(chǎn)生，緩解炎癥反應(yīng)；若作用于補(bǔ)償期，抑制抗炎癥因子過(guò)多產(chǎn)生，緩解免疫應(yīng)激反應(yīng)，抗炎和促炎處于平衡狀態(tài)才能維持機(jī)體正常的生命活動(dòng)。溶菌酶是動(dòng)物機(jī)體重要的非特異性免疫因子，其含量也是反映機(jī)體免疫功能強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧添加重組人溶菌酶可提高黃羽肉雞腸道黏膜中溶菌酶含量。以上試驗(yàn)結(jié)果均說(shuō)明重組人溶菌酶對(duì)于黃羽肉雞腸道免疫功能具有增強(qiáng)作用。

A：對(duì)照組回腸HE染色切片圖(21日齡)；B：3 g/kg重組人溶菌酶組回腸HE染色切片圖(21日齡)；C：對(duì)照組空腸HE染色切片圖(50日齡)；D：3 g/kg重組人溶菌酶組空腸HE染色切片圖(50日齡)。所有HE染色切片圖均放大20倍。A: ileum HE staining section of control group (21 days of age); B: ileum HE staining section of 3 g/kg recombinant human lysozyme group (21 days of age); C: jejunum HE staining section of control group (50 days of age); D: jejunum HE staining section of 3 g/kg recombinant human lysozyme group (50 days of age). All HE staining sections were magnified 20 times.圖1 黃羽肉雞空腸和回腸HE染色切片圖Fig.1 HE staining section of jejunum and ileum of yellow-feathered broilers

3.3 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道絨毛是家禽腸道吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特有結(jié)構(gòu)，它的高度和隱窩深度對(duì)腸道的消化吸收能力有最直接的影響[21]。絨毛高時(shí)，成熟細(xì)胞較多，養(yǎng)分吸收能力強(qiáng)；隱窩淺，表明細(xì)胞成熟率增多，分泌功能增強(qiáng)，所以絨隱比越高，腸道的消化吸收能力越強(qiáng)[22]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組和抗生素組對(duì)比，3 g/kg重組人溶菌酶組21日齡黃羽肉雞回腸絨隱比顯著提高，說(shuō)明重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞的腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)有改善作用。本試驗(yàn)結(jié)果與Sindaye等[23]、Humphrey等[24]、Torki等[25]在肉雞上的試驗(yàn)結(jié)果相似，說(shuō)明溶菌酶改善腸道黏膜形態(tài)的效果優(yōu)于抗生素，而溶菌酶對(duì)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的改善作用可能與腸道菌群組成的變化[26]或是促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖分化、加快組織修復(fù)相關(guān)[27]。

3.4 重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)的影響

溶菌酶可以通過(guò)增強(qiáng)腸道中有益菌和抑制致病菌的增殖來(lái)改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，保護(hù)腸道的微生態(tài)平衡[28]。Xu等[29]研究顯示，在母豬飼糧中添加溶菌酶可以顯著降低腸道中放線菌、螺旋體等有害菌的數(shù)量，增加乳酸桿菌的數(shù)量。程時(shí)軍[30]研究報(bào)道，在肉雞飼糧中添加溶菌酶可以顯著降低十二指腸和空腸中梭菌和大腸桿菌數(shù)量。在肉鴨的試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)溶菌酶能夠顯著降低盲腸中大腸桿菌數(shù)量，提高乳酸桿菌數(shù)量，并且該作用優(yōu)于3種抗生素[31]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加適量重組人溶菌酶可以提高黃羽肉雞盲腸中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量，且1和2 g/kg重組人溶菌酶組50日齡黃羽肉雞盲腸中雙歧桿菌和總菌數(shù)量顯著高于抗生素組，說(shuō)明飼糧中添加重組人溶菌酶對(duì)黃羽肉雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)有明顯的改善作用，并且這種作用要優(yōu)于抗生素。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加重組人溶菌酶可促進(jìn)黃羽肉雞的生長(zhǎng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，改善腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)和盲腸菌群組成，并且效果要優(yōu)于抗生素。黃羽肉雞飼糧中重組人溶菌酶的適宜添加水平為1～4 g/kg(10 000～40 000 U/kg)。目前重組人溶菌酶還未收錄在飼料添加劑目錄中，本試驗(yàn)結(jié)果可為重組人溶菌酶在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供重要參考和依據(jù)。