李桂珍，谷 瑤，楊 漓，馬錦林

（廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院 廣西特色經(jīng)濟(jì)林培育與利用重點實驗室，廣西南寧 530002）

油茶又名茶子樹，主要是指山茶屬（Camellia）植物中油脂含量較高且具有栽培經(jīng)濟(jì)價值的一類植物的總稱[1]。我國已發(fā)現(xiàn)的山茶屬植物有238 種，種子含油率較高的有50多種[2]。廣西種植的油茶品種主要為香花油茶（C.osmantha）[3]和岑軟3 號油茶（C.oleifera'Cenruan 3'）。

油茶籽油是從油茶籽中提取的油脂，其脂肪酸組成與橄欖油十分接近，且含有多種活性成分，被認(rèn)為是“品質(zhì)最佳的植物油”和“東方橄欖油”[4]，受到廣大消費者的青睞。油茶籽的品質(zhì)是影響油茶籽油品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一。研究油茶果干燥方式對油茶籽活性成分的影響對實際生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。目前，油茶籽的干燥方式主要有熱風(fēng)干燥、紅外加熱干燥、微波加熱干燥、自然晾曬和堆漚再晾曬等，不同的處理方式對油茶籽品質(zhì)有不同影響[5-10]。王龍祥等[5]以油茶籽為原料，研究微波和紅外處理對壓榨油茶籽油VE中4 種生育酚異構(gòu)體含量的影響，發(fā)現(xiàn)與紅外處理相比，微波處理對α-生育酚影響更大。王亞萍等[6]采用烘干（60 ℃）、曬干、堆漚和陰干的方式處理油茶果，發(fā)現(xiàn)油茶果采后直接曬干處理所得的油茶籽含油率高，油茶籽油品質(zhì)最好，烘干處理次之，二者差異不顯著，但明顯優(yōu)于其他兩種處理方式。這些報道均未針對具體的油茶品種，也未分別對油茶籽仁和籽殼進(jìn)行研究。為更好地反映干燥處理方式對油茶籽油品質(zhì)的影響，提供關(guān)聯(lián)性更密切的依據(jù)，本研究選擇常用、容易實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)的3種干燥方式處理香花油茶和岑軟3 號油茶的油茶果，檢測不同種油茶籽仁和籽殼中主要活性成分茶多酚、角鯊烯和生育酚的含量，以期為油茶籽的精細(xì)化利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

11月下旬，在廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院老虎嶺實驗基地（108°21′E，22°56′N）采集香花油茶和岑軟3號油茶鮮果，均為成熟開裂的果實。

標(biāo)準(zhǔn)品：沒食子酸、角鯊烯和生育酚（α、β、γ 和δ異構(gòu)體）。

分析純試劑：甲醇、正己烷、無水乙醇、1 mol/L福林酚和無水碳酸鈉。

色譜純試劑：甲醇、正己烷、1,4-二氧六環(huán)、叔丁基甲醚和乙腈。

1.2 儀器

UV-2501PC 紫外可見分光光度計（日本島津公司）；PL203電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）（精確至0.000 1 g）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；L530 離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；水循環(huán)真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；HN10-250D 超聲波清洗器（上海漢諾儀器有限公司）；高速萬能粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）。Waters 1525 型液相色譜儀（配紫外檢測器）（Aglient 公司）；C18 色譜柱（柱長250 mm、內(nèi)徑4.6 mm、粒徑5 μm）；Si 60 硅膠柱（柱長250 mm、內(nèi)徑4.6 mm、粒徑5 μm）。

1.3 方法

1.3.1 油茶鮮果干燥處理

采集兩個種的油茶果各30 kg，混勻后各分成3份，采用陰干、曬干和烘干對油茶果進(jìn)行處理。陰干處理為將油茶果均勻鋪在實驗室走廊干凈通風(fēng)處，避免陽光直射，直到掰斷籽仁聲音清脆；曬干處理為將油茶果均勻鋪于托盤中，置陽光下干燥，直到掰斷籽仁聲音清脆；烘干處理為將油茶果均勻鋪在托盤中，50 ～ 55 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱熱烘，直到掰斷籽仁聲音清脆。3 種處理方式的時間一致，同時采收，同時處理，同時檢測。

1.3.2 油茶籽處理

將干燥處理后的油茶籽挑出、剝好，籽殼和籽仁（帶種皮）分開，分別粉碎，過80目篩，待用。

1.3.3 茶多酚提取與測定

采用電子天平分別稱取粉碎好的籽殼和籽仁各2 g，加入10倍70%甲醇水溶液，置于35 ℃超聲波清洗器中超聲提取15 min，取出；在4 000 r/min 下離心10 min，小心倒出上層清液，重復(fù)4 次，合并上層清液，定容至100 mL作為母液。在籽殼中加入1 mL母液，并稀釋至25 mL，待測；在籽仁中加入2 mL 母液，并稀釋至25 mL，待測。

采用福林酚法測定茶多酚含量[11]。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取沒食子酸對照品110 mg，置于50 mL燒杯中，加水溶解，定容至100 mL，搖勻，得到?jīng)]食子酸儲備溶液1 mg/L（現(xiàn)配現(xiàn)用）。精密吸取儲備溶液0、1、2、3、4 和5 mL，分別置于100 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，得到系列濃度對照溶液。精密吸取系列濃度對照溶液各1 mL，分別置于刻度試管中，加入10%福林酚試劑5 mL，搖勻，反應(yīng)3 ～ 8 min，再加入7.5%碳酸鈉溶液4 mL，加水定容至刻度，搖勻，室溫下放置60 min 后測定。以水為空白，在765 nm 處用紫外可見分光光度計測定其吸光度，以濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)，繪制曲線，擬合回歸方程。

1.3.4 角鯊烯提取與測定

采用電子天平分別稱取粉碎好的籽殼和籽仁4.0和1.2 g，加入20倍分析純正己烷，置于35 ℃超聲波清洗器中超聲提取15 min，取出；于4 000 r/min 下離心10 min，小心倒出上層清液，重復(fù)3 次，合并上層清液。35 ℃真空回收籽殼樣品溶劑后，用色譜純正己烷定容至10 mL，過0.22 μm 有機系濾頭，待測；35 ℃真空回收籽仁樣品溶劑后，參照SN/T 4785-2017[13]的方法凈化后，用色譜純正己烷定容至5 mL，過0.22 μm有機系濾頭，待測。

采用高效液相色譜法測定角鯊烯含量[12]。

色譜條件為C18 色譜柱；柱溫40 ℃；流動相為乙腈與叔丁基甲醚的混合物，體積比為乙腈∶叔丁基甲醚= 75∶25；流速1 mL/min；紫外檢測波長210 nm；進(jìn)樣量20 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取角鯊烯對照品25 mg，置于50 mL燒杯中，加入色譜純正己烷溶解，定容至25 mL，搖勻，得到1.0 mg/mL 角鯊烯對照溶液。精密吸取1 mg/mL 對照溶液2.5 mL，加入色譜純正己烷稀釋至25 mL，得到100 μg/mL 角鯊烯對照溶液。精密吸取100 μg/mL 對照溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 和8.0 mL，分別置于10 mL 容量瓶中，加入色譜純正己烷至刻度，搖勻后測定。以濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制曲線，擬合回歸方程。

1.3.5 生育酚提取與測定

采用電子天平分別稱取粉碎好的籽殼和籽仁各10 g，加入5倍分析純正己烷，置于35 ℃超聲波清洗器中超聲提取15 min，取出；于4 000 r/min 下離心10 min，小心倒出上層清液，重復(fù)6 次，合并上層清液。35 ℃真空回收籽殼樣品溶劑后，用流動相（正己烷∶1,4-二氧六環(huán)= 95∶5）定容至5 mL，過0.22 μm 有機系濾頭，待測；35 ℃真空回收籽仁樣品溶劑后，用流動相定容至10 mL，過0.22 μm 有機系濾頭，待測。

采用正相高效液相色譜法測定生育酚含量[13]。

色譜條件為Si 60 硅膠柱；柱溫30 ℃；流動相為正己烷與1,4-二氧六環(huán)的混合物，體積比為正己烷∶1,4-二氧六環(huán)=95∶5；流速1 mL/min；紫外檢測波長294 nm；進(jìn)樣量20 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取生育酚各異構(gòu)體對照品25 mg，分別置于50 mL 燒杯中，加入無水乙醇溶解，定容至25 mL，搖勻，得到1 mg/mL生育酚對照溶液；精密吸取1 mg/mL 對照溶液各2 mL，置于50 mL梨形瓶中，35 ℃下真空旋至2 mL左右，取下，用氮氣吹干，用流動相定容至25 mL，得到80 μg/mL生育酚對照溶液。精密吸取80 μg/mL 對照溶液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加入流動相至刻度，搖勻后測定。以濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制曲線，擬合回歸方程。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010軟件處理數(shù)據(jù)及擬合回歸方程。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同干燥方式對油茶籽中茶多酚含量的影響

茶多酚同時存在于籽仁和籽殼中，籽殼中的含量高于籽仁（表1）。不同干燥方式下，香花油茶籽殼中的茶多酚含量均為籽仁的兩倍以上，岑軟3號油茶籽殼中的茶多酚含量均接近籽仁的兩倍；香花油茶籽仁和籽殼中的茶多酚含量均高于岑軟3號油茶。

表1 不同干燥方式對籽殼和籽仁中茶多酚含量的影響Tab.1 Effects of different drying methods on contents of tea polyphenols in seed shells and seed kernels(mg/g)

干燥方式對油茶籽中的茶多酚含量有一定影響。陰干條件下，香花油茶和岑軟3 號油茶籽仁和籽殼中的茶多酚含量均最高；與常規(guī)曬干方式相比，香花油茶籽仁中的茶多酚含量高出4.01%，香花油茶籽殼高出13.87%，岑軟3 號油茶籽仁高出12.70%，岑軟3 號油茶籽殼高出21.40%。烘干條件下，香花油茶和岑軟3 號油茶籽仁和籽殼中的茶多酚含量均最低；與常規(guī)曬干方式相比，香花油茶籽仁中的茶多酚含量降低22.88%，香花油茶籽殼降低14.61%，岑軟3 號油茶籽仁降低6.30%，岑軟3 號油茶籽殼降低1.84%。陰干、曬干和烘干條件下，茶多酚含量均表現(xiàn)為陰干>曬干>烘干，這可能與干燥溫度有關(guān)。烘干的溫度較高，加速茶多酚氧化。

2.2 不同干燥方式對油茶籽中角鯊烯含量的影響

角鯊烯主要存在于籽仁中；香花油茶籽仁中的角鯊烯含量高于岑軟3 號油茶籽仁；不同干燥方式下，香花油茶籽仁中的角鯊烯含量為岑軟3 號油茶籽仁的1.92～2.38倍（表2）。烘干條件下，香花油茶籽仁和岑軟3 號油茶籽仁中的角鯊烯含量均最高，分別比常規(guī)曬干方式高出79.50%和45.18%；陰干條件下，香花油茶籽仁和岑軟3 號油茶籽仁中的角鯊烯含量均最低，分別比常規(guī)曬干方式降低7.34%和25.12%。低溫烘干更有利于油茶籽仁中角鯊烯的保留，這與角鯊烯在空氣中容易氧化的性質(zhì)有關(guān)；烘干在相對密閉的烘箱中進(jìn)行，過程中，空間充滿水汽，可減少與氧氣的接觸。

表2 不同干燥方式對籽殼和籽仁中角鯊烯含量的影響Tab.2 Effects of different drying methods on contents of squalene in seed shells and seed kernels(μg/g)

2.3 不同干燥方式對油茶籽中生育酚含量的影響

香花油茶和岑軟3 號油茶籽含有的生育酚有α-生育酚、β-生育酚和γ-生育酚，主要存在于籽仁中（表3）。籽仁中，α-生育酚在總生育酚中的占比高于其他異構(gòu)體，超過80%。從生育酚總量看，香花油茶籽仁中的含量低于岑軟3 號油茶籽仁，香花油茶籽殼中的含量與岑軟3 號油茶籽殼差別不大。不同干燥方式對生育酚的影響主要在于α-生育酚含量的差異。α-生育酚含量在香花油茶和岑軟3號油茶籽仁中均表現(xiàn)為陰干和烘干差別不大，兩者略高于曬干，可能是因為生育酚對紫外光較敏感，在太陽光作用下更容易氧化。

表3 不同干燥方式對籽殼和籽仁中生育酚含量的影響Tab.3 Effects of different drying methods on contents of tocopherol in seed shells and seed kernels(μg/g)

3 討論與結(jié)論

干燥方式是影響油茶籽品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一。本研究分析陰干、曬干和烘干3 種干燥方式對油茶籽仁和籽殼中活性成分的影響，發(fā)現(xiàn)茶多酚同時存在于籽仁和籽殼中，籽殼中的含量較高；角鯊烯和生育酚主要存在于籽仁中。與岑軟3 號油茶相比，香花油茶籽中的茶多酚和角鯊烯含量均較高，生育酚含量較低。陰干、曬干和烘干3 種干燥方式對茶多酚、角鯊烯和生育酚的影響不同；茶多酚和生育酚含量均在陰干條件下保留較多，角鯊烯則在低溫烘干條件下保留較多。王亞萍等[6]研究中，曬干處理下，油茶籽油中的角鯊烯和生育酚含量較高，烘干處理次之，與本研究結(jié)果有差異，可能與果實采摘時間有關(guān)。王亞萍等[7]和羅凡等[10]的研究結(jié)果均顯示，油茶籽油中各物質(zhì)的含量除與干燥處理方式有關(guān)外，與茶果采收時間也密切相關(guān)。在探討干燥處理方式對油茶籽活性成分的影響時，還需關(guān)注油茶果采收時間。

茶多酚、角鯊烯和生育酚是油茶籽中主要的活性成分，具有較強的生物活性。茶多酚能有效清除自由基，阻止膜脂過氧化作用，且抑菌譜較廣，具有護(hù)肝益腎、調(diào)節(jié)血脂、血糖和血壓、抗輻射及抗腫瘤等功效，還有助于減肥和美容健膚[14-17]。角鯊烯可幫助皮膚抵抗紫外照射和其他氧化反應(yīng)導(dǎo)致的損傷，有潤膚和保濕的作用[18-19]。生育酚可用于治療口腔潰瘍，可軟化疤痕和促進(jìn)傷口愈合[20-21]。針對這些特殊用途，可采取陰干方式處理油茶籽殼，作為提取茶多酚的原料；可采取烘干方式處理香花油茶籽仁，獲得角鯊烯含量更高的茶籽油，開發(fā)具有功能性的天然化妝品；可采取陰干方式處理岑軟3 號油茶籽仁，獲得生育酚含量更高的茶籽油，開發(fā)醫(yī)用級產(chǎn)品。