鄭佩芹，周海梅，王曉剛

［山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校附屬醫(yī)院（臨沂市老年病醫(yī)院）1.婦產(chǎn)科；2.內(nèi)分泌科，山東 臨沂276004］

目前，宮頸癌仍然是世界范圍內(nèi)的主要健康問(wèn)題。美國(guó)的一項(xiàng)調(diào)查表面，宮頸癌仍然是20 至39 歲女性癌癥死亡的第二大原因，在美國(guó)，該年齡組每周有9 人死亡［1-2］。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）提供的數(shù)據(jù)，全世界每年約有50 萬(wàn)女性患上宮頸癌，占女性所有惡性疾病12%。每?jī)煞昼娋陀幸幻运烙趯m頸癌，對(duì)于這些女性中的230 000 人來(lái)說(shuō)，這種疾病多是晚期。根據(jù)2015 年的數(shù)據(jù)，在歐洲，有12～30/100 000 名女性受到宮頸癌的影響。欠發(fā)達(dá)國(guó)家的頻率較高，而由于早期的篩查，大多數(shù)高度發(fā)達(dá)國(guó)家宮頸癌發(fā)生率正在下降。宮頸癌的發(fā)病率在女性惡性疾病中排在第二位，僅次于乳腺癌。99.7%的宮頸癌患者被檢出人乳頭瘤病毒（HPV）感染。持續(xù)性HPV 感染可能會(huì)顯著增加宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）進(jìn)展為宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)［3］。至此，宮頸癌成為世界上唯一病因明確的婦科惡性腫瘤。

高危人乳頭瘤病毒（HR-HPV）被稱(chēng)為宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素，可能誘發(fā)癌前病變。HPV 本身也可以調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)，從而影響病變從原位癌發(fā)展到宮頸癌，宮頸癌患者中觀(guān)察到HPV 相關(guān)病變的免疫反應(yīng)的下調(diào)。盡管如此，單獨(dú)的HR-HPV 感染不足以誘導(dǎo)宮頸癌的發(fā)展。事實(shí)上，絕大多數(shù)感染HR-HPV 的女性從未發(fā)展為宮頸癌，因?yàn)樽銐虻拿庖叻磻?yīng)可以控制感染并防止任何癌前病變的誘導(dǎo)形成［4］。

越來(lái)越多的證據(jù)表明宿主炎癥反應(yīng)在癌癥的發(fā)展和進(jìn)展中起著重要作用。癌癥不僅與病變部位的炎癥有關(guān)，還與整體全身免疫反應(yīng)有關(guān)［5］，減少炎癥可有效治療和預(yù)防多種癌癥類(lèi)型的進(jìn)展。為了更好地了解炎癥在宮頸癌中的作用，本研究評(píng)估了宮頸癌前病變及宮頸癌患者的炎癥標(biāo)志物的血清水平，并與健康對(duì)照者進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年9 月至2021 年9 月山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的162 名患者作為研究對(duì)象。其中60 名非宮頸疾病患者作為對(duì)照組，年齡40～72歲，平均（54.33±4.23）歲；50 名組織學(xué)診斷為宮頸癌前病變患者為癌前病變組，年齡43～71歲，平均（55.22±3.34）歲；52 名組織學(xué)診斷為宮頸癌患者為宮頸癌組，年齡45～70歲，平均（59.91±1.13）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后病理學(xué)檢查確診為宮頸癌前病變或?qū)m頸癌［6］；②年齡＞18 歲；③經(jīng)檢查無(wú)嚴(yán)重內(nèi)科或外科疾病。④獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所有受試者均簽署書(shū)面同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有自身免疫性疾病、活動(dòng)性或慢性感染、心血管疾病、結(jié)締組織疾??；②有惡性腫瘤病史；③懷孕和/或＜18 歲的女性；④之前接受過(guò)免疫抑制治療、放療和/或化療的任何受試者。

1.2 HPV 檢測(cè)和基因分型

宮頸上皮組織樣本（來(lái)自宮頸癌前病變、宮頸癌患者的活檢，對(duì)照組患者的液基宮頸樣本）用于基因組DNA 分離和HPV 狀態(tài)確定。使用基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的多重HPV 基因分型試劑盒檢測(cè)、區(qū)分HPV 24 種基因型。

1.3 血清細(xì)胞因子的定量檢測(cè)

在手術(shù)和癌癥治療之前，每個(gè)研究患者抽取靜脈血樣本。每個(gè)血樣分離血清并儲(chǔ)存在-80°C直至用于分析。使用商業(yè)ELISA 試劑盒（上海碧云天生物科技有限公司）測(cè)定干擾素-β（IFN-β）、干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）含量。

1.4 蛋白電泳檢測(cè)髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1（TREM-1）、腫瘤壞死因-α（TNF-α）水平

宮頸上皮組織樣本剪切成細(xì)小的碎片，取40 mg 組織，加入500 μL 裂解液，15 000 g 離心5 min，取上清液以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)，計(jì)算樣品蛋白濃度，配膠、電泳、轉(zhuǎn)膜、孵育一抗二抗、化學(xué)發(fā)光及凝膠圖像分析。

1.5 觀(guān)察指標(biāo)

收集患者一般資料包括年齡進(jìn)行組間分析。使用基于PCR 的多重HPV 基因分型試劑盒（寧波海爾施基因科技有限公司，批號(hào)：2021010201178）檢測(cè)、區(qū)分HPV 24 種基因型，統(tǒng)計(jì)HPV 陽(yáng)性率并進(jìn)行組間比較。使用商業(yè)ELISA 試劑盒測(cè)定IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6 含量并分析差異。使用凝膠成像分析系統(tǒng)測(cè)定TREM-1、TNF-α蛋白表達(dá)水平并進(jìn)行分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）來(lái)表示，采用單因素方差分析（One way ANOVA），方差齊時(shí)用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用Dunnett'st檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HPV 感染率水平比較

與對(duì)照組比較，宮頸癌前病變組及宮頸癌組HPV 感染率水平明顯升高；宮頸癌組HPV 感染率明顯高于宮頸癌前病變組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F/χ2=60.249,P=0.000），見(jiàn)表1。

表1 各組HPV 感染率水平比較（）

表1 各組HPV 感染率水平比較（）

2.2 各組炎癥因子數(shù)據(jù)比較

與對(duì)照組比較，宮頸癌前病變組及宮頸癌組IFN-β、IL-1β 水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），宮頸癌前病變組及宮頸癌組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組炎癥因子數(shù)據(jù)比較（,pg/mL）

表2 各組炎癥因子數(shù)據(jù)比較（,pg/mL）

注：?與對(duì)照組比較，P＜0.05。

2.3 各組TREM-1、TNF-α 蛋白表達(dá)水平比較

對(duì)照組比較，宮頸癌前病變組及宮頸癌組TREM-1、TNF-α 蛋白明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），宮頸癌前病變組及宮頸癌組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖1、表3。

圖1 TREM-1、TNF-α 蛋白表達(dá)

表3 各組TREM-1、TNF-α 蛋白比較（）

表3 各組TREM-1、TNF-α 蛋白比較（）

注：?與對(duì)照組比較，P＜0.05。

3 討論

本研究揭示了宮頸癌患者存在全身炎癥，即與對(duì)照相比，宮頸癌患者HPV 感染率、IFN-β、IL-1β、TREM-1 和TNF-α 水平顯著更高。

HPV 疫苗接種可預(yù)防致癌感染和癌前病變。然而，中國(guó)的疫苗接種和篩查覆蓋率仍然很低。有證據(jù)表明，從宮頸癌前病變發(fā)展為宮頸癌需要數(shù)年甚至數(shù)十年的時(shí)間。因此，對(duì)宮頸癌前病變做出良好和準(zhǔn)確的診斷并防止其惡化是一項(xiàng)持續(xù)的醫(yī)學(xué)研究。已發(fā)現(xiàn)HPV 感染對(duì)宮頸癌的發(fā)病率有顯著影響，是最常見(jiàn)的性傳播感染，而其他途徑包括母嬰傳播和胃腸道感染。

HPV 的基因組包含8 000 個(gè)堿基對(duì)的雙鏈環(huán)狀DNA。迄今為止，已鑒定出100 多種HPV。它們分為兩類(lèi)：高危型HPV 和低危型HPV。此外，80%的女性在一生中都感染了HPV，然而，大約90%的感染會(huì)消失［7］。HPV 基因型的流行與不同的種族、地區(qū)和習(xí)俗有關(guān)［8］。雖然大多數(shù)HPV 感染已被證明會(huì)在幾個(gè)月或幾年內(nèi)清除，仍有5%～10%的持續(xù)感染女性CIN 及宮頸癌癥發(fā)病率增加。幾項(xiàng)研究表明，單一HPV 感染占主導(dǎo)地位，而多種HPV 感染在大量人群中普遍存在［9-10］。研究人員對(duì)多發(fā)HPV 感染與宮頸病變的關(guān)系有不同看法。一項(xiàng)研究表明，多重HPV 感染是一種普遍現(xiàn)象，并不會(huì)增加CIN 進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。此外，由于競(jìng)爭(zhēng)，它們可能會(huì)引起更有效的免疫反應(yīng)，從而降低高級(jí)別CIN 的發(fā)生率［11］。其他研究表明，多種HPV 感染對(duì)宮頸癌的發(fā)展具有協(xié)同作用。與單一HPV 感染相比，CIN1 有多重HPV 感染的患者發(fā)展為CIN2 的風(fēng)險(xiǎn)更高［12-13］。

細(xì)胞因子已被證明與大多數(shù)腫瘤組織有關(guān)，并且可能在細(xì)胞轉(zhuǎn)化、癌細(xì)胞增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。一些細(xì)胞因子（例如LCN2、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α 等）的表達(dá)失調(diào)與宮頸癌前病變的發(fā)生率之間存在顯著關(guān)系［14-16］。這些事件之間的潛在聯(lián)系是基于這樣一個(gè)事實(shí)，即免疫刺激性T 輔助細(xì)胞因子如TNF-α、IFN-γ、IL-2 和IL-12 可以誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫和腫瘤抑制，它們還可以在宿主中具有促炎作用。相反，抑制性細(xì)胞因子（例如IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10）降低細(xì)胞介導(dǎo)的免疫并同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫。因此，上述事實(shí)表明，癌癥過(guò)程中細(xì)胞因子相關(guān)的免疫反應(yīng)是復(fù)雜和異質(zhì)的。另外一種情況，有研究報(bào)告［17］了在偶發(fā)和持續(xù)性HPV 感染的宿主中全身細(xì)胞因子水平顯著降低。但更重要的是，IFN-β 和IL-1β 在宿主免疫反應(yīng)中具有多種作用；因此，關(guān)于他們?cè)趯m頸癌中的實(shí)際變化和角色（如果有）的問(wèn)題仍有待澄清。

TREM-1 是2000 年發(fā)現(xiàn)的一種新型生物標(biāo)志物。它是一種免疫球蛋白家族成員，存在于中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面。研究發(fā)現(xiàn)TREM-1 激活炎癥反應(yīng)、炎癥介質(zhì)的合成和抗炎介質(zhì)的抑制，TREM-1 能夠通過(guò)Toll 樣受體（TLR）合成促炎細(xì)胞因子，并調(diào)節(jié)先天炎癥反應(yīng)增強(qiáng)TLR 介導(dǎo)的信號(hào)通路［18-19］。因此，TREM-1水平升高與宮頸癌患者全身炎癥存在一致。TREM-1 的表達(dá)被描述為在各種腫瘤模型中促進(jìn)腫瘤發(fā)生并支持腫瘤生長(zhǎng)，包括腸癌和肺癌［20］。在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者中，TREM-1 的表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)和低生存率相關(guān)。這些NSCLC 患者的血液?jiǎn)魏思?xì)胞與肺癌細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致單核細(xì)胞中TREM-1 上調(diào)，并且在同一研究中，shRNA 抑制TREM-1 表達(dá)與肺癌細(xì)胞侵襲性降低有關(guān)［21］。

TNF-α 是一種多功能細(xì)胞因子，通過(guò)兩種受體發(fā)揮作用，參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞存活、炎癥和免疫。TNF-α 是一種17-kDa 的蛋白質(zhì)，由157 個(gè)氨基酸組成。在人類(lèi)中，該基因被映射到第6 號(hào)染色體。其生物活性主要受可溶性TNF-α 結(jié)合受體的調(diào)節(jié)。TNF-α 主要由活化的巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞產(chǎn)生。TNF-α 在多種其他細(xì)胞中低表達(dá)，包括成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。在細(xì)胞中，TNF-α 被合成為前TNF（26 kDa），它是膜結(jié)合的，并在其前結(jié)構(gòu)域被TNF 轉(zhuǎn)換酶（TACE）切割后釋放。TNF-α 有助于感染期間的炎癥和清除感染后的抗炎/組織修復(fù)過(guò)程。其在低表達(dá)水平下的作用有助于腫瘤發(fā)生。暴露于炎癥刺激后，TNF-α 以及IL-1 和其他趨化因子主要由活化的巨噬細(xì)胞和其他髓系細(xì)胞產(chǎn)生，這些細(xì)胞將嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞吸引并激活到腫瘤部位。在腫瘤中，腫瘤細(xì)胞上的TNF-α 主要與TNF-R2 相互作用，通過(guò)產(chǎn)生活性氧中間體和通過(guò)神經(jīng)酰胺發(fā)出信號(hào)來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的清除。因此，膜形式的瘤內(nèi)保存（具有較低的瘤內(nèi)TACE活性）與更好的預(yù)后相關(guān)。TNF-α 的抗腫瘤作用已通過(guò)血管破壞和腫瘤壞死對(duì)原發(fā)性腫瘤產(chǎn)生顯著的抗癌作用得到證實(shí)?；罨木奘杉?xì)胞主要分泌TNF-α，這有助于解釋為什么在發(fā)燒、敗血癥、癌癥、阿爾茨海默病和腸易激綜合征期間TNF-α的循環(huán)水平會(huì)增加。在目前的研究中，與對(duì)照相比，宮頸癌患者的全身TNF-α 水平顯著上調(diào)，該結(jié)果與以往宮頸癌與TNF-α 關(guān)系的研究結(jié)果相一致［22-24］。但是宮頸癌患者體內(nèi)TNF-α 升高的具體原因及TNF-α 對(duì)宮頸癌組織的作用還需要進(jìn)一步研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)在宮頸癌患者中血清IFN-β、IL-1β 增加，宮頸上皮組織TREM-1 和TNF-α 表達(dá)增加，這表明它們?cè)趯m頸癌的病理生理學(xué)中具有一些重要作用。觀(guān)察到的表達(dá)變化很可能與宮頸癌相關(guān)，并支持全身炎癥參與宮頸癌的假設(shè)。然而，需要更多的研究來(lái)闡明這些細(xì)胞因子改變?cè)趯m頸癌的發(fā)生、發(fā)展中的具體機(jī)制。