黃蘭珍，廖倩榕，梅世偉，譚周飛

（1.廣東省婦幼保健院，廣東 廣州 510000；2.珠海市婦幼保健院，廣東 珠海 519000；3.東莞市國(guó)藥質(zhì)量檢測(cè)中心，廣東 東莞 523010）

廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分。百秋李醇為廣藿香總揮發(fā)油的主要有效成分之一，別稱“白秋李醇、虎尾草醇、廣藿香醇”。2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》[1]一部廣藿香藥材含量測(cè)定項(xiàng)下檢測(cè)的物質(zhì)成分為百秋李醇，其中測(cè)定法描述為：“取本品粗粉約3 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過(guò)，合并濾液，回收溶劑至干，殘?jiān)诱和槭谷芙狻??！盎厥杖軇┲粮伞睂?shí)驗(yàn)室常用方法為水浴回收溶劑。筆者查閱廣藿香中百秋李醇含量測(cè)定相關(guān)的文獻(xiàn)[2-5]，發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)未見具體相關(guān)內(nèi)容報(bào)道。日常檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不同的水浴溫度對(duì)百秋李醇的含量測(cè)定有一定的影響，當(dāng)溫度過(guò)高時(shí)，甚至?xí)拱偾锢畲紲y(cè)得含量為0。溶劑三氯甲烷性質(zhì)為質(zhì)重，易揮發(fā)，沸點(diǎn)61～62℃。百秋李醇[6-9]為廣藿香揮發(fā)油中的成分，其沸點(diǎn)為287.4℃，熔點(diǎn)為56℃，百秋李醇在溶劑回收溫度下處于液體狀態(tài)。本研究采用5種水浴溫度6種不同處理方法研究不同水浴溫度對(duì)廣藿香中百秋李醇含量測(cè)定的影響，旨在為廣藿香中百秋李醇含量測(cè)定提供科學(xué)的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器Agilent GC7890B型氣相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；CPA225D型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；CP224S型萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；HH-ZK4型雙孔四列智能水浴鍋（上海一凱儀器設(shè)備有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料廣藿香飲片（批號(hào)：20190325）購(gòu)于東莞國(guó)藥集團(tuán)中藥飲片有限公司，經(jīng)東莞市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室朱壽光主任鑒定為唇形科植物廣蕾香Pogostemon cablin(Blanco)Benth的干燥地上部分；百秋李醇對(duì)照品（批號(hào)：110112-201602，純度：99.8%）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；三氯甲烷、正己烷均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件HP-5毛細(xì)管柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度為150℃，保持23 min，以每分鐘8℃的速率升溫至230℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度為280℃，檢測(cè)器溫度為280℃；分流比為20∶1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備取百秋李醇對(duì)照品15 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得百秋李醇對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備取廣藿香粗粉45 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷200 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過(guò)，合并濾液。將濾液轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶，加入三氯甲烷定容。分別取適量樣品溶液，在不同水浴溫度下回收溶劑至干，回收方法見表1。

表1 試驗(yàn)用樣品溶劑的回收至干方法

以上樣品加入正己烷至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)精密吸取“2.2”項(xiàng)下的百秋李醇對(duì)照品溶液、“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液和空白溶劑各1 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示百秋里醇峰與其他組分峰能基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)按百秋里醇峰計(jì)不低于50 000。（見圖1～3）

圖1 百秋李醇對(duì)照品溶液氣相色譜圖

圖2 空白溶劑氣相色譜圖

圖3 供試品溶液氣相色譜圖

2.5 樣品的含量測(cè)定6份樣品在不同水浴溫度重復(fù)性處理樣品的RSD值均小于5%，表明并無(wú)明顯操作失誤，本方法重復(fù)性良好。不同水浴溫度處理的各樣品間進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)60℃水浴回收溶劑后，立即將殘?jiān)M(jìn)行溶解和定容的樣品中百秋李醇含量測(cè)定結(jié)果最高，為0.629 4 mg/mL；100℃水浴回收溶劑后，繼續(xù)蒸1 h將殘?jiān)M(jìn)行溶解、定容，測(cè)得的百秋李醇含量最低，為0。在60℃～100℃的水浴溫度梯度條件下，隨著溫度的升高測(cè)得百秋李醇含量值依次降低，6個(gè)樣品含量測(cè)定結(jié)果的排序?yàn)棰伲劲冢劲郏劲埽劲荩劲?。（見?、圖4）

表2 各樣品中百秋李醇含量（mg/mL）

圖4 不同水浴溫度各樣品氣相色譜圖

3 討 論

3.1 廣藿香中百秋里醇含量測(cè)定方法探討2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部中廣藿香含量測(cè)定方法項(xiàng)下的描述為：“取本品粗粉約3 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過(guò)，合并濾液，回收溶劑至干，殘?jiān)诱和槭谷芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，加正己烷至刻度，搖勻，吸取1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得?！盵1]“回收溶劑至干”的具體方法并無(wú)詳細(xì)說(shuō)明。常用方法之一為水浴加熱回收溶劑，水浴溫度的具體設(shè)置，尚未見國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道。氣相色譜法適用于具有揮發(fā)性的物質(zhì)成分，筆者查閱和對(duì)比《中華人民共和國(guó)藥典》中所有使用氣相色譜法測(cè)定含量的藥材，僅發(fā)現(xiàn)廣藿香是溶劑提取后回收溶劑再轉(zhuǎn)溶的，常規(guī)藥材都是溶劑提取定容后直接進(jìn)行測(cè)定。該提取方式可避免回收溶劑和轉(zhuǎn)溶時(shí)揮發(fā)性成分的損失，是否廣藿香的提取也可以采用此種方式有待后續(xù)進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

3.2 方法學(xué)未考察和內(nèi)標(biāo)物未選擇依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》中百秋里醇的氣相色譜法是采用正己烷作為內(nèi)標(biāo)溶液。內(nèi)標(biāo)法[10-12]是一種相對(duì)的校準(zhǔn)方法。在分析測(cè)定樣品某組分的含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除由于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。該法是基于氣相色譜精密度較低，樣品的峰面積可能受到進(jìn)樣技術(shù)或儀器或外界溫度的干擾，而引起峰面積變化，引用內(nèi)標(biāo)的做法以消除這些影響。本試驗(yàn)所用的氣相色譜儀精密度更高，采用自動(dòng)進(jìn)樣裝置，消除儀器和操作產(chǎn)生的波動(dòng)。本研究主要是考察溶劑回收時(shí)水浴溫度對(duì)百秋里醇含量的影響，側(cè)重樣品的均一性和試驗(yàn)操作條件的平行性，因此沒(méi)有采用正己烷作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，也沒(méi)有進(jìn)行方法學(xué)中的加樣回收率等含量測(cè)定方法學(xué)的考察研究[13-16]。

3.3 水浴溫度設(shè)置和樣品制備本試驗(yàn)根據(jù)三氯甲烷的沸點(diǎn)為61～62℃，分別設(shè)置了60、70、80、90、100℃水浴溫度和100℃水浴回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h的條件。為了保證各試驗(yàn)樣品的一致性和均勻性，本試驗(yàn)按《中華人民共和國(guó)藥典》中樣品溶液的制備方法，制備一份大體積的樣品溶液，在60～100℃的水浴溫度梯度條件下，每個(gè)溫度取相同體積的6份樣品，每份樣品按規(guī)定的要求進(jìn)行處理。根據(jù)樣品檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，100℃回收溶劑之后繼續(xù)蒸1 h會(huì)使百秋李醇繼續(xù)蒸發(fā)損失，同時(shí)受樣品的總體積的限制，因此100℃回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h樣品制備3份（共制備6份33個(gè)樣品）。同時(shí)三氯甲烷在室溫條件下會(huì)自然蒸發(fā)，但時(shí)間較長(zhǎng)，并不符合實(shí)際操作，因此未考慮此項(xiàng)操作條件。

3.4 溫度對(duì)廣藿香中百秋里醇含量測(cè)定的影響本試驗(yàn)利用氣相色譜法，測(cè)定不同水浴溫度條件對(duì)廣藿香中百秋李醇含量測(cè)定的影響?！氨?各樣品百秋李醇含量”的數(shù)據(jù)顯示，樣品中百秋李醇的含量隨水浴溫度的升高而降低，100℃水浴樣品含量與60℃樣品比較，含量降低50%左右，100℃回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h處理的樣品，廣藿香中百秋李醇含量測(cè)定的結(jié)果為0，同樣表明百秋李醇在高溫條件下易揮發(fā)。有研究[17-20]探討了不同干燥方法和不同光照強(qiáng)度對(duì)廣藿香中百秋李醇含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陰干法樣品含量最高，烘干法樣品含量較陰干法低，傳統(tǒng)干燥法樣品含量最低，陰干法在廣藿香的產(chǎn)地加工時(shí)為首選；光照強(qiáng)度越低，百秋李醇的含量越高，也同樣證明了溫度對(duì)廣藿香中百秋李醇的含量有較大的影響，與本試驗(yàn)研究取得較為一致的結(jié)果。百秋李醇熔點(diǎn)56℃，在水浴溫度條件下為液體狀態(tài)。隨著溫度升高，百秋李醇蒸發(fā)越多。本研究結(jié)果表明，廣藿香含量測(cè)定法中“回收溶劑至干”水浴溫度設(shè)置為60℃，回收溶劑后應(yīng)立即取出，可以減少百秋李醇的損失。