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        復(fù)方鉤藤降壓解郁方對(duì)高血壓并發(fā)抑郁癥大鼠的藥效作用及物質(zhì)基礎(chǔ)*

        2022-11-07 04:23:06陳春茗劉葉倩趙紅霞任衛(wèi)瓊
        中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2022年7期
        關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)

        陳春茗,劉葉倩,陳 蕾,趙紅霞,李 弘,任衛(wèi)瓊

        (1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410007;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長(zhǎng)沙 410208;3.安徽省第二人民醫(yī)院,安徽 合肥 230041)

        復(fù)方鉤藤降壓解郁方是以經(jīng)典方“天麻鉤藤飲”為基礎(chǔ)方化裁而成,由鉤藤、天麻、川芎、地龍、杜仲、桑寄生、丹參、白芍、貫葉連翹、葛根10味中藥組成,具有養(yǎng)陰平肝、化瘀解郁的作用,可用于高血壓并發(fā)抑郁癥的治療,但其藥效和活性成分缺乏系統(tǒng)研究。超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS)技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、全面的特點(diǎn),近年來(lái)廣泛用于中藥復(fù)方化學(xué)成分的分析。本研究從藥理學(xué)和藥物分析學(xué)兩個(gè)角度研究復(fù)方鉤藤降壓解郁方,綜合分析了此方的主要化學(xué)成分并揭示了其藥效作用,以期為后續(xù)復(fù)方鉤藤降壓解郁方的二次開發(fā)和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

        1 材 料

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡SPF級(jí)雄性SHR大鼠20只,體質(zhì)量180~220 g,收縮壓180~200 mmHg(1 mm Hg=0.133 kPa),購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,質(zhì)量合格證編號(hào):1100112 11113502636,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2021-0006。8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠10只,體質(zhì)量180~220 g,購(gòu)自湖南安生美藥物研究院有限公司,質(zhì)量合格證編號(hào):430727211102773234,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(湘)2019-0004。以上大鼠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房中,飼養(yǎng)條件:溫度20~25℃,濕度40%~70%,12 h明暗交替,適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(湘)2020-0010。倫理委員會(huì)審批號(hào):2YFY20210316-01。

        1.2 藥物與試劑復(fù)方鉤藤降壓解郁方購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,由鉤藤、天麻、川芎、地龍、杜仲、桑寄生、丹參、白芍、貫葉連翹、葛根10味中藥組成,藥材經(jīng)該院張?jiān)C裰魅沃兴帋熻b定均符合2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》的質(zhì)量要求。異鉤藤堿對(duì)照品(批號(hào):111927-201804,純度>98%)、鉤藤堿對(duì)照品(批號(hào):112028-201601,純度>98%)均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品(批號(hào):20200419,純度>98%)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào):107D021,純度>98%)均購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司;葛根素對(duì)照品(批號(hào):21090805,純度>98%)、隱丹參酮對(duì)照品(批號(hào):21091603,純度>98%)、洋川芎內(nèi)酯A對(duì)照品(批號(hào):21080506,純度>98%)均購(gòu)于成都普菲德生物技術(shù)有限公司;色譜甲醇、質(zhì)譜乙腈均購(gòu)于德國(guó)Merck Millipore公司;蒸餾水購(gòu)于深圳屈臣氏蒸餾水有限公司;甲酸銨(質(zhì)譜級(jí))購(gòu)于美國(guó)Fisher公司。

        1.3 主要儀器YLS-9A型生理、藥理電子刺激儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司);BP-98A型智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)(北京軟隆生物技術(shù)有限公司);MK3型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo-fisher公司);Agilent 1290UPLC-6540 Q-TOF色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司);超聲儀(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);S-23型高速臺(tái)式離心機(jī)(湖南湘儀儀器有限公司);AUW120D電子分析天平(日本SHIMADZU公司)。

        2 方 法

        2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

        2.1.1 藥液的制備 將復(fù)方鉤藤降壓解郁方16劑(94 g/劑)藥物(除鉤藤外)置于煎藥器中,浸泡30 min,加水煎煮1 h,鉤藤后下,第2次加水煎煮40 min,合并藥液后過(guò)濾,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成復(fù)方鉤藤降壓解郁方干膏289.6 g。將復(fù)方鉤藤降壓解郁方干膏用蒸餾水溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為0.846 g/mL藥液,冷藏備用。

        2.1.2 造模與分組 造模方法按照前期研究建立的方法[1],將20只SHR大鼠,按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、復(fù)方鉤藤降壓解郁方組,每組10只。10只SD大鼠為正常對(duì)照組。除正常對(duì)照組外,其余兩組大鼠每天進(jìn)行不可預(yù)知慢性應(yīng)激刺激:(1)噪聲4 h;(2)禁水24 h;(3)禁食24 h;(4)晝夜顛倒24 h;(5)潮濕墊料24 h;(6)4℃冰水浴4 min;(7)傾籠45° 24 h;(8)夾尾1 min。每種刺激方法每天隨機(jī)抽取進(jìn)行干預(yù),方法(6)、(8)每周1次,且1周內(nèi)的干預(yù)方法不重復(fù)。

        2.1.3 實(shí)驗(yàn)給藥 根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》[2],按體表面積折算大鼠的等效給藥劑量,大鼠每日用藥量為8.46 g/kg,正常對(duì)照組和模型組大鼠給予等體積蒸餾水,1次/d,連續(xù)給藥28 d。

        2.1.4 觀察指標(biāo)

        2.1.4.1 各組大鼠血壓變化情況 用BP-98A智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)在給藥前和給藥后第1、2、3、4周分別測(cè)量各組大鼠血壓值(給藥后1 h尾動(dòng)脈收縮壓的平均值即為該只大鼠所在周的血壓值)。

        2.1.4.2 行為學(xué)檢測(cè) 通過(guò)Open-field實(shí)驗(yàn)、新奇攝食實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)觀察各組大鼠抑郁行為、認(rèn)知功能等的變化。

        Open-field實(shí)驗(yàn)是在弱光和低噪聲環(huán)境下,將大鼠單獨(dú)置于黑色正方形曠場(chǎng)中央,曠場(chǎng)裝置是100 cm×100 cm×40 cm的木制箱,內(nèi)側(cè)面及底部均為黑色,底部漆成橫豎各3條白線。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間為5 min,將小鼠放入中心方格內(nèi),攝像記錄大鼠5 min內(nèi)穿越格數(shù)(水平運(yùn)動(dòng))和前肢離地成攀壁的直立次數(shù)(垂直運(yùn)動(dòng)),直立計(jì)數(shù)要求雙腳抬起。水平運(yùn)動(dòng)1格計(jì)1分,直立1次計(jì)1分。每只大鼠接受1次測(cè)試,測(cè)試完畢后撿拾糞便,用75%的醫(yī)用酒精噴灑曠場(chǎng)底部及內(nèi)側(cè)壁,用干毛巾擦拭,待其揮發(fā)后進(jìn)行下一只的操作,以避免上只實(shí)驗(yàn)大鼠留有氣味而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

        新奇攝食實(shí)驗(yàn)是使用頂部開放的白色不透明樹脂測(cè)試箱,底部鋪滿約2 cm厚的墊料,在中央擺放6粒飼料顆粒。禁食24 h后,將大鼠從同一個(gè)角落放入箱中并開始計(jì)時(shí),以開始咀嚼食物為標(biāo)準(zhǔn)記錄所用時(shí)間,定義為攝食潛伏期。測(cè)試共計(jì)5 min,5 min內(nèi)未進(jìn)食者攝食潛伏期記錄為5 min。

        糖水偏好實(shí)驗(yàn)是在大鼠適應(yīng)性訓(xùn)練后,禁食禁水24 h,各籠備蔗糖水與蒸餾水各一瓶,每瓶200 mL,供大鼠自由飲用,1 h后調(diào)換二者位置,2 h后撤除水瓶,記錄2 h內(nèi)蔗糖水瓶糖水消耗量。計(jì)算糖水偏愛率(%)=(糖水消耗/液體總計(jì)消耗)×100%。

        2.1.4.3 炎癥因子指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,各組大鼠禁食不禁水處理12 h,10%水合氯醛麻醉后取腦,于冷凍操作臺(tái)上分離海馬組織,經(jīng)液氮急速冷凍后,保存于-80℃冰箱。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)大鼠海馬組織中IL-1β、IL-6的含量。

        2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistics 21.0軟件處理,計(jì)量資料用(±s)表示,多組間比較服從正態(tài)分布且方差齊,采用單因素方差分析,兩兩比較用LSD法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用GraphPad Prism 7制作柱狀圖。

        2.2 UPLC-Q-TOF-MS分析

        2.2.1 對(duì)照品和供試品溶液的制備

        2.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、異鉤藤堿、鉤藤堿、洋川芎內(nèi)酯A和隱丹參酮對(duì)照品各2 mg,置于10 mL的容量瓶中,用70%甲醇溶解,稀釋至刻度,并用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾,各吸取0.1 mL于進(jìn)樣瓶中,即得對(duì)照品溶液。

        2.2.1.2 供試品溶液的制備 取2 g干膏,置于50 mL錐形瓶中,加70%甲醇50 mL,超聲處理30 min,冷卻,補(bǔ)加70%甲醇后離心,并用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾,即得供試品溶液。

        2.2.2 色譜及質(zhì)譜條件 色譜條件:色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(3.0 mm×100 mm,1.8 μm),流動(dòng)相由有機(jī)相乙腈(A)和水相(B)組成,其中水相B中含0.05 mmol/L甲酸銨(質(zhì)譜級(jí)),設(shè)置梯度洗脫程序:0~5 min,5%~15%A;5~10 min,15%~35%A;10~20min,35%~65%A;20~25min,65%~95%A;流速:0.4 mL/min,進(jìn)樣量:1 μL。

        質(zhì)譜檢測(cè)條件:采用正負(fù)離子分析模式,離子化方式為電噴霧離子化(ESI),進(jìn)樣分析前采用Agilent標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧液ESI-L Low Concentration Tuning Mix(G1969-85000)來(lái)進(jìn)行準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的校正。一級(jí)質(zhì)譜掃描檢測(cè)檢測(cè)范圍(m/z):100~1 700,采用氮?dú)鉃槌軇└稍餁怏w,溫度為325℃,流速為6.8 L/min;鞘氣溫度為350℃;毛細(xì)管電壓為4.0 kV,F(xiàn)ragment電壓為150V。

        3 結(jié) 果

        3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

        3.1.1 各組大鼠血壓變化比較 與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血壓在給藥前和給藥后第1、2、3、4周均明顯升高(P<0.01),提示模型制備成功。與模型組比較,復(fù)方鉤藤降壓解郁方組大鼠血壓在給藥后第1、2、3、4周均明顯降低(P<0.01),說(shuō)明復(fù)方鉤藤降壓解郁方可以很好地抑制高血壓并發(fā)抑郁癥模型大鼠的血壓。(見圖1)

        圖1 各組大鼠血壓變化比較(±s,n=10)

        3.1.2 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果 與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠自主活動(dòng)(水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng))明顯減少,攝食潛伏期明顯延長(zhǎng),糖水偏好程度明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01),說(shuō)明模型大鼠在行為學(xué)上明顯出現(xiàn)了抑郁樣改變,提示造模成功。與模型組比較,復(fù)方鉤藤降壓解郁方組大鼠自主活動(dòng)能力(水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng))明顯增多,攝食潛伏期明顯縮短,糖水偏好程度明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。(見圖2~4)

        圖2 各組大鼠自由活動(dòng)次數(shù)比較(±s,n=10)

        圖3 各組大鼠攝食潛伏期比較(±s,n=10)

        圖4 各組大鼠糖水偏好程度比較(±s,n=10)

        3.1.3 各組大鼠海馬炎癥因子IL-1β、IL-6的含量比較 與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠海馬炎癥因子IL-1β、IL-6的水平均明顯升高(P<0.05);與模型組比較,復(fù)方鉤藤降壓解郁方組大鼠海馬炎癥因子IL-1β、IL-6的水平均明顯降低(P<0.05)。(見圖5)

        圖5 各組大鼠海馬炎癥因子IL-1β、IL-6水平比較(±s,n=10)

        3.2 UPLC-Q-TOF-MS分析

        3.2.1 主要色譜峰的鑒定以及化合物的藥材來(lái)源 通過(guò)中國(guó)科學(xué)院化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(www.organchem.csdb.cn)以及文獻(xiàn)分析,初步構(gòu)建復(fù)方鉤藤降壓解郁方10味中藥化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù),共檢索到1 768個(gè)化學(xué)成分,其中鉤藤106個(gè)、天麻170個(gè)、川芎113個(gè)、地龍83個(gè)、杜仲206個(gè)、桑寄生166個(gè)、丹參225個(gè)、白芍85個(gè)、貫葉連翹311個(gè)、葛根303個(gè)。

        利用UPLC-Q-TOF-MS分析方法,從復(fù)方鉤藤降壓解郁方中快速鑒定出化合物51個(gè),包括黃酮類9個(gè)、糖苷類7個(gè)、苯丙素類1個(gè)、二萜類5個(gè)、生物堿類11個(gè)、酚酸及其酯類2個(gè)、氨基酸類2個(gè)、其他類14個(gè),并對(duì)每個(gè)化合物的來(lái)源進(jìn)行了歸屬。復(fù)方鉤藤降壓解郁方UPLC-Q-TOF-MS正、負(fù)離子流圖及對(duì)照品圖譜見圖6~7,復(fù)方鉤藤降壓解郁方化學(xué)成分的保留時(shí)間、質(zhì)荷比、誤差、分子式、化合物名稱、碎片離子信息、藥材來(lái)源等信息數(shù)據(jù)見表1。

        表1 復(fù)方鉤藤降壓解郁方化學(xué)成分質(zhì)譜信息

        圖6 復(fù)方鉤藤降壓解郁方UPLC-Q-TOF-MS總離子流圖

        3.2.2 各種化合物的結(jié)構(gòu)和裂解

        3.2.2.1 生物堿類化合物 化合物26:復(fù)方鉤藤降壓解郁方中的生物堿類化合物主要來(lái)自鉤藤。正離子模式下,ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰為(m/z)385.209 8[M+H]+,tR為17.458 min,分子式為C22H28N2O4,碎片離子峰為160.074 7,187.082 1,241.132 5,269.163 2,353.185 5。分別對(duì)應(yīng)[M+H-C12H19NO3]+,[M+HC11H18O3]+,[M+H-C7H10O3]+,[M+H-C5H8O3]+,[M+H-CH2O]+。通過(guò)對(duì)照品比對(duì),鑒定化合物26為異鉤藤堿。(見圖8~9)

        圖7 對(duì)照品UPLC圖譜

        圖8 異鉤藤堿碎片離子圖

        圖9 異鉤藤堿可能的裂解過(guò)程

        3.2.2.2 黃酮類化合物 化合物18、21:復(fù)方鉤藤降壓解郁方中的黃酮類化合物主要來(lái)自葛根。峰21和18的準(zhǔn)分子離子峰均為(m/z)417[M+H]+,峰18質(zhì)譜圖的碎片離子為(m/z)255[M+H-Glu]+,推測(cè)可能是大豆苷。峰21質(zhì)譜圖的碎片離子為(m/z)381[M+H-2H2O]+,297[M+H-H2O-C4H6O3]+,根據(jù)對(duì)照品對(duì)照,鑒定為葛根素。(見圖10~13)

        圖10 大豆苷碎片離子圖

        圖11 大豆苷可能的裂解途徑

        圖13 葛根素可能的裂解途徑

        3.2.2.3 二萜類化合物 化合物50:復(fù)方鉤藤降壓解郁方中的二萜類化合物主要來(lái)自丹參。如圖14所示,化合物50,保留時(shí)間為38.922 min,分子式為C19H18O3,在正離子模式下得到(m/z)295[M+H]+,280[M+H-CH3]+,277[M+H-H2O]+,266[M+H-CHO]+,262[M+H-H2O-CH3]+,249[M+H-H2O-CO]+的碎片離子,推測(cè)該化合物為丹參酮ⅡA,其裂解途徑見圖15。

        圖12 葛根素碎片離子圖

        圖14 丹參酮ⅡA碎片離子圖

        圖15 丹參酮ⅡA可能的裂解途徑

        4 討 論

        高血壓并發(fā)抑郁癥是臨床上高血壓患者常見的并發(fā)癥之一,該病的發(fā)病率為26.8%,在中國(guó)人群中更為典型[31],并且其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。由于目前高血壓并發(fā)抑郁癥的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確,大多數(shù)的治療方案都是從抗抑郁和降血壓以及改善臨床癥狀入手,并沒(méi)有從兩者共性發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)入手,存在一定的局限性。西藥治療存在副作用大、易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn),中醫(yī)藥重視辨證論治和整體觀,通過(guò)多靶點(diǎn)、多途徑調(diào)節(jié)患者的臨床癥狀。因此,將化學(xué)成分、藥理作用、作用機(jī)制研究與臨床需求相結(jié)合,開展中藥復(fù)方更高層次的研究,對(duì)高血壓并發(fā)抑郁癥的防治具有重要的科學(xué)價(jià)值。

        利用UPLC-Q-TOF-MS快速鑒定中藥或復(fù)方中活性成分是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)與趨勢(shì)[32-35]。中藥復(fù)方活性成分難于識(shí)別,常規(guī)方法提取活性成分費(fèi)時(shí)費(fèi)力,并且分離過(guò)程可能導(dǎo)致低含量活性成分丟失。中藥復(fù)方化學(xué)成分的分析是中藥發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ),有助于進(jìn)一步闡明中藥復(fù)方的配伍規(guī)則和藥理作用。

        復(fù)方鉤藤降壓解郁方以復(fù)方鉤藤降壓片與天麻鉤藤飲為基礎(chǔ)方化裁而成;方中鉤藤、天麻為君藥,滋陰潛陽(yáng),平肝息風(fēng);地龍息風(fēng)通絡(luò),為臣藥,助君藥化瘀息風(fēng)之力;佐以杜仲、桑寄生滋補(bǔ)肝腎,葛根解肌退熱、生津止渴。以上藥物作為基本方,再加入養(yǎng)陰柔肝、疏肝解郁的白芍、貫葉連翹等10味中藥組成本方。

        有文獻(xiàn)表明[36],天麻鉤藤飲和其單味藥材中主要包括黃酮類和生物堿類成分,但對(duì)于復(fù)方鉤藤降壓解郁方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚未見相關(guān)報(bào)道。研究表明,天麻的主要有效成分是酚類及多糖類化合物,具有鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、抗抑郁、神經(jīng)保護(hù)、抗眩暈、調(diào)節(jié)循環(huán)系統(tǒng)、抗炎、鎮(zhèn)痛、改善記憶等藥理作用[37]。鉤藤中的生物堿類主要化學(xué)成分具有抗氧化、抗炎和調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的作用,被廣泛應(yīng)用于治療驚厥癲癇、高血壓、抑郁癥等疾病[38]。地龍中的活性蛋白具有防治高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用[4]。白芍中的芍藥苷、白芍苷等有效成分具有降低動(dòng)脈硬化早期生物標(biāo)志物的作用[39]。丹參主要包括黃酮類、萜類和酚酸類化合物,具有抗氧化、抗炎、降血糖和鎮(zhèn)靜等作用[40]。

        本實(shí)驗(yàn)利用UPLC-Q-TOF-MS新技術(shù)從復(fù)方鉤藤降壓解郁方中快速鑒定化合物51個(gè)。鑒定出的化合物中來(lái)源于葛根18個(gè)、鉤藤12個(gè)、丹參6個(gè)、川芎4個(gè)、白芍3個(gè)、地龍3個(gè)、天麻3個(gè)、杜仲1個(gè)、桑寄生1個(gè)、貫葉連翹1個(gè)。其中苯甲醛在天麻和貫葉連翹中均有存在。鑒定出的化合物中來(lái)源于葛根所含成分最多。葛根是臨床常用中藥材之一,為豆科植物野葛的干燥根,具有解肌退熱、升陽(yáng)止瀉的功效。葛根具有很好的降血壓作用[41],其主要有效成分是黃酮類化合物[42],且主要的降血壓活性成分是葛根素[43-45]。總離子流圖顯示葛根素在復(fù)方鉤藤降壓解郁方中含量最高。葛根素能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和腦血管,具有降低血壓、改善神經(jīng)纖維傳導(dǎo)速度的功效[46-47]。GAO S等[48]研究表明葛根素可顯著降低IL-1β、IL-6、IL-10等炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),下調(diào)NF-κB的活性,從而抑制炎癥反應(yīng),改善高血壓并發(fā)抑郁癥的癥狀。有文獻(xiàn)報(bào)道,葛根素對(duì)重癥高血壓具有很好的心血管保護(hù)作用[49]。

        本研究發(fā)現(xiàn),高血壓并發(fā)抑郁癥模型組大鼠血壓上升,且精神萎靡,食欲差;同時(shí)其自主活動(dòng)減少,攝食潛伏期延長(zhǎng),即其對(duì)未知環(huán)境的探索能力和興趣明顯下降;糖水偏好程度降低,說(shuō)明其快感缺失,無(wú)法從糖水獎(jiǎng)勵(lì)中體驗(yàn)到快樂(lè);海馬組織中IL-1β、IL-6的含量升高,進(jìn)一步驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)造模成功。復(fù)方鉤藤降壓解郁方組大鼠血壓下降,自主活動(dòng)增加,攝食潛伏期縮短,糖水偏好程度上升,海馬炎癥因子IL-1β、IL-6的含量明顯降低,說(shuō)明復(fù)方鉤藤降壓解郁方對(duì)高血壓并發(fā)抑郁癥大鼠有效,同時(shí)化學(xué)成分分析結(jié)果初步證明是其中含量最高的葛根素發(fā)揮了調(diào)節(jié)血壓和緩解抑郁程度的作用,而且表明本方法可以在中藥復(fù)方復(fù)雜體系中實(shí)現(xiàn)對(duì)活性成分的簡(jiǎn)單快捷高通量篩選。

        本研究為復(fù)方鉤藤降壓解郁方的藥效和物質(zhì)基礎(chǔ)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為后續(xù)學(xué)者開展高血壓并發(fā)抑郁癥相關(guān)研究提供了一些參考,但其單味藥之間的協(xié)同作用及作用靶點(diǎn)尚需進(jìn)一步研究。

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