馮 淼，張吉斯，陳 華，馬小晴

（鞍山師范學院化學與生命科學學院，遼寧 鞍山 114007）

近幾年隨著我國經(jīng)濟的快速增長，護膚品消費也迅速崛起。2013 年中國超越日本成為世界第二大護膚品消費國，2017 年我國護膚品的市場規(guī)模已占到全球市場的11.5%，僅次于美國的18.5%[1]。護膚品中因含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、維生素等成分，極利于微生物的生長和繁殖[2]，對使用者的健康有著嚴重的危害，護膚品質(zhì)量安全也一直受到社會各界的關(guān)注，例如，聶炎炎等[3]對廣東省化妝品微生物污染狀況進行了調(diào)查；張靜等[4]對化妝品微生物污染狀況及防腐劑使用情況進行了分析；張劍等[5]調(diào)查了嬰幼兒化妝品中重金屬污染的情況等。相對于一次污染的研究來說，二次污染的研究更加復雜、繁瑣，而且工作量巨大。開封后的護膚品由于使用方式、時間、溫度等因素的影響更易造成二次污染，有研究表明[6-8]：護膚品在開封前合格率較高，使用過程中存在著二次污染的情況，隨著使用時間的延長合格率逐漸降低。所以人們在如何避免微生物對護膚品質(zhì)量產(chǎn)生影響、如何合理利用防腐劑建立安全體系，如何確保護膚品成分穩(wěn)定等方面進行了深入的研究。護膚品作為一種持續(xù)使用的商品，不僅與出廠時的狀況有關(guān)，也與消費者的使用習慣密切相關(guān)。在此，研究使用習慣對護膚品二次污染所產(chǎn)生的微生物情況，對人們科學合理地使用護膚品和降低護膚品研制成本都有重要意義。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

于鞍山某大型超市購買同一批次、成分較為簡單的護膚品42 個。

1.2 主要試劑

SCDLP 液體培養(yǎng)基、雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、靛基質(zhì)試劑、十六烷三甲基溴化銨培養(yǎng)基、乙酰胺培養(yǎng)基、明膠培養(yǎng)基、硝酸鹽蛋白質(zhì)胨水培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、瓊脂平板、甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基，均購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。革蘭氏染色液試劑盒，北京陸橋技術(shù)股份有限公司；綠農(nóng)菌素測定用培養(yǎng)基，南通凱恒生物科技發(fā)展有限公司；營養(yǎng)肉湯，上海博微生物科技有限公司；7.5%氯化鈉肉湯，北京陸橋技術(shù)股份有限公司；Baird-Parker 氯化鈉，國藥集團化學試劑有限公司。

1.3 主要儀器

U-LH100HG 顯微鏡、SZX2-ILLT 熒光照相顯微鏡，奧林巴斯；LDZX-50KBS 高壓滅菌鍋，上海申安；超凈工作臺CJ-1S，天津泰斯特；賽多利斯電子天平；BSA224S、LC-162C 冰箱，海爾；恒溫培養(yǎng)箱LBI-400，上海龍躍。

1.4 實驗方法

1.4.1 存放溫度

取15 份護膚品，每天早晚各由3 名實驗員用塑料棒取用。每次使用后，將中蓋和外蓋都封緊，然后將護膚品分別在-4、5、15、25、35 ℃的條件下存放。分別在30、60、90 d 檢測護膚品中菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.2 取用方法

取9 份護膚品，每天早晚各由3 名實驗員用手指、化妝棉簽及塑料棒各取用。每次使用后，將中蓋和外蓋都封緊，在常溫存放。分別在30、60、90 d，檢測護膚品中菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.3 密封程度

取9 份護膚品，每天早晚各由3 名實驗員用塑料棒取用，并且每次使用后，一個將中蓋和外蓋都封緊，一個只蓋外蓋并保證封緊，一個只蓋外蓋并保持松弛不掉的狀態(tài)，然后保存在常溫的條件下。分別在30、60、90 d，檢測護膚品中菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量。

1.4.4 使用時間

取9 份護膚品，每天早中晚用塑料棒取用，第一份持續(xù)使用30 d，第二份持續(xù)使用60 d，第三份持續(xù)使用90 d。每次使用后，將中蓋和外蓋都封緊，在常溫存放。分別在30、60、90 d，檢測護膚品中菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量。

1.5 檢測方法及評價標準

按照GB 7918.1—2018《化妝品衛(wèi)生標準》和《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015 版）執(zhí)行。檢測項目包括：菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量。菌落總數(shù)不得＞1 000 CFU/mL（g）；霉菌和酵母菌總數(shù)不得＞100 CFU/mL（g）；有一項不符合以上標準的產(chǎn)品為不合格產(chǎn)品。

2 結(jié)果及討論

2.1 存放溫度對護膚品中微生物二次污染的影響

不同存放溫度下檢測結(jié)果見表1。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，將護膚品保存在不同的溫度條件下，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量都符合國家標準。在相同溫度條件下，使用時間越長，菌落總數(shù)也就越多。將護膚品保存在-4 ℃的冰箱中，護膚品受微生物二次污染的影響最小，但是在常溫（25 ℃）條件下，菌落總數(shù)增加了53 CFU/g～223 CFU/g，霉菌及酵母菌增加了0 CFU/g～1 CFU/g，影響結(jié)果相對較小，因此綜合考慮護膚品可以放在常溫中使用。

表1 存放溫度對護膚品中微生物二次污染的影響 CFU/g

2.2 取用方法對護膚品中微生物二次污染的影響

不同取用方法檢測結(jié)果見表2。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，在手指和塑料棒取用護膚品的條件下，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量都符合國家標準。而未經(jīng)消毒滅菌的化妝棉簽內(nèi)部可能隱藏大量微生物，用其取用護膚品，可能將微生物引入護膚品內(nèi)，造成二次污染。用塑料棒的方式取護膚品，可使護膚品的菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌受影響最小。

表2 取用方法對護膚品中微生物二次污染的影響 CFU/g

2.3 密封程度對護膚品中微生物二次污染的影響

不同密封程度檢測結(jié)果見表3。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，密封程度對護膚品中微生物二次污染的影響相對較小，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量都符合國家標準，但是外蓋封緊會明顯減少菌落總數(shù)，所以建議使用者在使用過程中將瓶蓋封禁，以防止微生物的二次污染。

表3 密封程度對護膚品中微生物二次污染的影響 CFU/g

2.4 使用時間對護膚品中微生物二次污染的影響

不同使用時間檢測結(jié)果見表4。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，連續(xù)使用30、60、90 d 的護膚品在開封后的90 d 內(nèi)，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌的含量都符合國家標準，但是隨著使用時間的延長，護膚品內(nèi)微生物總數(shù)還是會增多，所以建議使用者打開化妝品后盡量縮短使用時間。

表4 使用時間對護膚品中微生物二次污染的影響 CFU/g

3 結(jié)語

護膚品已經(jīng)成為每位愛美人士不可或缺的生活用品，護膚品在改善和提高人們的生活質(zhì)量方面起著不容小視的作用，護膚品中的微生物是否會對使用者的健康帶來危害關(guān)系著人們的使用安全和身體健康。對于護膚品來說，無論是取用習慣、購買習慣、存放習慣還是使用時間都會對其產(chǎn)生二次污染。雖然這些習慣是使用者在使用過程中微不足道的一個小舉措，但經(jīng)多次重復后，這些習慣就會給護膚品帶來二次污染，為以后的使用埋下隱患，最終對使用者的健康帶來威脅。我們無法改變護膚品持續(xù)性的特性，但我們可以通過科學的研究，來探索使用習慣對護膚品中微生物的影響，以此來降低使用習慣對化妝品的二次污染，讓使用者能更科學、更健康、更放心的使用護膚品[9-11]。