⊙文 歐陽(yáng)海玉 趙阿丹 崔巍 周雯婧 戴智勇 澳優(yōu)乳業(yè)（中國(guó)）有限公司

本文對(duì)幽門螺旋桿菌進(jìn)行了有關(guān)介紹，分析了益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制，然后通過(guò)斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)，對(duì)蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉抑制胃幽門螺旋桿菌的功效進(jìn)行了驗(yàn)證研究。結(jié)果顯示，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉對(duì)抑制胃幽門螺旋桿菌具有明顯作用，與對(duì)照組相比，產(chǎn)品組具備顯著的幽門螺旋桿菌抑制效果，在相同濃度下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉抗幽比克拉霉素的效果顯著，隨著樣品濃度增加，其抗幽抑制功效上升。

一、胃部疾病的患病關(guān)鍵病因——幽門螺旋桿菌

幽門螺旋桿菌作為人類的I類致癌因子，與消化道潰瘍、慢性胃炎、胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴癌和胃癌等人類常見(jiàn)疾病緊密相關(guān)。根據(jù)2020年央視新聞報(bào)道，幽門螺旋桿菌全球自然人群感染率超過(guò)50%，我國(guó)平均感染率為59%，兒童平均感染率為40%。其中，約10%-15%的感染者可發(fā)展為消化性潰瘍，約5%可發(fā)展為胃黏膜萎縮，小于1%感染者可發(fā)展為胃癌，因此幽門螺旋桿菌目前依然是我國(guó)人民生命健康的重要威脅。

目前，預(yù)防幽門螺旋桿菌的方式主要是避免家庭群集性感染幽門螺旋桿菌，以及做好口腔健康預(yù)防。幽門螺旋桿菌可以在自來(lái)水環(huán)境中存活4-10天，可以在自然河流中存活3年，因此需要在飲食方面做好預(yù)防工作。

幽門螺旋桿菌的治療方法主要有四聯(lián)抗生素療法和三聯(lián)抗生素療法。四聯(lián)抗生素療法一般兩周14天為一療程，療程結(jié)束后一周內(nèi)復(fù)查，或一個(gè)月后復(fù)查。三聯(lián)療法即使用奧美拉唑、阿莫西林和克林霉素，三種藥物的用量需遵醫(yī)囑，且按時(shí)按量服用，不過(guò)由于很多地區(qū)出現(xiàn)了耐藥性，所以使用三聯(lián)療法的人越來(lái)越少。

抗生素療法的大量使用導(dǎo)致幽門螺旋桿菌整體耐藥性上升，愈后再感染率升高，并且感染者服藥體驗(yàn)不佳，多會(huì)出現(xiàn)嘔吐、惡心、食欲不振等不良反應(yīng)。因此，找出預(yù)防幽門螺旋桿菌的適宜方法，改善治療方法勢(shì)在必行。通過(guò)查閱多個(gè)文獻(xiàn)資料發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)或者合并使用益生菌產(chǎn)品改善胃部不適以預(yù)防幽門螺旋桿菌，可能是一種有效的途徑。

二、益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制

目前主要的抗幽功能食品原料有巖藻多糖（fucoidan）、IgY免疫球蛋白、姜黃素、蜂膠等，可以有效抵抗幽門螺旋桿菌，降低感染風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)，抗幽益生菌的研究取得了突破并已形成產(chǎn)品化產(chǎn)業(yè)鏈，感染者體驗(yàn)也較好，抗幽產(chǎn)品中所含有的益生菌可以有效識(shí)別胃幽門螺旋桿菌并進(jìn)行特異性聚合，后經(jīng)由消化道排出體外。同時(shí)，益生菌不是抗生素，不易造成不良反應(yīng)，也可防止由于長(zhǎng)期用藥而產(chǎn)生幽門螺桿菌的耐藥性。

在抗幽益生菌的研究方面，更多研究表明通過(guò)聯(lián)合使用益生菌進(jìn)行胃部養(yǎng)護(hù)效果較好，比如羅伊氏乳桿菌Pylopass、植物乳桿菌CN2018、唾液乳桿菌AP-32、約氏乳桿菌MH-68、植物乳桿菌LPL28、副干酪乳桿菌ET-66和乳酸乳球菌LY66等均有一定的研究基礎(chǔ)，聯(lián)合運(yùn)用的養(yǎng)護(hù)效果較好。

益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制主要有三個(gè)方面：一是形成黏膜屏障。胃腸道黏膜的上皮細(xì)胞是病原體的強(qiáng)大屏障，益生菌通過(guò)改變黏液和上皮連接蛋白的表達(dá)，釋放具有生物活性的分子來(lái)穩(wěn)定屏障，防止病原體破壞黏膜屏障，保護(hù)黏膜屏障免受不良機(jī)制的破壞。二是分泌抗菌素。益生菌通過(guò)發(fā)酵而產(chǎn)生有機(jī)物質(zhì)，如乳酸（Lactic acid）、醋酸（acetic acid）和過(guò)氧化氫（HO），可以降低胃內(nèi)的pH值，制造出不利于幽門螺旋菌生長(zhǎng)的酸性環(huán)境。三是共聚體（Coaggregation）。共聚體是不同物種生物的結(jié)合，益生菌的聚集特性可以將病原體排除到腸道黏膜之外，在體外和體內(nèi)研究中發(fā)現(xiàn)，羅伊氏乳桿菌能夠與幽門螺旋桿菌呈現(xiàn)共聚集現(xiàn)象。

三、抗幽功能食品功效的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)樣品由澳優(yōu)乳業(yè)（中國(guó)）有限公司提供，樣品為粉末狀，于2022年5月5日被接收并登記，于干燥、陰涼處儲(chǔ)存。用標(biāo)準(zhǔn)稀釋水配制成2.00mg/mL的母液，現(xiàn)配現(xiàn)用。陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)組為克拉霉素，白色粉末，批號(hào)為E1529013，于4℃條件下保存。用DMSO配制成12.5mg/mL的母液，在-20℃條件下儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)使用的斑馬魚(yú)均飼養(yǎng)于28℃的養(yǎng)魚(yú)用水中（水質(zhì)：每1L反滲透水中加入200mg速溶海鹽，電導(dǎo)率為450-550uS/cm，pH為6.5-8.5，硬度為50-100mg/L CaCO），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（浙）2022-0004，飼養(yǎng)管理符合國(guó)際AAALAC認(rèn)證（認(rèn)證編號(hào)：001458）的要求。

斑馬魚(yú)品系：隨機(jī)選取3dpf野生型AB品系于6孔板中，每孔（實(shí)驗(yàn)組）為30尾斑馬魚(yú)，在28℃培養(yǎng)箱中孵育。

模型建立：水溶給予實(shí)驗(yàn)組樣品處理48h、陽(yáng)性對(duì)照組克拉霉素125μg/mL濃度處理48h后，所有組別添加5×10CFU/mL幽門螺旋桿菌，建立斑馬魚(yú)幽門螺旋桿菌感染模型。

給藥方式：樣品以水溶給藥的方式處理模型斑馬魚(yú)。

實(shí)驗(yàn)方法采用杭州環(huán)特生物科技股份有限公司抗幽門螺旋桿菌功效模型評(píng)價(jià)研究方法。

（1）確定樣品最大檢測(cè)濃度（MTC）。實(shí)驗(yàn)組別：共7組，樣品設(shè)置5個(gè)檢測(cè)濃度、1個(gè)模型對(duì)照組和1個(gè)正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)幽門螺旋桿菌處理24h后，統(tǒng)計(jì)各實(shí)驗(yàn)組的斑馬魚(yú)死亡數(shù)量與毒性情況，確定樣品的MTC。如果在最初的濃度檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中不能得到MTC，就擴(kuò)大樣品的檢測(cè)濃度范圍，上限為2000μg/mL或最大溶解度，下限為0.01μg/mL。

（2）樣品抗幽門螺旋桿菌功效評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)組別：共5組，每個(gè)樣品3個(gè)檢測(cè)濃度（一般為1/4MTC，1/2MTC，MTC）、1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組（克拉霉素）和1個(gè)模型對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)幽門螺旋桿菌處理24h后，每組隨機(jī)選取10尾斑馬魚(yú)，在熒光顯微鏡下觀察、拍照并保存；使用NISElements D 3.20高級(jí)圖像處理軟件采集數(shù)據(jù)，分析斑馬魚(yú)胃腸道熒光強(qiáng)度，以該指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果評(píng)價(jià)樣品對(duì)幽門螺旋桿菌的抑制功效。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果采用mean±SE表示，并用SPSS26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p＜0.05表明差異顯著并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（1）MTC結(jié)果。在本實(shí)驗(yàn)條件下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉對(duì)幽門螺旋桿菌感染模型斑馬魚(yú)最大檢測(cè)濃度（MTC）為2000μg/mL。

組別 濃度（μg/mL） 胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度（像素，mean±SE）模型對(duì)照組 - 345633±15812克拉霉素 125 191994±12728***蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉500 170975±15340**1000 167794±12510**2000 126417±10056***

（2）樣品抗幽門螺旋桿菌功效評(píng)價(jià)。在本實(shí)驗(yàn)條件下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉具有抑制幽門螺旋桿菌的功效，具體如表2、圖1和圖2所示。

圖1：斑馬魚(yú)胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度典型圖

圖2：斑馬魚(yú)胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度

本次實(shí)驗(yàn)在野生型AB品系斑馬魚(yú)上進(jìn)行，通過(guò)水溶液給藥的方式處理模型斑馬魚(yú)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉在抑制胃幽門螺旋桿菌方面具有顯著效果。在相同濃度下，樣品比克拉霉素的抗幽效果顯著，隨著樣品濃度增加，抗幽抑制功效上升，在2000ug/mL達(dá)到最高。通過(guò)與克拉霉素的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉表現(xiàn)出更好的抗幽功能效果。

四、展望與討論

抗幽食品發(fā)展多年，已有大量的上市產(chǎn)品，特別是抗幽益生菌等抗幽功能食品發(fā)展迅猛，在2019年全球益生菌市場(chǎng)價(jià)值約400億歐元，中國(guó)益生菌食品平均年增速約15%，具有廣闊的發(fā)展前景。

幽門螺旋桿菌在我國(guó)傳播較廣，如何預(yù)防和干預(yù)幽門螺旋桿菌的感染和傳播是緊迫的難題?？褂墓δ苁称肪邆淞己玫目褂墓δ?，在有效保護(hù)國(guó)民身體健康方面市場(chǎng)前景廣闊，存在很大的發(fā)展空間。

目前抗幽功能食品的研究多集中于單一產(chǎn)品和物質(zhì)的抗幽效果，后續(xù)在胃炎發(fā)展進(jìn)程中可以形成針對(duì)幽門螺旋桿菌的產(chǎn)品聯(lián)組，研究多種物質(zhì)聯(lián)合作用下的抗幽效果，充分發(fā)揮其市場(chǎng)潛力。