廣西中醫(yī)藥大學藥學院，廣西 南寧 530200

瑤族在廣西是僅次于壯族人口的第二大少數(shù)民族，瑤族先民在生產生活實踐中發(fā)展壯大了瑤醫(yī)藥，因此在廣西研究瑤藥具有一定的地理優(yōu)勢。在傳統(tǒng)瑤藥中，最具特色的是瑤醫(yī)老班藥“五虎、九牛、十八鉆、七十二風”，白九牛屬于“九?！敝唬涿Q“白九?！笔驾d于《中國瑤藥學》[1]?，幩幇拙排?，瑤語名“別坐翁”，別名七葉蓮、那藤、牛藤、七葉那、五葉風、七姐妹、野木瓜等，為木通科野木瓜屬植物五指那藤StauntoniaobovatifoliolaSubsp.intermedia(Y.C.Wu) T.Chen的干燥藤莖，分布于廣東、廣西、湖南等地，具有祛風止痛、舒筋活絡、消腫散毒、清熱利尿的功效，主要用于治療風濕骨痛、三叉神經痛、坐骨神經痛、胃痛、手術后疼痛、跌打損傷、水腫、急性腎炎、尿血、乳腺增生等癥，屬于瑤醫(yī)理論中的“風打相兼”藥[2]。研究[3]證實，五指那藤含白樺脂酸、木通種酸等多種活性成分，能夠有效抑制HIV蛋白酶[4]，但在藥材鑒別研究方面未見報道。為進一步研究五指那藤植物，實驗收集11批次廣西、湖南、湖北、福建4的白九牛藥材，對其進行生藥學研究，以期為白九牛藥用資源的開發(fā)利用，建立質量標準提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 RM2145半自動輪轉切片機(德國徠卡儀器公司)；DM2500光學生物顯微鏡(德國徠卡儀器公司)；DFC500圖像分析系統(tǒng)(德國徠卡儀器公司)；ZF-20C暗箱三用紫外分析儀(上海精密儀器儀表有限公司)。

1.2 材料 薄層色譜硅膠G板(批號：20200428，青島海洋化工有限公司)。白九牛藥材采自廣西賀州市步頭鎮(zhèn)甘洞，經廣西中醫(yī)藥大學壯醫(yī)藥學院韋松基教授鑒定為木通科野木瓜屬植物五指那藤StauntoniaSubsp.intermedia(Y.C.Wu) T.Chen的藤莖，標本存于廣西中醫(yī)藥大學壯瑤藥重點實驗室。其余產地藥材見表1。

表1 白九牛樣品信息

2 方法與結果

2.1 性狀鑒別 本品呈長圓柱形，直徑3 ～ 5 cm；表面灰黃色至灰褐色，粗糙，具不規(guī)則縱溝紋；皮部易剝離，質地堅韌，不易折斷；橫切面具放射狀紋理和密集小孔，皮部棕褐色，木部灰黃色；髓部呈黃白色，圓形；氣微，味略苦。主要鑒別點為表面具有不規(guī)則縱溝紋；橫切面具放射狀紋理和密集小孔；髓部黃白色，圓形。原植物如圖1所示，藥材如圖2所示。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖橫切面切片特征 木栓層為多列類長方形細胞，細胞排列緊密而整齊，含多數(shù)散在石細胞；靠近皮層處石細胞群列成環(huán)狀，皮層窄小，細胞排列疏松；韌皮部較寬，形成層不明顯，木質部寬廣；射線寬廣，有石細胞散在；髓部細胞類圓形，可以觀察到薄壁組織中含有淀粉粒和草酸鈣方晶。如圖3所示。

圖1 白九牛藥材原植物圖

圖2 白九牛藥材圖

注：1.木栓層；2.石細胞群；3.皮層；4.韌皮部；5.木質部；6.射線；7.髓部圖3 白九牛橫切面的顯微圖

2.2.2 粉末特征 粉末為淺黃色。具緣紋孔導管碎片較多，偶見螺紋導管；石細胞較多，呈類圓形、方形、類長方形，壁厚，散在或成群分布；木纖維呈長梭形，晶鞘纖維易察見；草酸鈣方晶易察見。如圖4所示。

1.石細胞群；2.石細胞；3.纖維；4.草酸鈣方晶；5.淀粉粒；6.導管圖4 白九牛的顯微粉末圖

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 采用單因素試驗法，以白九牛對照藥材為對照，對石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水四種不同提取溶劑，對水浴回流30 min、超聲30 min及冷浸12 h三種不同提取方式進行比較。結果表明用乙酸乙酯作為溶劑、采用回流法提取供試品溶液展開效果為佳。

2.3.2 薄層色譜條件 優(yōu)選分別對薄層硅膠G板、薄層硅膠H板、薄層硅膠HF254三種不同吸附劑進行展開效果的比較試驗，結果以薄層硅膠G板為吸附劑展開效果較好；分別以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶0.2)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.2)為不同展開系統(tǒng)，進行展開效果的比較，結果將石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)作為展開劑時，展開效果較好，Rf值適中；分別以10%磷鉬酸乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液、10%硫酸香草醛等三種不同顯色劑顯色，對顯色結果進行比較，結果以10%磷鉬酸乙醇為顯色劑顯色效果更好。

2.3.4 白九牛的薄層色譜鑒別 按供試品溶液的制備及薄層色譜條件優(yōu)化結果，取白九牛粉末1 g，加入乙酸乙酯20 mL，以水浴回流法提取30 min后過濾，濾液蒸干，并定容至1 mL容量瓶中，作為供試品溶液。另取白九牛對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按薄層色譜法試驗，在同一硅膠G薄層板上，取供試品溶液和對照藥材溶液點樣量各10 μL，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)展開，取出，晾干，在紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，出現(xiàn)相同顏色的斑點。如圖5所示。

注：1、12為白九牛對照藥材；2-11白九牛藥材樣品圖5 白九牛TLC圖

2.4 水分測定 照《中國藥典》2020版“水分測定法(烘干法)”進行測定，測定11批白九牛樣品的水分含量為6.7%～10.4%，結果見表2?？紤]到不同產地和不同季節(jié)樣品對藥材質量的影響因素，故建議控制本品水分不得過12.4%。

表2 水分、總灰分、浸出物測定結果

2.5 總灰分測定 照《中國藥典》2020版“灰分測定法”項下總灰分測定法進行測定，測定樣品總灰分在2.8% ～ 5.4%。結果見表2。故建議本品總灰分不得過6.5%。

2.6 浸出物測定 照《中國藥典》2020版“浸出物測定法”項下的熱浸法進行測定，實驗通過考察水和乙醇兩種不同提取溶劑，考察冷浸和熱浸兩種不同提取方法，浸出率以30%乙醇熱浸得率最高，故選擇30%乙醇作為溶劑。測定樣品浸出物含量為8.9%～14.9%。結果見表2。故建議本品浸出物不得低于7.1%。

3 討論

課題組在查閱文獻中發(fā)現(xiàn)，白九?；饕婕暗侥就埔澳竟蠈?種植物：五指那藤[5-7]、尾葉那藤[8-10]、牛藤[11]和瑤山野木瓜[9]，基原種類繁多。在深入瑤族聚居地區(qū)如金秀瑤族自治縣、恭城瑤族自治縣等采集白九牛藥材和調研過程中發(fā)現(xiàn)，當?shù)匕拙排５乃幱闷贩N主要是兩種：五指那藤和尾葉那藤。《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質量標準》[12]已將尾葉那藤作為白九?；贩N收錄其中。基于對中藥資源的充分利用考慮，實驗對五指那藤開展生藥學研究，為擴大白九牛藥用資源提供科學依據(jù)。另外，五指那藤作為藥材“野木瓜藤”和同屬植物短藥野木瓜、鈍藥野木瓜被收載入《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》[13]中，但是標準僅收錄了野木瓜藤的性狀鑒別，因此開展五指那藤的生藥學鑒別研究仍具有一定的科學意義。

實驗建立了白九牛的生藥學鑒別方法，從結果中可知，其顯微鑒別特征明顯，切面射線呈放射狀排列；粉末中石細胞常數(shù)個成群，具緣紋孔導管較多。

研究根據(jù)文獻篩選不同的對照品如白樺脂酸、木通苯乙醇苷B等，擬作為白九牛薄層色譜鑒別的對照物質，但經過試驗，未取得良好效果，推測原因是白樺脂酸、木通苯乙醇苷B與乙酸乙酯的極性差異較大，以乙酸乙酯提取出的薄層色譜鑒別供試液不含此類成分或含量較低，故本研究僅確定以白九牛對照藥材作為薄層色譜鑒別的參照物。實驗中對建立的白九牛薄層色譜鑒別方法的耐用性進行了考察，對不同展開溫度(25 ℃和40 ℃)、不同展開濕度(26%和56%)以及不同點樣方式(點狀和條帶點樣)等進行薄層層析行為的考察，結果均表明本研究建立的薄層色譜方法對上述不同展開溫度、不同濕度和不同點樣方式均顯示較好的薄層層析效果，說明該法耐用性良好。研究中考察了不同顯色劑，出于對經濟和環(huán)保的考慮，因此選擇直接在紫外光(365 nm)下觀察。

綜上，實驗確定了白九牛的主要鑒別特征，其性狀和顯微特征明顯，對藥材的鑒定工作具有實際的指導意義。研究還建立了白九牛的薄層鑒別方法，該法重復性好、耐用性佳，簡便易行。測定采集的11批白九牛的水分、總灰分、浸出物的測定結果，可參考這些項目的檢查結果，擬定相關檢查項的限度。在對白九牛生藥學鑒別研究的基礎上，下一步可對其藥效學、藥理學及臨床應用方面進行研究，為合理開發(fā)利用白九牛提供參考依據(jù)。