陸林 李亞男 儲凱

（南京市江寧區(qū)中醫(yī)院病理科，江蘇 南京 211100）

結(jié)直腸癌作為臨床常見消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，因社會經(jīng)濟的快速發(fā)展，人們的飲食生活發(fā)生較大變化從而導(dǎo)致結(jié)直腸癌發(fā)病人數(shù)日漸增加[1]。結(jié)直腸癌早期無明顯癥狀，隨著腫瘤的增大會出現(xiàn)排便失調(diào)、腹瀉、血便、便秘等，還會伴隨不同程度的腹部疼痛，到了癌癥晚期還會出現(xiàn)身體消瘦、營養(yǎng)不良、貧血等，發(fā)病最多的部位為乙狀結(jié)腸及直腸，但盲腸、橫結(jié)腸、升降腸等發(fā)病率也較高[1]。在胃腸道中的癌細胞通過血液循環(huán)等途徑擴散到其他臟器組織，癌細胞擴散范圍越大結(jié)直腸癌病癥越嚴重，因此，該病需早期診斷排查，預(yù)防癌細胞組織擴散。

目前臨床多用結(jié)腸鏡來進行結(jié)直腸癌檢測，通過纖維窺鏡進入患者胃腸道取樣進行活體細胞學(xué)檢查及病理學(xué)檢測，而據(jù)王琦[2]等學(xué)者發(fā)布的結(jié)直腸癌PRL-3 蛋白表達與臨床關(guān)系的Meta 分析和秦長江[3]等學(xué)者發(fā)布的 XRCC2 在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義中表示組織中PRL-3 和XRCC2 均影響著結(jié)直腸癌的診斷。

因此，本文旨在探討PRL-3、XRCC2 檢測在結(jié)直腸癌中的診斷意義，為尋找結(jié)直腸癌的診斷指標，提高診斷效率提供一定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院自2019 年3 月-2022 年3 月期間接收的78 例結(jié)直腸癌患者作為研究對象。其中男性51 例，女性27 例，年齡31-76 歲，平均年齡（45.38±6.49）歲，有結(jié)直腸癌癌家族史29 例，無結(jié)直腸癌家族史49例；腫瘤直徑：＜2.3 cm 35例，≥2.3 cm 43 例；組織分化程度：低分化38例，高分化40 例；TNM 分期：I-II 期52 例，III-Ⅳ期26 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47 例；腫瘤部位：盲腸13 例、乙狀結(jié)腸21 例、橫結(jié)腸19 例、直腸9 例、升結(jié)腸3 例、降結(jié)腸13 例。

患者資料無顯著差異，具有可比性（P＞0.05）。

納入標準：（1）經(jīng)手術(shù)病理檢查為結(jié)直腸癌；（2）可進行結(jié)腸鏡檢查患者；（3）為原發(fā)性直腸癌患者；（4）患者及家屬已簽署《知情同意書》；排除標準：（1）合并患有其他惡性腫瘤疾病患者；（2）臨床資料不全患者；（3）存在嚴重認知障礙及精神疾病患者；（4）預(yù)計生存時間小于4 m 患者。

1.2 方法

1.2.1 XRCC2 表達水平檢測

采用免疫組化檢測XRCC2 表達水平。結(jié)腸鏡取結(jié)直腸癌患者癌組織及癌旁組織后用濃度為4%的多聚甲醛（Paraformaldehyde，POM）溶液將組織樣本進行固定，石蠟包埋，再將整個蠟塊均勻切成多個4.5 μm 的薄片，將薄片用二甲苯進行脫蠟、用梯度乙醇進行脫水處理，隨后將0.01 mol?L-1的檸檬酸鈉加入到沸水中制作緩沖液進行高于熱修復(fù)，將緩沖液pH 值穩(wěn)定在6.0，再轉(zhuǎn)至小火進行抗原修復(fù)，讓緩沖液持續(xù)沸騰10 min后，加入濃度為 3% 的過氧化氫（Hydrogen peroxide，H2O2）10 min，將內(nèi)源性滅活過氧化氫酶進行滅活，滴加濃度為10%的山羊血清，整體封閉性孵育30 mim，加入XRCC2 抗體后將其放置在4℃的環(huán)境下，次日再拿出在37℃下復(fù)熱1 h 后，在加入生物素化二抗持續(xù)孵育1 h，DAB顯色后用蘇木素進行復(fù)染、分化。最后將脫水、封片放置顯微鏡下觀察。

1.2.2 PRL-3 表達水平檢測

采用免疫組化檢測PRL-3表達水平。樣本采集，包埋等方法同上。加入PRL-3 抗體（1:200）在37℃環(huán)境下繼續(xù)孵育2 h，再磷酸緩沖液漂洗，滴加生物素化二抗繼續(xù)在37℃環(huán)境孵育30 min，繼續(xù)用磷酸緩沖液漂洗，在滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，30 min 后再次進行磷酸緩沖液漂洗，DAB 顯色復(fù)染后脫水呈透明薄片，再用樹膠進行最后封片，將薄片放置顯微鏡下觀察。

1.2.3 直腸癌患者的病理分期

結(jié)直腸癌TNM 分期系統(tǒng)[4]由美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）和國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC）聯(lián)合發(fā)布，其分期標準為：據(jù)腫瘤浸潤深度代表T，分為Tis、T1、T2、T3、T4，N 代表區(qū)域淋巴結(jié)，M代表腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移，TNM 分期共有5 期，分別為0 期、I 期、II 期、III 期及Ⅳ期。

1.3 觀察指標

（1）分析對比不同組織中PRL-3、XRCC2的表達水平；（2）分析對比結(jié)直腸癌患者不同分期的癌組織PRL-3、XRCC2 表達水平；（3）比較PRL-3、XRCC2 表達與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用平均數(shù)±標準差（）描述，兩兩間使用t檢驗；計數(shù)數(shù)據(jù)采用百分比（%）表示，并采用卡方χ2檢驗；均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較不同組織PRL-3、XRCC2 的表達水平

結(jié)直腸癌組織PRL-3 陽性率（69.23%）高于癌旁組織陽性率、XRCC2 陽性率（61.54）也高于癌旁組織陽性率（P＜0.05）。見表1。

2.2 比較不同分期的結(jié)直腸癌組織 PRL-3、XRCC2 表達水平

檢測出結(jié)腸癌組織0-II 期PRL-3 陽性患者有32 例，XRCC2 陽性患者有42 例；而III-Ⅳ期PRL-3 陽性患者有22 例，XRCC2 陽性患者有6例；結(jié)直腸癌組織檢測出 III-Ⅳ期 PRL-3、XRCC2 陽性率均高于0-II 期（P＜0.05）。見表2。

表2 不同分期的結(jié)直腸癌組織PRL-3、XRCC2 表達水平情況[n(%)]

2.3 比較PRL-3、XRCC2 表達與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系

PRL-3、XRCC2 表達與年齡無顯著關(guān)系（P＞0.05）；PRL-3、XRCC2 表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 PRL-3、XRCC2 表達與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系情況［n(%)］

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，目前結(jié)直腸癌發(fā)病年齡多集中在45歲以上的中老年人群，其中男性患者占比多于女性患者[1]。而結(jié)直腸癌早期無明顯癥狀，隨著腫瘤的增大會出現(xiàn)排便失調(diào)、腹瀉、血便、便秘等，還會伴隨不同程度的腹部疼痛，到了癌癥晚期還會出現(xiàn)身體消瘦、營養(yǎng)不良、貧血等[2]。因此，該病需早期診斷排查，預(yù)防癌細胞組織擴散[1]。結(jié)直腸癌患者多伴有肝轉(zhuǎn)移或淋巴轉(zhuǎn)移，據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，有24%的結(jié)直腸癌患者在早期及已經(jīng)出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移，45%的結(jié)直腸癌患者在發(fā)病2-3 年內(nèi)就會出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移，因此，結(jié)直腸癌的死亡率日漸增加，已成為世界前三的惡性腫瘤[1-3]。

PRL-3 是一種分子量22kD 的蛋白酪氨酸磷酸酶（Protein Tyrosine Phosphatase，PTP），通過細胞的生長分化、信息傳遞及物質(zhì)運輸?shù)?。同時，也有研究表示PRL-3 多作用于腫瘤轉(zhuǎn)移[6]。本文研究結(jié)果顯示，PRL-3 表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)；PRL-3 陽性率高于癌旁組織；PRL-3III-Ⅳ期陽性率高于0-II 期。與李海林[7]等學(xué)者在MIF 和PRL-3 在結(jié)直腸癌及肝轉(zhuǎn)移中的表達及臨床意義的研究結(jié)果一致。PRL-3 具有促進細胞遷移增殖等作用，且相比未轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌，有肝臟轉(zhuǎn)移或淋巴轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌表達度更高[7]。原因可能為癌細胞影響了PRL-3 的表達水平，從而使得細胞的遷移增殖等作用加強，加快癌細胞的擴散。

XRCC2 是一種參與同源基因修復(fù)的蛋白質(zhì)，可以維持生物基因的活性和完善整體基因[8]。本研究結(jié)果表明XRCC2 表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)；XRCC2 陽性率高于癌旁組織；XRCC2 III-Ⅳ期陽性率高于0-II 期。推測原因為XRCC2 參與修復(fù)基因，阻礙了癌細胞病灶的擴增，增加了細胞穩(wěn)定性及完整性。XRCC2 表達水平降低導(dǎo)致受損基因無法修復(fù)，促進了癌細胞病灶的發(fā)生。但據(jù)陳建亮[9]等學(xué)者也在X 線修復(fù)交叉互補基因與肝癌進展及預(yù)后的關(guān)系中提出XRCC2 過多表達引起了細胞增殖飽和從而加速了癌細胞病灶的形成。說明XRCC2在癌細胞中的表達機制十分復(fù)雜，而癌細胞病灶的形成與細胞增殖異常也有密切關(guān)聯(lián)[8，9]，但其關(guān)聯(lián)機制仍需進一步臨床研究。

總而言之，應(yīng)用結(jié)腸鏡檢測組織中的PRL-3、XRCC2 表達水平，可以為結(jié)直腸癌患者的臨床評估提供參考，有利于檢測癌細胞的轉(zhuǎn)移、生長，同時檢測病情的發(fā)生發(fā)展。