吳 敏，杜 鵑，王 曼，張 健，阿塔吾拉·鐵木爾，吳 斌,, ，吳忠紅,,

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；

2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所，新疆農(nóng)產(chǎn)品加工與保鮮重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，

新疆烏魯木齊 830091；

3.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品工程學(xué)院，新疆昌吉 831100）

葡萄（L.）是一種世界性的水果，世界葡萄品種已達(dá)800多種。葡萄是一種非呼吸躍變型果實(shí)，貯藏過程中呼吸速率較低，但果梗部位屬于呼吸躍變型，呼吸作用遠(yuǎn)高于果粒，在4 ℃貯藏期間，果梗的平均呼吸作用是果粒的28倍；20 ℃放置3 d后，可高達(dá)12倍。因此，葡萄果梗的品質(zhì)劣變進(jìn)程總是先于果粒，極易發(fā)生失水萎蔫、黃化、褐變，甚至干枯等。果梗褐變通常會(huì)引發(fā)果實(shí)軟化、落粒和腐爛等問題。

果梗褐變是造成鮮食葡萄采后品質(zhì)下降的第二大重要問題，也是鮮食葡萄貯藏新技術(shù)發(fā)展的主要障礙。近年來，控制葡萄果粒腐爛已得到廣泛研究，而對(duì)果梗褐變的關(guān)注較少。果蔬采后貯藏過程易發(fā)生水分損失和細(xì)胞膜透性改變，常伴隨色澤變化，主要表現(xiàn)為葉綠素降解、有色物質(zhì)如茄紅素和花色素苷等合成和木質(zhì)素劣變等。對(duì)消費(fèi)者來說，綠色的果梗代表了新鮮度，因此，褐色果梗嚴(yán)重影響了葡萄的商品價(jià)值。

NO作為一種可自由擴(kuò)散的膜透性信號(hào)分子，參與了果蔬的成熟衰老過程。已有研究表明，NO處理能顯著抑制茄子和番茄色澤的轉(zhuǎn)變，降低葡萄果實(shí)的失重率和褐變指數(shù)，延緩香蕉和哈密瓜電導(dǎo)率的上升，抑制了生菜葉片萎蔫、黃化和褐變。項(xiàng)目組研究發(fā)現(xiàn)，適宜濃度的NO對(duì)無核白葡萄具有顯著的保鮮作用，500 μL/L NO熏蒸濃度延緩葡萄果梗褐變的作用尤為明顯，另有研究表明：NO熏蒸對(duì)木納格葡萄的褐變有顯著抑制作用，該現(xiàn)象與減輕氧化損傷有密切關(guān)系，但NO熏蒸對(duì)葡萄果梗細(xì)胞完整性、色素類物質(zhì)、組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組分的理化品質(zhì)等的影響作用目前尚不清楚。

為了進(jìn)一步闡明NO對(duì)葡萄果梗的保鮮作用，本文以新疆主栽品種“Thompson Seedless”無核白葡萄為研究試材，從理化品質(zhì)和微觀結(jié)構(gòu)角度分析500 μL/L NO熏蒸處理對(duì)采后葡萄果梗色澤品質(zhì)和表皮、韌皮部、維管束、木質(zhì)部、髓心、細(xì)胞壁等細(xì)胞物化形態(tài)的影響特點(diǎn)，旨在為NO在葡萄及其他果蔬保鮮領(lǐng)域中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

無核白葡萄 采收自新疆吐魯番（可溶性固形物含量≥18%）。選擇果串大小一致，果粒無病害、腐爛，果梗健康、綠色的葡萄作為試驗(yàn)樣品，采收當(dāng)天用冷鏈車運(yùn)至新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所冷庫，在 0±0.5 ℃，相對(duì)濕度（Relative Humidity,RH）90%±2%的冷庫中預(yù)冷 24 h。NO氣體（≥99.9%） 廣州世源氣體有限公司；丙酮、石英砂、碳酸鈣粉、1%鹽酸-甲醇溶液、乙醇、冰醋酸、甲醛、二甲苯、石蠟、番紅、固綠、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、戊二醛 烏魯木齊國耀化玻儀器有限公司。

UV-2600紫外分光光度計(jì) 日本島津有限公司；ddS-11A電導(dǎo)率儀 上海大普儀器有限公司；LGJ-10真空冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；S-570型掃描電子顯微鏡 日本日立（HAITACHI）公司；LEICAASP200S全密封式組織脫水機(jī)、LEICAEG1160組織包埋機(jī)、LEICA2245石蠟切片機(jī) 德國萊卡儀器有限公司；PH100-3B41L-IPL石蠟樣品顯微鏡 江西鳳凰光學(xué)集團(tuán)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理 將預(yù)冷后的葡萄隨機(jī)分成2組，放入多孔塑料盒，每盒裝入2串，約1 kg。用500 μL/L標(biāo)準(zhǔn)NO氣體熏蒸葡萄2 h，以未使用NO熏蒸的無核白葡萄作為對(duì)照組。貯藏于0±0.5 ℃，RH 90%±2%的冷庫中，冷藏25 d后，所有樣品均分為三個(gè)樣本，其中兩個(gè)樣品分別轉(zhuǎn)移到兩個(gè)模擬貨架條件下貯藏3 d，貨架溫度分別為8±0.5 ℃（模擬商超水果冷藏柜溫度）和20±0.5 ℃, RH 90%±2%，剩余樣品繼續(xù)冷藏至35 d，開展進(jìn)一步的貯藏效果和貨架期評(píng)價(jià)。貯藏過程中，對(duì)冷藏35 d葡萄果梗進(jìn)行色差和微觀結(jié)構(gòu)分析，對(duì)貨架期葡萄果梗的理化品質(zhì)、色素物質(zhì)積累進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)，冷藏期每隔5 d取樣，貨架期每天取樣。

1.2.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.2.1 色差 參考池銘等的方法進(jìn)行測(cè)定。采用CR-400型便攜式色差儀進(jìn)行測(cè)定，背景為白色，測(cè)定果梗固定位置，讀取、和數(shù)值，正值表示紅色，負(fù)值表示綠色；正值表示黃色，負(fù)值表示藍(lán)色；表示色相，重復(fù)測(cè)定三次。

1.2.2.2 失重率 參考Dilara等的方法進(jìn)行測(cè)定。去除葡萄果粒，用滅菌的剪刀將果梗剪成2±0.5 cm的小段。提前將烘箱溫度升至100～105 ℃。將稱過鮮重（FW）的果梗連同稱量皿，放入烘箱內(nèi)，于100～105 ℃殺青 10 min，然后將烘箱的溫度降到 70～80 ℃左右，烘至恒重。取出裝有果蔬材料的稱量皿，放入干燥器中冷卻至室溫，稱重。用稱重后的重量減去稱重皿重量即干重（dW）。重復(fù)三次，結(jié)果以%表示。

式中：n，n+1分別代表取樣時(shí)間前后兩個(gè)取樣點(diǎn)的檢測(cè)重量，g。

1.2.2.3 相對(duì)電導(dǎo)率 參考Zhang等和王鋒等的方法進(jìn)行測(cè)定。將稱取的6.0 g葡萄果梗置于燒杯中，加入20 mL蒸餾水，在室溫條件下放置12 h后，測(cè)定浸泡液的電導(dǎo)率。再將葡萄果梗煮沸5 min，待液體冷卻后再次測(cè)定電導(dǎo)率，重復(fù)測(cè)定三次，結(jié)果以%表示。

1.2.2.4 葉綠素含量 參考Chen等和曹健康等的方法進(jìn)行測(cè)定。準(zhǔn)確稱量1.0 g果梗凍樣，加入適量的丙酮在冰上研磨成漿，最終定容至50.0 mL。在4 ℃，12000 r/min條件下離心10 min后，取上清液分別在663和645 nm處測(cè)定其吸光值，重復(fù)測(cè)定三次，結(jié)果以mg/kg表示。

1.2.2.5 花青素和類黃酮 參考Shahin等的方法進(jìn)行測(cè)定。稱取2.0 g果梗組織，加入4 ℃ 1%的 HCl-甲醇溶液，在冰浴條件下研磨勻漿后，轉(zhuǎn)入20 mL刻度試管中，定容至刻度，混勻，于4 ℃避光提取20 min。期間搖動(dòng)數(shù)次，然后過濾，取濾液在波長325 nm處測(cè)定吸光值表示類黃酮含量，在波長530和600 nm處測(cè)定吸光值，吸光度值之差表示花青素含量，重復(fù)測(cè)定三次。用不同濃度的蘆丁、花色苷，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算花青素和類黃酮準(zhǔn)確含量?；ㄉ諛?biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.172x+0.002，=0.999；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y=1.206x+0.017，=0.999。

1.2.2.6 超微結(jié)構(gòu)觀察 參考周江和鄭操等的方法，采用電鏡掃描觀察。取果梗部位涉及主莖、次莖和果柄各5 mm的小段，將果梗樣品脫水固定后，通過縱切觀察表面氣孔和裂紋變化，通過橫切觀察不同部位細(xì)胞形態(tài)變化。

1.2.2.7 組織學(xué)分析 參考Christian等的方法進(jìn)行測(cè)定，通過果梗石蠟橫切面觀察。采用番紅-固綠染色法觀察果梗組織不同部位纖維化和木質(zhì)化水平。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2013軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，Sigma Plot 14.0（Systat software Inc, San Jose, CA, USA）軟件作圖，所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS 19.0（SPSS Inc, Chicago,IL, USA）進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）檢驗(yàn)。所有數(shù)值均為三次數(shù)值的平均值，＜0.05表示差異顯著，＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 果梗色差的變化

值的負(fù)值表示淺綠，值越小，說明葡萄果梗越綠，對(duì)0 ℃冷藏35 d的葡萄果梗進(jìn)行色差分析表明（圖1A），在整個(gè)貯藏期間，果梗的值呈上升趨勢(shì)，NO處理組果梗的值均小于0，果梗的顏色呈現(xiàn)綠色，對(duì)照組果梗的值在30 d后均大于0，果梗失去綠色呈現(xiàn)橙色。冷藏25、30和35 d時(shí)，對(duì)照組中果梗值分別高于NO處理組1.66倍、3.67倍和 2.41 倍，差異極顯著（＜0.01）。值越大，說明葡萄果梗褐變程度越小，與值變化趨勢(shì)相反，葡萄果梗的值在整個(gè)貯藏期呈下降趨勢(shì)（圖1B），NO處理組和對(duì)照組在冷藏前期無明顯差異，冷藏15 d后，NO處理組值極顯著高于對(duì)照組（＜0.01），冷藏25、30和35 d時(shí)，NO處理組中果梗值分別高于對(duì)照組62.49%、83.38%和89.62%。貯藏過程中果梗褐變是引起果實(shí)品質(zhì)和商品價(jià)值降低的主要因素，值代表色相，能綜合反映出樣品的顏色，隨著貯藏時(shí)間的延長，果梗的值呈逐漸下降的趨勢(shì)（圖1C），先緩慢下降后快速下降，NO處理組抑制了果梗值的下降，冷藏20 d后，NO處理組值極顯著高于對(duì)照組（＜0.01）。結(jié)果表明，NO熏蒸有效維持了果梗外觀色澤，與百香果對(duì)NO熏蒸的響應(yīng)一致。

圖1 NO熏蒸處理對(duì)果梗色差的影響Fig.1 Effects of NO fumigation on color difference of fruit stalk

2.2 果梗失重率變化

果蔬采后生理學(xué)研究表明，延緩果梗褐變的前提是減少水分流失。由圖2可知，隨著貯藏時(shí)間的延長，處理組與對(duì)照組果梗失重率都在不斷增加，且隨著貯藏溫度的變化而呈現(xiàn)不同的增加速度。在冷藏25 d期間，失重率緩慢增加，且NO處理組的增長趨勢(shì)較為平緩，但貨架期3 d后，NO處理組失重率迅速增加至2.89%～3.00%?？傮w來看，除20 ℃貨架第3 d外，與對(duì)照組相比NO處理均顯著抑制了失重率的增加（＜0.05），也有效維持了果梗的重量。本研究中，NO處理有效抑制了失重率的增加，該結(jié)果與Zhang等的研究結(jié)果一致，NO延緩了貯藏期間果梗的失重，這可能與NO通過氣孔介導(dǎo)調(diào)節(jié)水分散失的作用有關(guān)。

圖2 NO熏蒸處理對(duì)葡萄果梗失重率的影響Fig.2 Effects of NO fumigation on the water loss rate of grape bunch

2.3 果梗電導(dǎo)率變化

由圖3可知，貯藏期間果梗電導(dǎo)率不斷增加，冷藏到15 d后，與對(duì)照組相比NO處理組顯著抑制了電導(dǎo)率的增加（＜0.05），且隨著冷藏時(shí)間的延長，處理組與對(duì)照組之間的差異極顯著（＜0.01）。因此，在冷藏20 d和25 d時(shí)，NO處理組的電導(dǎo)率分別比對(duì)照組降低了12.18%和11.80%。在8 ℃貯藏3 d的貨架期內(nèi)，NO均顯著延緩了電導(dǎo)率的增加，且使電導(dǎo)率推遲1 d達(dá)到78%，與對(duì)照組差異顯著（＜0.05）。與之不同的是，20 ℃貯藏3 d的貨架期內(nèi)，僅在貨架第1 d時(shí)，NO具有極顯著抑制電導(dǎo)率增加的作用（＜0.01）。這可能與NO有效維持了細(xì)胞壁完整性，延緩電導(dǎo)率的增加，延緩衰老進(jìn)程有關(guān)。一般隨著貯藏時(shí)間的延長，細(xì)胞膜受傷害程度不斷增大，細(xì)胞的完整性受到破壞，果實(shí)細(xì)胞膜的相對(duì)電導(dǎo)率相應(yīng)增加，導(dǎo)致電解質(zhì)大量滲透。該結(jié)果與延緩枇杷木質(zhì)化劣變過程中減少電導(dǎo)率的上升、延緩小白菜衰老過程中抑制電導(dǎo)率的增加現(xiàn)象一致。

圖3 NO熏蒸處理對(duì)葡萄果梗電導(dǎo)率的影響Fig.3 Effects of NO fumigation on electrical conductivity of grape rachis

2.4 葉綠素含量變化

據(jù)研究顯示，葉綠素降解或褐色物質(zhì)生成都會(huì)影響果蔬的綠色外觀。由圖4A、4A’可知，在貯藏期間，呈現(xiàn)藍(lán)綠色的葉綠素a隨著貯藏時(shí)間延長不斷發(fā)生降解，冷藏25 d后，對(duì)照組含量降至采摘時(shí)的73.57%，且降解速度與貯藏溫度高低有一定關(guān)系，8 ℃和20 ℃貨架貯藏3 d后，NO處理組含量迅速降至采摘時(shí)的57.76%和43.77%，在貨架期貯藏期間，除20 ℃貨架期貯藏3 d外，處理組與對(duì)照組差異極顯著（＜0.01）。由圖4B、4B’可知，冷藏 15 d 以前，處理組呈現(xiàn)黃綠色的葉綠素b的含量緩慢減少，隨后維持穩(wěn)定，這與葉綠素a含量變化規(guī)律不同，可能由于在暗室中葉綠素b比葉綠素a穩(wěn)定而不易降解，貯藏15、20 d時(shí)處理組顯著高于對(duì)照組（＜0.05），且出現(xiàn)輕微增高現(xiàn)象，可能與NO抑制葉綠素b產(chǎn)生及其與葉綠素a降解產(chǎn)生葉綠素b的加和作用有關(guān)。NO處理組8 ℃和20 ℃貨架貯藏3 d后葉綠素b較采摘時(shí)分別降低了2.97%和3.87%。由圖4C、4C’可知，葡萄采收后總?cè)~綠素含量呈不斷下降的趨勢(shì)，對(duì)照組冷藏25 d后其含量降至采摘時(shí)的80.20%，繼續(xù)在8 ℃和20 ℃貨架貯藏3 d后其含量迅速降至采摘時(shí)的68.39%和60.85%。比較各葉綠素變化量發(fā)現(xiàn)，葉綠素a的降解是引起總?cè)~綠素含量減少的主要原因，其次是葉綠素b。葉綠素a是葉綠素b降解速度的數(shù)倍甚至十幾倍，其中在冷藏末期前者是后者的7.74倍，8 ℃和20 ℃貨架貯藏3 d后前者是后者的為7.61倍和18.97倍。貯藏期內(nèi)，NO對(duì)總?cè)~綠素含量的降低有抑制作用，其中在8 ℃貨架下，與對(duì)照組差異極顯著（＜0.01）。本研究中，NO抑制了葉綠素降解的速度，有效維持了果梗外觀色澤的現(xiàn)象與小白菜和茄子對(duì)NO熏蒸的響應(yīng)一致。

圖4 NO熏蒸處理對(duì)果梗葉綠素含量的影響Fig.4 Effects of NO fumigation on chlorophyll content in grape rachis

2.5 花青素含量變化

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)果梗褐變與酚類物質(zhì)氧化為醌類物質(zhì)存在密切關(guān)系，但未對(duì)花青素含量開展分析。花青素是果蔬呈現(xiàn)紅、橙、藍(lán)、紫等深色的主要成分，與果蔬貯藏過程中的色澤的變化關(guān)系密切。圖5表明，在冷藏前15 d時(shí)，葡萄果梗的花青素含量在112.0～184.7 mg/kg之間，這與青提、紅提、巨峰葡萄果梗中的花青素含量相近，但低于巨玫、夏黑、香悅等葡萄。隨著貯藏時(shí)間的延長和貨架溫度的不斷增加，積累速度不斷加快，而NO處理顯著抑制了花青素的增加（＜0.05）。結(jié)果顯示，冷藏期間NO處理組的果梗花青素出現(xiàn)顯著增加的時(shí)間節(jié)點(diǎn)被推遲了5 d，故在20～25 d期間，花青素含量平均低于對(duì)照組的28.52%，差異極顯著（＜0.01）；與對(duì)照組的相應(yīng)貨架時(shí)間段相比，8 ℃貨架期3 d內(nèi)和20 ℃貨架期2 d內(nèi)，NO處理組中果?；ㄇ嗨睾糠謩e降低了 22.71%和16.06%，差異極顯著（＜0.01）。結(jié)果表明，NO抑制了花青素含量的增加，有效維持了果梗外觀色澤，與西藍(lán)花、生菜、青椒、葫蘆瓜、青蘋果和香梨對(duì)NO熏蒸的響應(yīng)一致。

圖5 NO熏蒸處理對(duì)葡萄果梗中花青素含量的影響Fig.5 Effects of NO fumigation on anthocyanin content in grape rachis

2.6 類黃酮含量變化

類黃酮物質(zhì)大多為淡黃色，是抵御果蔬采后衰老的內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)。由圖6可知，采后葡萄果梗中的類黃酮類含量緩慢增加，維持在較高水平，但隨著貨架溫度的升高，氧化速度不斷增加，剩余含量明顯減少，尤其是20 ℃貨架第2 d和第3 d，類黃酮含量比采摘時(shí)分別降低了11.26%和28.10%，而NO處理抑制了類黃酮含量的降低。但從采后冷藏期和8 ℃貨架期貯藏來看，類黃酮含量變化不大，NO處理組有減緩變化強(qiáng)度的作用，但與對(duì)照組差異不顯著（＞0.05），研究結(jié)果與開心果對(duì)NO熏蒸的響應(yīng)不一致，與百香果對(duì)NO熏蒸的響應(yīng)一致，這可能與不同種類的水果對(duì)NO的敏感程度不同有關(guān)。

圖6 NO對(duì)葡萄果梗中類黃酮含量的影響Fig.6 Effects of NO fumigation on flavonoid content in grape rachis

2.7 果梗表皮微觀結(jié)構(gòu)變化

葡萄果梗部位不僅起著向果粒輸送水分、無機(jī)鹽和有機(jī)物等營養(yǎng)物質(zhì)的作用，而且發(fā)揮著使氣體進(jìn)出漿果的通道作用。對(duì)葡萄果梗進(jìn)行電鏡掃描（SEM）（圖7），結(jié)果表明采后果梗（圖7a）表面并非光滑，但組織緊密，經(jīng)過冷藏后，果梗表面變化明顯，出現(xiàn)許多細(xì)小的皮孔和裂紋，且裂紋居多。隨著貯藏時(shí)間的延長，裂紋的數(shù)量、寬度和深度不斷增加。通過觀察發(fā)現(xiàn)，冷藏前10 d（圖7A’），果梗表皮薄層組織首先發(fā)生收縮，引起皮層褶皺開裂，NO處理組延緩了皮層褶皺開裂（圖7D’）；冷藏至 20 d（圖7B’）時(shí)，木栓層也出現(xiàn)了收縮，呈現(xiàn)網(wǎng)格結(jié)構(gòu)，造成裂紋深度加大，NO處理組延緩了皮層褶皺開裂的面積（圖7E’）；冷藏至35 d（圖7C’）時(shí)，收縮現(xiàn)象延伸至韌皮部，呈龜裂狀，且多層細(xì)胞已出現(xiàn)孔洞化，裂紋深度和開度均有增強(qiáng)。本研究表明，NO熏蒸抑制了裂紋數(shù)量、寬度和深度增加，因此降低了裂紋密度，減少了開裂總面積，從而延緩了果梗衰老和劣變進(jìn)程。與Elena等的研究結(jié)果一致，NO通過抑制生菜葉片表面裂紋數(shù)量和開裂強(qiáng)度，延緩了葉片萎蔫、黃化和褐變進(jìn)程，有效維持了生菜的品質(zhì)。

圖7 NO熏蒸處理對(duì)葡萄果梗表面微觀結(jié)構(gòu)的影響Fig.7 Effects of NO fumigation on the surface microstructure of grape rachis

2.8 果梗組織內(nèi)部微觀結(jié)構(gòu)變化

葡萄果梗組織主要包括表皮、韌皮部和木質(zhì)部。對(duì)葡萄果梗表皮進(jìn)行電鏡掃描（SEM）表明（圖8），對(duì)照組的果梗表皮細(xì)胞緊密（圖8A），韌皮部呈螺旋管狀（圖8D），隨著貯藏時(shí)間的延長，表皮細(xì)胞膨壓變?。▓D8B），細(xì)胞骨架變形，孔洞變大（圖8B、E），骨架呈無規(guī)則，甚至發(fā)生凹陷（圖8C、F），但從NO處理組中觀察到，果梗表皮和韌皮部細(xì)胞的變化速度和程度均得到了減緩（圖8A1～F1）。對(duì)照組的果梗木質(zhì)部隨著冷藏時(shí)間的延長，形態(tài)無明顯變化（圖8G、H、I），但細(xì)胞內(nèi)的結(jié)晶物不斷減少（圖8G、H），甚至到貯藏末期，幾乎無結(jié)晶物體（圖8I），但NO處理組中的結(jié)晶物較多（圖8G1～I(xiàn)1），尤其是冷藏早期（圖8G1）數(shù)量和密度都明顯多于對(duì)照組（圖8G），冷藏后期仍有明顯可見的物質(zhì)（圖8I1）。結(jié)果表明，NO處理組延緩了木質(zhì)部細(xì)胞中無機(jī)鹽和水分的消耗，有效維持了果梗中水分和無機(jī)鹽的含量，減緩了果梗采后品質(zhì)的劣變。與NO減少枇杷和獼猴桃細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，延緩木質(zhì)部中無機(jī)鹽的消耗有類同之處。

圖8 NO熏蒸處理對(duì)果梗微觀結(jié)構(gòu)的影響Fig.8 Effects of NO fumigation on the microstructure of grape rachis

2.9 果梗細(xì)胞組織特性變化

葡萄果梗橫切面石蠟切片顯示（圖9），采后葡萄果梗部位從主莖（I、I+）、次莖（II、II+）到果柄（III、III+）各組織部位差異明顯，比表面積逐漸增加（IIII）。其中表皮組織細(xì)胞層逐漸變薄，木栓化緩慢變厚（II、II+、III、III+）；與主莖和次莖相比，果柄中的韌皮部呈束狀分布的界限模糊，且細(xì)胞層較少（III、III+）；相反，果柄中的木質(zhì)部比例較高，髄芯細(xì)胞很少（III、III+），由此說明，與果粒直接相連的果柄在采后生理功能較弱，貯藏特性敏感。因此，為了評(píng)估果梗采后棕色化合物生成掩蓋或隱藏綠色色素可能性、細(xì)胞骨架變化和木質(zhì)化水平，對(duì)果柄進(jìn)行了組織學(xué)分析（圖10）。結(jié)果表明，隨著貯藏時(shí)間的延長，對(duì)照組中（圖10A～D），果柄表皮細(xì)胞體積不斷變小，細(xì)胞壁逐漸增厚，細(xì)胞骨架緩慢塌陷，細(xì)胞壁木栓化程度不斷增強(qiáng)；表皮綠色物質(zhì)的占比不斷減少，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不斷崩潰，而且棕色物質(zhì)積累快速增加，整體上褐變程度不斷加強(qiáng)。結(jié)果與NO抑制生菜葉片萎蔫、黃化、褐變的結(jié)構(gòu)現(xiàn)象類似，果蔬貯藏期會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞完整性不斷下降的現(xiàn)象，常與細(xì)胞骨架變形、色素沉積、酶促褐變等生理生化反應(yīng)密切相關(guān)。

圖9 采后葡萄不同果梗橫切面組織形態(tài)對(duì)比Fig.9 Comparison of tissue morphology of different rachis cross section in postharvest grape

圖10 NO熏蒸對(duì)果柄橫切面組織分析Fig.10 Analysis of cross section of fruit stalk by NO fumigation

3 結(jié)論

本研究表明，無核白葡萄采后果梗褐變的部分原因是色素物質(zhì)變化和微觀結(jié)構(gòu)的影響。NO有效延遲了葡萄果梗的褐變程度以及電導(dǎo)率的增加，抑制了葉綠素降解和花青素的積累。NO處理減少了果梗表面裂紋數(shù)量和開裂強(qiáng)度、局部組織的凹陷程度，減緩了木質(zhì)部中無機(jī)物的消耗。另外，NO維持了果梗表皮細(xì)胞的體積，抑制了細(xì)胞壁增厚和木栓化，抑制了表皮棕色物質(zhì)的積累，減緩了果梗韌皮部褐化、綠色物質(zhì)被掩蓋、細(xì)胞縮小和骨架變形，從而延緩了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞。研究結(jié)果表明，NO從宏觀和微觀結(jié)構(gòu)上維持了葡萄果梗貯藏品質(zhì)，尤其能有效延緩葡萄果梗褐變進(jìn)程，提高了無核白葡萄采后貯藏性能，是一種具有應(yīng)用前景的保鮮方法。后期可以對(duì)NO影響果梗褐變的機(jī)理展開研究，為NO在葡萄采后貯藏保鮮領(lǐng)域中的應(yīng)用提供更多有力的數(shù)據(jù)。